实验动物学部分

1、实验动物学课程实验内容：1.的基本实验操作2.皮肤移植试验、（或）摘除术3.大鼠实验的基本操作4.大鼠性周期观察1一、实验目的:通过实际操作，掌握的一般操作，的抓取和固定、鉴定、编号、去毛、给药、采血、麻醉、处死，尤其是染色法编号、灌胃、眼球摘除法采血、腹腔注射、脊椎脱臼法处死。二、实验动物：4 只（2 雌 2 雄）三、实验步骤1、 抓取和固定2、鉴定3、 编号（染色法）4、 去毛（脱毛剂法）5、 给药：消化道、腹腔注射、尾静脉注射6、 采血：眼眶后静脉丛、尾静脉、眼球摘除法、断头法7、 麻醉：腹腔麻醉8、 处死：脊椎脱臼法、过量麻醉9、 解剖：9.1 生殖系统：9.1.1 雄性：、鼠蹊腺（在

2、下方，胶质状，透明）9.1.2 雌性：双角、9.2 肾上腺、胰腺、胆囊、甲状腺四、实验结果1、抓取和固定：抓取：抓的尾根部固定：抓住的尾根部，让在粗糙平面上爬行，后拉尾跟部，右手的拇指和食指抓住两耳及其间的颈部皮肤，小指和无名指将尾巴固定在手掌面。2、鉴定：观察与间的距离和二者之间的毛发。雄性：距离长，毛发密（和其2实验一的基本实验操作他部位一样）；雌性：距离短，毛发稀疏。3、 编号：3.1 染色法：3.1.1 用（黄色）在背面染色3.1.2 逆毛发生长方向染色，自毛根开始3.1.3 可编 1-10 号（10 号为不编号）3.2 去毛：脱毛剂：8% Na2S，自毛发根部涂抹3.3 给药：3.3

3、.1 灌胃法：左手抓取固定后，右手持特制灌胃针，沿一侧口角进针，紧贴咽后壁，头后仰以便伸直消化道，进针 2/3 后灌生理盐水 0.5ml3.3.2 注射给药：3.3.2.1 腹腔注射：3.3.2.1.1 从下腹部的两侧进针3.3.2.1.2 进针时针与腹部成 45°。进针后稍微晃动针，如无粘滞感则可注射3.3.2.2 尾静脉注射：一人固定，另一人用左手中指和拇指将尾拉直，食指托住尾部，后右手持带 4 号针头的注射器在图示 A（背面，实为动脉）位置进针注射 0.5ml 生理盐水。注射完毕拔出针头，用无菌棉球止血。尾动脉细小，且贴近皮肤，未注射。尾静脉切面图33.4 采血3.4.1 ：从

4、眼角内侧 0.5cm 处进针。（右图）3.4.2 眼球摘除法：左手抓取用固定，右手持弯头镊在眼球根部将眼球摘除，头朝下，眼眶内血迅速流出。3.5 麻醉：0.5%腹腔麻醉：本重 25g，按 100mg/kg 的药量给药，8 分钟麻醉成功3.6 处死：3.6.1 脊椎脱臼法：按住头部，将尾根部向后上方以短促的拉即可致死3.6.2 过量麻醉：追加 0.5%过量（5ml）腹腔麻醉3.7 解剖：3.7.1 生殖系统：3.7.1.1 雄性：寻找到、鼠蹊腺3.7.1.2 雌性：双角、3.7.2 肾上腺：米粒大小3.7.3 胰腺：位于胃下方，类似于脂肪组织，浑浊状3.7.4 胆囊：芝麻大小，浅绿色，半透明3.

5、7.5 甲状腺：紧贴环状软骨4五、实验讨论1、抓取的感受：性情较温顺，一般咬人，比较容易抓取固定。通常用右手提起尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，将置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将完全固定。在一些特殊的实验中，如进行尾静脉注射时，可使用特殊的固定装置进行固定，如尾静脉注射架或粗的试管。如要进行手术或心脏采血应先行麻醉再操作，如进行解剖实验则必须先行无痛处死后再进行。2、尾静脉注射感受：首先，注射前尾巴用稍热的水浸泡几分钟，有利于注射；其次，先远后尽，不要一开始就从尾根部，那样失败了不好办； 再次，进后注意保持，针尖很

6、容易刺穿的。尾静脉就在尾巴的正左右两边，先用用力擦，可以去掉部分角质，然后按住近心端让充血，就很容易看到了。进针大概 12 厘米是最合适的。尾静脉注射时，可用 4550 度的温水浸润半分钟或用擦拭，可使扩张，同时也可软化表质。以左手拇指和食指鼠尾，使静脉充盈，中指帮助无名指和小指捏住鼠尾末梢，右手持注射器（连 5 号细针头），针头与静脉夹角一般小于 30 度，从距尾尖 2 - 3厘米处进针，此处皮薄易进入，先抽回血，见到血后再缓慢注入少量药液，如无阻力，表示针头已进入静脉，可继续注入。一般推注速度为 0.05 - 0.10ml/秒，一次注入量为 0.05 -0.25ml/10g 体重。如反复注

7、入，应尽可能从尾末端开始，以后根部方向移动注射。5一、实验目的1. 掌握近交系常用的皮肤移植试验（尾背植皮法，尾尾植皮法）。2. 掌握摘除术和大鼠摘除术二、实验步骤1、近交系常用的皮肤移植试验1.1 尾背植皮法1.2 尾尾植皮法2、摘除术2.1 固定、麻醉2.2摘除三、实验结果1、近交系常用的皮肤移植试验1.1 尾背植皮法：1.1.1 将近交系（受体）固定后（已麻醉）背部剪毛，（约 1.5cm×1.5cm 大小），75%常规。用眼科剪在此部位剪开一个 0.3cm×0.3cm 大小的方形洞备用。1.1.2 将近交系（供体）固定后（已麻醉），75%常规鼠尾。用眼科剪沿尾静脉剪开

8、一条缝，用止血钳将皮肤剥下，剪成 0.5cm×0.5cm 大小，刮掉皮片上的结缔组织。1.1.3 将供体皮片（0.5cm×0.5cm 大小）覆盖在受体背部的方形洞（0.3cm×0.3cm大小）内，铺平，用棉球吸去渗出的血液，使植皮紧贴受体的创面，并与宿主的边缘密切吻合。1.1.4 无菌纱布覆盖植皮区，胶布包扎（此步骤本实验中省略）。1.1.5 13观察结果6实验二皮肤移植试验、（或）摘除术1.2 尾尾植皮法（本实验中为自体尾尾移植）：1.2.1 将近交系固定后（已麻醉），75%常规尾部皮肤。1.2.2 固定鼠尾的根部，用 4 号手术刀在鼠尾背部切开一 0.5cm&

9、#215;0.5cm 大小的皮片，尽量不损伤局部，用止血钳将皮肤剥下。1.2.3 将皮片旋转 180°，镶嵌在创面上，棉球吸去局部渗出的血液和组织液，使其尽可能紧贴，可以不包扎。1.2.4 13观察结果（100 天）2、摘除术2.1 固定、麻醉：选雌性，取左侧卧位，以左腹外侧区（左肋弓下缘）为手术区，局部剪毛，75%两遍后，用 0.5%以 100mg/kg 的剂量（本实验：0.5ml）进行腹腔麻醉，5 分钟后静卧于手术台上，呼吸深大而有节律，频率略快，四肢肌肉松弛，麻醉成功。2.2摘除：用手术刀在左肋缘下，取腹正中线平行方向切开皮肤 1cm，腹腔内容物。拨开肠管，找到右肾。在右肾下方

10、找到右侧和右侧角。游离右侧并摘除。局部，缝合腹膜、腹壁肌肉和皮肤。按上述摘除左侧（另一位同学操作）。四、实验讨论1、近交系常用的皮肤移植试验1.1 皮肤移植实验是用于鉴定近交系动物组织相容性是否一致的简单而可靠的方法。1.2 尾背植皮法：将尾部皮肤移植到同品系的异体的背部，通过观察移植皮片和背部其他区域的毛发稀疏和皮肤光泽异同来鉴定二者的组织相容性。如果组织相容性好，植皮色泽与周围一致，没有充血或炎症，移植皮片光泽。若组织相容性基因不纯合，尾后 13被排斥，植皮脱落，背部留下一块。另外，供体皮片应略大于受体创面以充分吻合，以免因皮片边缘缺血坏死而导致愈合后创面周边皮肤不连续。1.3 自体尾尾植

11、皮法：可以鉴定植皮的脱落是否是手术失败而造成。移植将皮片旋转 180°，以利于术后通过毛发生长的方向观察植皮是否存活。72、摘除术、大鼠摘除术2.1摘除术：进入腹腔后，可以先找到肾脏。然后在肾脏下方查找并摘除。2.2 行或摘除术将两侧的或均摘除。8实验三 大鼠实验的基本操作一、实验目的通过实际操作，掌握大鼠的一般操作去毛、给药、采血、麻醉、处死。二、实验步骤1、 抓取和固定，大鼠的抓取和固定、鉴定、编号、2、鉴定3、 编号（染色法）4、 去毛（剪毛）5、 给药：消化道、腹腔注射、尾静脉注射6、 采血：眼眶后静脉丛、尾静脉、眼球摘除法、断头法7、 麻醉：腹腔麻醉8、 处死：脊椎脱臼法、

12、过量麻醉9、 解剖：9.1 生殖系统：9.1.1 雄性：9.1.2 雌性：双角、鼠蹊腺（在下方，胶质状，透明）9.2 肾上腺、胰腺、胆囊、甲状腺三、实验结果1、抓取和固定：左手抓住大鼠的尾根部，右手的食指和无名指卡住大鼠头部两侧，右手的拇指和食指同时捏住大鼠的左上肢。或一把抓住头部两侧及双上肢根部间的距离和二者之间的毛发：2、鉴定（同）：观察与2.1 雄性：距离长，毛发密（和其他部位一样）2.2 雌性：距离短，毛发稀疏3、编号：3.1 染色法（最常用）：3.1.1 用3.1.2 逆毛发生长方向染色，自毛根开始3.1.3 因为大鼠体形大，一般一笼内养 15 只，15 号编号同3.2 同时结合笼子

13、的编号加以区别4、 去毛：4.1 剃毛：可用电动剃须刀剔除大鼠毛发4.2 剪毛：剪毛之前先用湿润5、给药：（实验一所示），采用灌胃法：左手抓取固定后，双下肢及尾部另请一人协助。右手持特制灌胃针，沿一侧口角进针，紧贴咽后壁，头后仰以便伸直消化道，顺利进针后灌生理盐水 0.5ml 6、注射：6.1 腹腔注射：6.1.1 妥善固定大鼠后，从下腹部的两侧进针6.1.2 进针时针与腹部成 45°，进针后稍微晃动针并回抽，如无粘滞感且没有回血则可注射6.2 肌肉注射：大鼠下肢肌肉发达，可在大腿外侧进行肌肉注射6.3 尾静脉注射：一人固定大鼠，另一人用左手中指和拇指将尾拉直，食指托住尾部，11后右

14、手持带 4 号针头的注射器在图示 A（背面，实为动脉）位置进针注射 0.5ml 生理盐水。注射完毕拔出针头，用无菌棉球度较大。止血。尾动脉细小，且贴近皮肤，注射难大鼠尾静脉切面图7、 采血：7.1 眼眶后静脉丛：从眼角外下方或前下方进针，然后立即拔针，用7.2 眼球摘除法：未尝试毛细管取血。7.3 尾静脉采血：大鼠尾部使静脉充盈，用注射针头刺破后，挤压尾部取血，血量较少，仅8、麻醉：到一滴。0.5%9、处死：腹腔麻醉：本雌性大鼠重 350g，按 100mg/kg 的药量给药，10 分钟麻醉9.1 脊椎脱臼法：按住头部，将尾根部向后上方以短促的较大的拉即可致死9.2 过量麻醉：追加 0.5% 1

15、0、解剖：10.1 颅部：过量（2ml）腹腔麻醉10.1.1 视交叉：将大鼠过量麻醉致死后，剪开颅顶部皮肤，颅骨，用镊子咬除颅顶部骨，充分大脑半球。用镊子从额部将脑组织翻至枕后，可见位于颅底的视交叉、视神经和视束（白色10.1.2 垂体：夹断视神经，充分粒大小。10.2 颈部：）颅底，可见位于垂体窝中的垂体，色白，米甲状腺：紧贴环状软骨，较10.3 腹部：10.3.1 肾上腺：米粒大小明显。10.3.2 胰腺：位于胃下方，类似于脂肪组织，浑浊状10.3.3 胆囊：缺如10.3.410.3.5：大鼠：体积较大为双角型，双侧被大量脂肪组织所包裹1211、称重：胃肝脏脾脏肾脏心脏肺双角脏器双肾重量(

16、g)左：1.8 右：1.6 左：1.7 右：1.7 1.816.4脏器肺脏重量(g)左：0.9 右：0.7 1.74.21.3心脏胃(含内容物)脾脏肝脏四、实验讨论1、 抓取和固定：（1） 大鼠牙齿和爪子锐利，个头大，抓取时要（2） 初学者为确保安全，可佩戴棉纱手套。，不要被其抓伤或咬伤。（3） 提尾部靠近尾根部提取，以防大鼠身体摇晃，或扭头过来咬人。（4）2、不容易固定时，可另请另一人协助操作。鉴定：同。另外健康雄性大鼠的体重明显超过同龄雌性大鼠4、编号：（1）常用染色法，也可用专门打孔器进行耳部打孔编号。（2）大鼠体形大，笼养数量有限，可结合染色和笼子编号以区别，方便实验。5、给药：采用灌

17、胃法：（1）为最常用的给药。（2）待固定稳当后再进针。（2）如进针不顺，须暂停操作，以免激若大鼠，妨碍实验顺利进行。6、注射：6.1 腹腔注射：注意妥善固定，最好一人固定头部和上肢，另请一人固定双下肢和尾部， 以免进针时大鼠挣扎妨碍操作6.2 肌肉注射：要选择肌肉丰满耳无大通过的大腿外侧进针6.3 尾静脉注射：尾静脉鳞片厚，虽然肉眼可见，但率低，一般少用。137、采血尾静脉采血：对动物损伤小，采血后率低，适用于大鼠的血糖监测。8、 麻醉：对于不同，由于对的耐受性不同，在麻醉过程中应随时检查动物的呼吸和外周血液循环、心跳等反应，剂量不够时可适当加量9、 处死选择原则：（1）尽量避免因处死不当而造

18、成病理损害，影响实验结果（2）尽量使动物快速、安静、无痛苦10、解剖：（1）颅部：大鼠视神经发达，很容易找到视交叉。（2）胆囊：缺如，这是与的不同之处。14实验四 大鼠性周期观察和大鼠急性肺水肿模型建立实验动物：SD 大鼠 1 只（雌）【实验目的】1 通过实际操作掌握大鼠涂片的制作和性周期观察。2 通过实验掌握大鼠急性肺水肿模型的建立，了解诱发型动物模型的制作。【实验步骤】一、大鼠性周期观察1、 固定大鼠：左手抓取大鼠，食指和中指卡紧大鼠颈部，拇指和无名指握住胸部，小指固定腹部，右手拉住尾部和双下肢，稍用力后拉，充分雌鼠的。2、液、涂片：另一人用滴管吸生理盐水 2 滴，大鼠深部，冲洗 3 次，

19、吸出冲洗液，分别滴 1 滴在两个载玻片上，用第 3 块玻片推片，自然晾干（10 分钟）。3、 染色和镜检：用染液染色 30 分钟，细流水冲洗，然后在显微镜下观察。二、 大鼠急性肺水肿模型的建立1、 氯化铵腹腔注射：按上述固定大鼠后，抽取 6%氯化铵 3.5ml（本大鼠重量 360g，按1ml/100g 药量），从左侧下腹部进针，无粘滞感后注射氯化铵。8 分钟后仅见大鼠活动减少无其他异常改变，又追加 6%氯化铵 0.5ml2、 尸体解剖：大鼠出现兴奋、肌肉震颤，继而后立即尸体解剖，直接打开胸腔，结扎交叉稍上方，自结扎处上方剪断，游离周围组织和心脏，取出肺脏，观察形态学改变，并在台式称上称重。3、

20、 计算肺重量系数=肺脏重量（g）/ 大鼠体重（g）×100%。【实验结果】一、 大鼠性周期观察脱落细胞涂片、染色、镜检：显微镜下看到大鼠间期的部分改变：有核细胞和少量上皮细胞，也看到少量胞。右图所示为 20×显微镜下观察到的情况。15二、 大鼠急性肺水肿模型的建立1. 腹腔注射 6%氯化铵 3.5ml 后大鼠的活动明显减少，呼吸急促，出现肌无力，静俯于桌上。20 分钟后首先出现张口呼吸，点头样呼吸，口唇，鼻翼，约 15 秒钟后出现肌肉震颤，持续约 30s，然后发生、，最后死于呼吸衰竭。如下图所示。2. 尸体解剖：肺肿胀，包膜紧张，大部分肺表面出现暗红色斑块，切开有少量红色样

21、液体流出;胸腔内有液体积聚，如下图。3. 将结扎后，称取全肺质量，为 4.3g，实验前称取大鼠质量为 385g则本实验中，16肺重量系数=肺脏重量（g）/ 大鼠体重（g）×100%=4.3g/385g×100%=1.11%1%【实验讨论】1 大鼠性周期观察a) 大鼠性周期为 45 天，由于大鼠有昼伏夜行的习性，一般在下午不能看到大鼠的期。本大鼠处于间期b) 大鼠的一般在 24 小时后脱落。所以观察期间笼具必须保持整洁，不能放置刨木花。看到说明交配，受孕率为 7080%。c) 大鼠春秋两季的受孕率较两季高。d) 大鼠性周期脱落细胞变化情况如下表所示表 1 大鼠性周期脱落细胞变化情况后期阶段前期期间期第一阶段第二阶段胞，有大量圆形有大量角化上少量角化无角化上皮细核、无核上皮脱落细核上皮细胞，皮细胞（无