百恩维生物产品与服务手册_图文

1、 公司简介百恩维生物科技有限公司(Biowit Technologies Ltd. ,是一家专业从事生物技术研发并 提供相关产品和服务的高新技术企业。 百恩维生物科技有限公司集研发、 生产、 营销和服务 于一体,为客户提供基因、蛋白、细胞系等生物技术研发所需的相关产品和技术研发服务。 公司目前提供的产品和服务主要包括 DNA 和基因的克隆、 各种病毒的包装、 基因表达及蛋白 产物的分离纯化、 干细胞培养液、 干细胞分离和存储以及适于临床用的个体特异性诱导型多 能干细胞的制备和存储。 公司的长期目标是推出人类重大疑难疾病的干细胞治疗及基因治疗 临床方案和预防措施,重点研究神经疾病、视网膜疾病、白

2、血病、血友病、艾滋病和肝炎的 干细胞治疗和基因治疗方案,及提供高效的预防动物或人的传染病、流行病的疫苗。百恩维目前的员工绝大多数为技术人员, 其中大部分具有硕士以上的学历。 主要技术骨 干曾在国内外知名学府和国际一流制药公司从事研发多年,公司拥有由在分子操作、 蛋白 质分离与纯化、 病毒包装、 干细胞培养与标记、 转基因模型研究领域等方面成果卓越的国内 外知名专家领头的专业技术研发团队。百恩维与国内外知名大学、中科院以及医科院等知名科研机构建立了良好的合作关系。 这种广泛的国际、 国内科研合作, 有利于发挥各自优势, 确保百恩维生物在干细胞研究领域 的技术能够持续更新。百恩维引进了国际先进的设

3、备、 国际规范的质量保证体系及先进的工艺流程, 始终坚持 质量至上的宗旨,致力为客户提供最好的服务。百恩维将本着“ 专注、创新、诚信、和谐 ”的企业理念,为生物技术能够为人类健康造 福而不懈追求!百恩维生物 1 主要产品一、 细胞因子  细胞因子是一类能在细胞间传递信息、 调节细胞增殖或分化、 或调节 机体免疫应答的蛋白质或小分子多肽, 广泛用于细胞培养。 我们提供各种纯化的细胞因子 (cytokine, CK 例如 bFGF 、 TGF 、 TGF 、 NT3、 EGF 、VEGF 、 BMP2、 IFN 、 G-CSF 、 GM-CSF 、 Myostatin 。二、 重编程因子

4、  重编程因子(SOX2、 OCT4、 KLF4、 C-MYC 、 NANOG 经过了进 一步改造,使其不仅能有效地跨越细胞膜进入细胞质,而且能有效地进入细胞核。 经纯化后的重编程因子可用于制备非整合性的个体特异性 iPS细胞, 也可用于结构和功能分析。三、 重编程细胞抽提液  重编程细胞抽提液中含工程化重编程因子(SOX2、 OCT4、 KLF4、 C-MYC 、 NANOG , 这些因子能高效进入细胞及细胞核,可用于制备安全的非整合型个体特异性 iPS 细胞。四、 重编程病毒  1. 整合型慢病毒和逆转录病毒  提供携带细胞重编程因子的整合型慢病毒和

5、逆转录病毒,其携带的因 子有 SOX2、 OCT4、 Klf4、 C-myc 、 Lin28和 Nanog 。这些病毒可以用于常规的细胞重编程和 iPS 细胞的制备。2. 非整合慢病毒和昆虫杆状病毒  昆虫杆状病毒是非整合型病毒,不仅可感染昆虫细胞,而且还能有效地感染人、鼠等多种哺乳类细胞,是基因表达的又一个好体系。为获得安 全性更好的 iPS 细胞,我们研发出非整合型的慢病毒和昆虫杆状病毒,其携带的重编程因子有 SOX2、 OCT4、 Klf4、 C-myc 、 Lin28和 Nanog 。 百恩维生物 2 主要技术平台及服务  一、 分子克隆平台及相关技术服务

6、  我们的分子克隆平台主要包括调控元件的克隆,基因修饰,基因报告系统、基因表达系统 和转基因载体的构建。 基于分子克隆技术平台,我们提供的服务包括任何 DNA 片段的克隆,包括任何 DNA 调控 元件的克隆及 ShRNA 基因干涉质粒、 基因表达、 基因打靶等质粒的构建。 表达系统包括 E. coli、 昆虫及哺乳类细胞。1. 一般性 DNA  克隆服务  以动物组织或细胞提取的 gDNA 或者 cDNA 为模板, 或由客户提供已带有欲克隆基因片段或各功能元件片段的载体。 应客户要求, 将基因片段或者各功能元件片段亚克隆至各载体。2. 特殊的 DNA 克隆服务 &

7、#160; 1 多 ShRNA 干涉 construct 的构建将多个 ShRNA 同时克隆到一个载体上,可作用于同一个基因,其沉默效率高达 90%以上,甚至接近 100%。该系统免除了建立常规ShRNA 基因干涉系统的最佳序列摸索过程,可真正替代传统的基因沉默技术和基因敲除技术。 百恩维生物 3 2 哺乳类细胞附加体非整合表达系统的构建建立的哺乳类细胞附加体非整合表达系统,其附加体可以象质粒一样在哺乳类细胞内复制 形成多拷贝但又不整合到细胞的基因组中,因此既能实现基因的高表达又免除了基因整合所带 来的副作用。另一方面,附加体载体的 DNA 装载量异常之大,几乎可容纳任何大小的基因。

8、因 此,我们建立的附加体非整合表达系统免除了常规基因修饰、基因表达和基因治疗过程中合适 载体筛选的繁琐过程。二、 病毒包装平台及相关技术服务  可提供多种高滴度的病毒包装服务, 包括 DNA 整合型慢病毒和非整合型慢病毒 (lentivirus 、 逆转录病毒 (retrovirus 、各种血清型的腺相关病毒(AAV 及昆虫杆状病毒(baculovirus 。 利用我们的病毒包装技术,对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细 胞等,能大大提高目的基因转导效率,而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加, 这就为 RNAi,cDNA 克隆以及报告基因的研究提供了一个有

9、利的途径; 而且还用来进行稳转细胞 株的筛选;还可以为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒液。最重要的是,病 毒系统经过优化,解决了常规病毒包装方法滴度不高,纯度不高的问题。1. 整合型慢病毒和逆转录病毒包装服务  整合型慢病毒和逆转录病毒既可感染分裂细胞也可感染非分裂细胞,可装载达长度达 10kb 以上的 DNA 片段,比瞬时转染更适合用于 构建稳定表达细胞株。 包装质粒可提供所有的转录并包装 RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助因子。 利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,可产生高滴度的病毒颗粒,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表

10、达效应分子。 2. 非整合型慢病毒和逆转录病毒包装服务  非整合型慢病毒和逆转录病毒既可感染分裂细胞也可感染非分裂细胞,还很容易感染人、 猴、鼠等绝大多数哺乳类细胞,可很好的替代传统的 DNA 瞬时转染,并且免除了常规 DNA 瞬时转染的条件摸索过程 (包括转染试剂的选择 及剂量比的摸索 。通过改造传统的慢病毒的包装信号和跨膜运输信号, 建立高效的 DNA 非整合型导入系统, 并不破坏宿主细胞的基因组,不仅可产生与整合型慢病毒同样高滴度的病毒颗粒,还可避免整合型慢病毒因 DNA 整合到宿主细胞所带来的副作用。3. 腺病毒包装服务  腺病毒的结构蛋白在细胞核内聚集形成病毒衣壳

11、,病毒的基因组被包装进去,形成有感染 能力的病毒颗粒,并最终裂解宿主细胞被释放出去,完成腺病毒的生活周期。腺病毒有明显的种属特异性,例如人的野生型 5型腺病毒感染其他的非人类细胞(如鼠类细胞后可以表达早期基因,基因组也可有一定程度的复制并能够形 成一些不成熟的病毒颗粒,却不能形成成熟的病毒颗粒,也不能二次感染其他细胞。腺病毒具有宿主范围广,能在增殖和非增殖细胞中感染和表达基因;能有效进行增殖,滴度高;与人类基因同源;不整合到染色体中,无插入致突变性 , 对人致病性低;能在悬浮培养液中扩增;能同时表达多个基因等优点。4. 腺相关病毒包装服务  腺相关病毒(AAV 是一类微小、无被膜及具

12、有二十面体结构的病毒。多数情况下, AAV 在培养的正常细胞中不发生产毒性感染, 只在有辅助病毒包括腺病毒或疱疹病毒共同感染时才发生产毒性感染, 长期以来被认为是一种缺 陷性病毒。 因此, AAV 被广泛用于基因表达载体的构建以及基因治疗。我们提供各种血清型的 AAV 包装服务,对于 2/2型 AAV ,我们还提供了一种特殊的浓缩与纯化方法,提高了病毒颗粒的纯度和滴度。5. 昆虫杆状病毒包装服务  昆虫杆状病毒不仅可以感染昆虫细胞,也可将外源基因导入各种哺 乳类的细胞,如人体细胞、小鼠细胞等。因此昆虫杆状病毒因此可能成为哺乳动物基因治疗的媒介载体,有望在未来人类的基因治疗中得到应用。

13、我们提供的相关服务包括制备高滴度、高纯度的病毒颗粒。三、 蛋白平台及相关技术服务  公司装备有先进的蛋白表达、放大与纯化设备,如发酵罐、多功能生物反应器、 Stansted 超高压纳米均质机、 GE QuixStand 膜分离系统、 GE AKTA系统等,提供各种表达系统的构建、 产物的纯化和放大以及工艺的优化。提供从各种不同规模的表达体系中高效表达、分离及纯化 目标蛋白的工艺优化服务。对于工程菌,我们提供从摇瓶培养到高密度发酵的优化方案。若表 达产物形成包涵体,我们还提供蛋白复性服务。对于各种哺乳类细胞,我们不仅提供小规模平 皿培养的条件优化,也提供贴壁培养和悬浮培养的放大工艺的优

14、化。 1. E.  coli  表达与纯化服务  提供载体构建、表达检测、高密度发酵、蛋白纯化等多项服务,也可以为客户优化载体表 达与蛋白分离的条件。2. 哺乳细胞表达与纯化服务  提供载体构建、瞬时转染、表达检测及大容量细胞培养表达和蛋白纯化等服务。3. 昆虫细胞表达与纯化服务  提供昆虫杆状病毒表达载体构建、表达检测及大容量细胞培养表达和蛋白纯化等多项服务。4. 哺乳类稳定表达细胞株服务  我们提供慢病毒表达质粒构建、病毒包装和稳定细胞株筛选等多项服务。四、 组织干细胞平台及相关技术服务  成体干细胞经常位于特定的微环境

15、中。微环境中的间质细胞能够产生一系列生长因子或配 体,与干细胞相互作用,控制干细胞的更新和分化。许多成体的组织和器官,比如表皮和造血 系统,具有修复和再生的能力。成体干细胞在其中起着关键的作用。在特定条件下,成体干细 胞或者产生新的干细胞,或者按一定的程序分化,形成新的功能细胞,从而使组织和器官保持 生长和衰退的动态平衡。最近研究表明,以往认为不能再生的神经组织仍然包含神经干细胞, 说明成体干细胞普遍存在,问题是如何寻找和分离各种组织特异性干细胞。我们建立了高标准 的细胞培养室, 整体洁净度可达百级, 可提供各种组织干细胞分离和存储服务 , 包括人脂肪肝细 胞、骨髓间充质干细胞、脐带血干细胞,

16、并建立个体特异性组织干细胞库,用于干细胞治疗。1. 干细胞分离与培养服务  将细胞从活体组织上分离出来,利用细胞永生化技术,把微量的干细胞进行细胞培养,可 高效放大, 并不降低其分化的潜能。2. 干细胞标记服务  对干细胞的基因组进行修饰,如将编码荧光蛋白的基因表达盒稳定整合到干细胞的基因组 中,便于示踪干细胞的分化去向,即示踪其子代细胞的类型。 五、 iPS 细胞平台及相关技术服务  提供个体特异性 iPS 细胞(诱导多能干细胞的制备和存储服务 , 将个体特异性体细胞重 编程成各种类型的 iPS 细胞,包括 DNA 整合型和非整合型,并建立个体特异性 iPS 细

17、胞库, 用于干细胞治疗。我们还提供各种荧光标记的 iPS 细胞,以便于示踪 iPS 细胞的分化去向,即 示踪其子代细胞的类型。 六、 细菌  / 细胞株平台及相关技术服务  提供各种工程菌和遗传修饰的细胞株的建立服务。包括高效表达的工程化大肠杆菌的建立, 以及各种哺乳类(如人体细胞、小鼠细胞、大鼠细胞、猪细胞、猴细胞等细胞系的构建包括 荧光标记、稳定表达、基因沉默和基因敲除。 主要设备Millipore纯水系统 ABI 9700 PCR 扩增仪 AKTA Bio-Rad Gel Doc 成像系统 MicroChemi 成像系统 荧光显微镜 发酵罐 多功能生物反应器 百恩维生物 9 Stansted 超高压纳米均质机 GE QuixStand 膜分离系统 Thermo Scientific 高速离心机 生物安全柜 百恩维生物