实验五葡萄糖相对分子量的测定及渗透压对细胞形态的影响

1、 实验五 葡萄糖相对分子量的测定及渗透压对细胞形态的影响【目的要求】1学习利用凝固点降低法测定溶质的相对分子量及溶液的渗透压。2掌握低渗、等渗、高渗溶液的配制。3观察细胞在渗透压不同的溶液中之形态。【基本原理】将溶质溶于溶剂中，溶剂的凝固点则降低，即溶液的凝固点低于纯溶剂的凝固点。溶液的浓度很稀时，溶液凝固点降低值与溶液的质量摩尔浓度成正比。Kf·mB式中，为纯溶剂的凝固点；为溶液的凝固点；为溶液的凝固点降低值；Kf为溶剂的摩尔凝固点降低常数。若称取溶质m(g)，溶剂W(g)配成稀溶液，则溶液的质量摩尔浓度为：·1000式中，mB为溶液的质量摩尔浓度；M为溶质的摩尔质量。已

2、知溶剂的Kf值，测得溶液的凝固点降低值，可运用下式计算出溶质的摩尔质量，即得溶质的相对分子质量：·根据范托夫渗透压计算公式及溶液的凝固点降低值，可计算出溶液的渗透压：式中，R为8.314×103Pa·L·mol-1·K-1；T为热力学温度。人体正常红细胞呈扁圆形，边缘厚，中间薄。在等渗溶液中，其形状不变；在低渗溶液中细胞易溶胀破裂；在高渗溶液中易皱缩形成血栓。【仪器和药品】凝固点测定装置，光学显微镜，血色素吸管（20l），6号注射针头，0.1分度温度计，载玻片，盖玻片，葡萄糖（分析纯），粗食盐，冰，70%酒精消毒棉球，消毒干棉球，5%(W/W)

3、 葡萄糖标准溶液。【实验步骤】1凝固点降低法测定葡萄糖相对分子质量（1） 制冰盐水混合物：在玻璃缸或大烧杯中，加自来水适量，约占容器体积1/3，放入外搅拌器，加足量小冰块和粗食盐至饱和，控制温度在24，为保持此温度，实验过程中应及时补充冰和粗食盐。（2） 纯溶剂水的凝固点测定：取蒸馏水40ml置冰点管中，按图3-5-1装置，然后均匀地上下搅拌冰点管内的水，同时不断搅动冰水浴，直至管内有冰晶析出。此时温度略有回升，待温度恒定时，记录数据，可借助于放大镜观察读数，读取至小数点后第2位。取出冰点管，待冰晶融化，重复测定1次，取其平均值为纯溶剂水的凝固点。（3）葡萄糖溶液凝固点测定：用待测葡萄糖溶液冲

4、洗冰点管3次。取40ml5%(W/W)葡萄糖标准溶液，注入冰点管中，按上述方法测定葡萄糖溶液的凝固点。重复测定1次，取其平均值即为葡萄糖溶液的凝固点。（4）数据处理见下表：测定项目 第1次 第2次 平均值 水的凝固点葡萄糖溶液的凝固点葡萄糖的相对分子质量M葡萄糖溶液的渗透压2观察红细胞在低渗、等渗、高渗溶液中的形态（1）配制不同渗透压的溶液：取固体葡萄糖按下表配制成3种浓度的溶液。 取3支洁净干燥小试管，分别注入1ml上述所配制的溶液备用。（2）红细胞混悬液的制备：采血可在手指或耳垂部，通常以耳垂取血较好，不易感染。取血时轻柔耳垂片刻，用70%酒精消毒棉球擦洗耳垂部，待酒精稍干后，手指夹住耳垂，用消毒注射针头（酒精灯上烧红亦可）快速刺破耳垂下缘，轻轻挤压耳垂，第一滴血用干棉球擦去，然后用血色素吸管吸耳血液，在上述3支试管各注入血液10l，摇匀，即得红细胞混悬液。（3）观察红细胞形态：从上述3支小试管中，各取一滴红细胞混悬液，分别滴于载玻片上，盖上盖玻片，置于显微镜载物台上，转动粗调焦轮，使低倍镜（110）于最低位置（注意勿将盖玻片压碎），然后边观察边调节粗调焦轮，使镜头由低向高移动，调至血涂片中红细胞形态清晰，再换用高倍镜（145）观察，调节微调焦轮至镜内成像清晰可见。观察比较3种浓度溶液中红细胞的形态。必要时，可与标准血涂片比较。【问题讨论】