固相萃取_高效液相色谱法测定粮谷中多种磺酰脲除草剂残留量

1、2009年 6月 第 30卷第 6期食品研究与开发 相比 , 由于前处理比仪器分析方法简单 , 且后续的检测 可实现大量样本的同步检测 , 可缩短大量的检测时间 , 另外 , 该方法具有成本低 , 操作简便 , 敏度也能达到仪 器分析方法 。 因此 , 该方法一经在农兽药残留检测中 应用 , 就得到了各个机构的关注和认可 , 目前已经成为 国际上农兽药残留量检测中比较通用的方法 。 运用本 方法对牛肉和牛奶中玉米赤霉醇残留量的检测表明 , 该方法能从玉米赤霉醇含量为 1.0g/kg 的动物性产 品中检测出玉米赤霉醇成分 , 最低检测限附近的添加 回收率在 72.4%98.6%之间 。 通过与玉

2、米赤霉醇结构 类似物和相关激素类兽药进行抗体结合反应 , 表明该 试剂盒对玉米赤霉醇 、 玉米赤霉酮 、 玉米赤霉烯酮 、 -玉米赤霉烯醇和 -玉米赤霉醇均有交叉反应 。 因此在 检测中应该注意该试剂盒的特异性不高 , 如果遇到可疑样品或者阳性样品还是应该用仪器法进行确证 。 参考文献 :1朱蓓蕾 . 动物性食品药物残留 M.上海 :上海科学技术出版社 ,1994:72-982中华人民共和国农业部公告第 235号 . 动物性食品中兽药最高残 留限量 S.20023Anton F Erasmuson, Bryan G Scahill, David M West. Natural Zeranol

3、in the Urine of Pasture -Fed Ainmals J.J.Agric. Food Chem,1994, 42:2721-27254Thomas R Covey, Dominque Silvestre, Michael K Hoffman, et al. A Gas Chromatographic/MassSpectrometric Screening, Confirmation, and Quantification Method for Estrogenic CompoundsJ.BIOMEDI-CAL AND ENVIRONMENTAL MASS SPECTROME

4、TRY, 1988, 15:45-56收稿日期 :2008-11-16葛宝坤, 赵孔祥, 王云凤, 陈其勇, 高健会, 王伟 (天津出入境检验检疫局, 天津 300456固相萃取 -高效液相色谱法测定粮谷中多种磺酰脲除草剂残留量作者简介 :葛宝坤 (1968, 男 (汉 , 高工 , 研究方向 :食品安全检测技术研究 。摘要:样品中残留的磺酰脲除草剂, 采用 SPE-C18和 GCB 预柱, 进行提取和净化, 利用适当的洗脱溶剂对固相萃取柱上富集的组分进行选择性淋洗,通过高效液相色谱的紫外检测器进行分析测定,外标法定量;结果:在 0.02mg/kg0.5mg/kg加标范围内, 方法的回收率为

5、74.8%105.3%, 相对标准偏差为 2.36%6.33%; 可同时检测 大米 、 小麦 、 大麦 、 高粱 、 荞麦等粮谷中的氯磺隆 、 苯磺隆 、 苄嘧磺隆 、 甲磺隆 、 环胺磺隆 、 乙基氯嘧磺隆 、 嘧啶磺隆 、 吡啶磺隆 、 苯胺磺隆 、 烟嘧磺隆 、 氟嘧磺隆 、 苯醚磺隆等磺酰脲类除草剂 。 关键词:磺酰脲类除草剂; 固相萃取; 高效液相色谱法; 紫外检测! SPE-HPLC DETERMINATION OF SULFONYLUREA HERBICIDE RESIDUES IN CEREALS GE Bao-kun, ZHAO Kong-xiang, WANG Yun-fe

6、ng, CHEN Qi-yong, GAO Jian-hui, WANG Wei(TianjinEntry-Exit Inspection and Quarantine Bureau , Tianjin 300456, ChinaAbstract:One method was build to determine 12sulfonylurea herbicides in cereals by Solid phase extraction-high performance liquid chromatography. Methods The residues of sulfonylurea he

7、rbicides in sample were extracted by acetonitrile and cleaned by SPE (C18and GCB. After separated by HPLC, these compounds were detected by UV detection and quantified by external standard. Results The average recoveries in spiked samples ranged from 74.8%to 105.3%and relative standard deviations be

8、tween 2.36%and 6.33%. The method could simultaneously determine Chlorsulfuron, Tribenuron-methyl, Bensulfuron-methyl, Metsulfuron-methyl, Cyclosulfuron, Chlorimuron -ethyl, Flazasulfuron, Pyrazosulfuron -ethyl, Ethametsulfuron -methyl, Nicosulfuron, Primisulfuron and Triasulfuron in cereals such as

9、rice, wheat, barley, sorghum, buckwheat,etc. The method is simple, rapid, accurate , sensitive and easy to be promoted and applicated. Key words:sulfonylurea herbicide; SPE; HPLC; UV检测分析1272009年 6月 第 30卷第 6期 食品研究与开发图 1色谱条件下 , 标准品色谱图Fig.1Standard chromatograph1. 烟嘧磺隆 (6.0min 2. 甲磺隆 (11.2min 3. 氯磺隆 (1

10、2.2min 4. 胺苯磺 隆 (14.0min 5. 醚苯磺隆 (16.2min 6. 苄嘧磺隆 (20.6min 7. 吡啶磺 隆 (21.5min 8. 苯磺隆 (23.2min 9. 啶嘧磺隆 (27.9min 10. 乙基氯 嘧磺隆 (30.8min 11. 环胺磺隆 (34.2min 12. 氟嘧磺隆 (37.3min 。除草剂是人类在与杂草危害斗争中发明创 造出 的一种强有力的法宝 。 磺酰脲类除草剂是一类新型 、 高效 、 广谱 、 安全的除草剂 , 被广泛用于禾谷作物防除 阔叶杂草及某些禾本科杂草 , 以提高农作物 产量 1-2; 但同时也带来环境和食品的污染 3-4。 因此

11、 , 除草剂的 残留检测越来越受到世界各国的重视普遍关注 。 由于 大多数磺酰脲类除草剂属于长残效除草剂 , 在土壤和 农作物中的持效期长 5, 美国 、 日本等发达国家对不同 农产品中磺酰脲类除草剂 均制定了最高残留限量标 准 。 我国对此类除草剂残留卫生标准的制定 , 目前尚 不健全 , 在农产品中农药残留检测存在很多问题 , 其 中检测手段及方法是不容回避的问题 。 有针对性地选 择我国粮谷生产过程中使用的和我国及主 要出口国 已设定残留限量要求的磺酰脲类 除草剂作为研究对 象 , 建立固相萃取 -高效液相色谱法检测粮谷中多种 磺酰脲类除草剂残留的方法 。1材料与方法 1.1仪器WATE

12、RS 高 效 液 相 色 谱 仪 , 配 有 紫 外 检 测 器 (UVD; 色谱科 12孔固相萃取装置 ; BUCHI 旋转蒸发 器 ; IKA T-25高速均质器 ; 日立离心机 。1.2试剂丙酮 、 乙腈 、 正己烷均为液相色谱纯 ; 冰乙酸为优 级纯 ; 氯化钠 、 无水硫酸钠 , 均为分析纯 , 无水硫酸钠用 前在 550 灼烧 4h 后冷却备用 。瓦 里 安 公 司 :ENVI TM -18(ODS 硅 胶 预 柱 (1g 、ENVI-Carb (GCB 石墨碳预柱 (250mg 。农药标准品 :氯磺隆 、 苯磺隆 、 苄嘧磺隆 、 甲磺隆 、 环胺磺隆 、 乙基氯嘧磺隆 、 嘧啶

13、磺隆 、 吡啶磺隆 、 胺苯磺 隆 、 烟嘧磺隆 、 氟嘧磺隆 、 苯醚磺隆 。 纯度 98%,CHEM.SERVICE 公司产品 。农药标准溶液的配制 :精确称取上述所列适量的12种磺酰脲类除草剂标准品 , 分别用丙酮配制成浓 度为 0.1mg/mL的标准储备溶液 , 储备液保存于 4 冰箱中 , 可使用半年 。 根据需要用乙腈配制成适当浓度的混合标准工作液 , 保存于 4 冰箱中 , 可 使 用 一 个月 。1.3原理样品中残留的磺酰脲类除草剂 , 采用 SPE-C18和 GCB 预 柱 , 进 行 提 取 和 净 化 , 利 用 适 当 的 洗 脱 溶 剂 对 固 相 萃 取 柱 上 富

14、 集 的 组 分 进 行 选 择 性 淋 洗 , 通 过高效液相色谱的紫外检测器进行分析测 定 , 外标 法定量 。称取经粉碎混均后样品 15.0g (过 20目筛 , 于100mL 离心管中 , 加入 20mL 水和 40mL 乙腈 , 高速均 质 3min , 于 3000r/min下离心 10min , 将上清液全部 通过 ENVI TM -18硅胶预柱 , 将滤液转移至 250mL 的分 液漏斗中 , 加入 6gNaCl , 振摇 3min , 取乙腈层 20mL , 加入 10g 无水硫酸钠 , 过滤至鸡心瓶中 , 用旋转蒸发仪 蒸发至干 。用 5%的丙酮正己烷 (5+95 3mL

15、充分溶解残渣 , 转 移 至 离 心 管 中 离 心 5min , 取 上 清 液 2mL , 通 过ENVI-Carb 石墨碳预柱 , 用 2%丙酮 正己烷 3mL 淋 洗 , 弃去洗脱液 , 然后用 3种不同比例 的丙酮正己烷 分 3步依次洗脱并分别收集 :1 5%丙酮正己烷 9mL 洗 脱 , 收 集 洗 脱 液 于 试 管 A 中 , 2 20%丙 酮 正 己 烷9mL 洗脱 , 收集洗脱液于试管 B 中 , 3 50%丙酮正己烷15mL 洗脱 , 收集洗脱液于试管 C 中 。 在氮吹下将上述 3种收集液吹干 , 分别准确加入 0.5mL 的乙腈 , 摇匀 , 供 HPLC 分析使用

16、。m A u检测分析1282009年 6月 第 30卷第 6期食品研究与开发空白试验除不称取试样外 , 均按上述步骤进行 。2结果与讨论2.1方法检出限和回收率称取经粉碎混均后的大米样品约 15.0g (过 20目筛 , 分别以 0.02、 0.10、 0.50mg/kg的水平添加 12种磺 酰脲类除草剂的混合标准溶液 , 按本方法进行加标回 收试验 , 每个水平的添加样品分别重复试验 7次 , 在0.02mg/kg添加水平的平均回收率为 74.8%103.4%, 在 0.1mg/kg添加水平的平均回收率为 75.2%105.0%, 在 0.5mg/kg添 加 水 平 的 平 均 回 收 率

17、为 85.3%105.3%, 其中氯磺隆 3个添加水平的平均回收率在 73.0%78.1%之间 。 2.2方法的线性范围和测定低限分 别 取 适 量 的 12种 磺 酰 脲 类 除 草 剂 标 准 储 备 溶 液 , 氮 气 吹 干 , 用 乙 腈 配 制 成 系 列 工 作 溶 液 , 按 本 法色谱条件测定 , 12种磺酰脲类除草剂在 0.1g/mL10g/mL范围均呈良好的线性 , 其相关系数均 大 于 0.999。称取经粉碎混均后的系列大米样品约 15.0g (过20目筛 , 将混合标准使用液依次稀释后加入 , 按照测 试方法测定样品加标结果 , 根据信躁比 S/N 3对应的 样品加标

18、浓度和取样量 , 计算方法最低检出浓度 , 结 果除嘧啶磺隆 、 苯磺隆 、 吡啶磺 隆的最低检测限为0.02mg/kg外 , 均为 0.01mg/kg。 2.3方法的适用范围为了确定适用性 , 采用空白样品和添加样品的对 照 , 研究小麦和高粱样品中的杂质对检测的干扰和影 响 。 研究表明该方法可适用于大米 、 小麦 、 大麦 、 高粱 、 谷子 、 荞麦等脂肪含量相对较少的粮谷类 。2.4提取方法的确定根据研究对象粮谷样品的基质特点 , 重点研究了极性相对较强的乙腈和甲醇的提取效果 , 结果乙腈的 提取效果远远优于甲醇 。 为了避免植物组织中油脂 、 色素和弱极性杂质的影响 , 选择了极性

19、相对较强的乙 腈作为提取溶剂 。 粮谷样品中含水量低 , 为提高提取 效率 , 预先向样品中加入适量的水之后 , 再用乙腈 提 取 , 试验证明 , 采用乙腈 -水 (2+1 中性溶剂体系进 行 样品提取 , 取得了很好的提取效率 。2.5净化方法的确定为了排除样品中脂肪 、 色素和其它弱极性杂质的干扰 , 选用对弱极性物质有较高吸附容量的 ENVITM-18硅胶预柱 , 进行样品提取液的净化 。 通过硅胶预柱 净化后 , 提取液中大部分的脂肪 、 色素和弱极性杂质被 保留在 ENVITM-18硅胶预柱上 , 使样品提取液中的 干扰物质得以充分净化 。 石墨化碳黑 (GCB 是一种无 论在极性

20、基质或非极性基质中 , 对极性和非极性有机 化合物均有较强富集作用的新型吸附填充材料 , 它能 有效地去除色素 、 大部分低极性杂质和脂肪酸等干扰 物 4。 利用 GCB 这种较为广泛的吸附特征 , 将 ODS 的 提取溶液通过 ENVI-Carb (GCB 石墨碳预柱 , 富集样 液中的待测组分 , 以适当极性的溶剂选择性地提取各 组分 , 实现了多种组分的分离检测 。 为了保证各组分 被选择性地洗脱下来 , 实现多种组分的分组检测 , 采用 不同极性的洗脱溶剂和淋洗量对 ENVI-Carb (GCB 石 墨碳预柱的提取效果进行了探讨 , 从而确定采用丙酮 -正 己 烷 (5+95 混 合 溶 剂 作 为 起 始 溶 剂 , 然 后 采