22《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》学案况家茂

1、课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数考点要求1 研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。2.能利用选择培养基分离细菌，运用相矢技术解决生产生活中有尖微生物的计数。双基过矢一、理论基础1. 筛选菌株(1) 实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于等)，同时或其他微生物生长。生长的条件(包括营养、温度、pH(2) 选择培养基：在微生物学中，将允许一微生物生长的培养基，称作选择培养基。(3 )配制选择培养基的依据种类的微生物生长，同时和其他种类根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培

2、养;的微生物加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。2. 统计菌落数目(1 )测定微生物数量的常用方法有和(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的 够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板逬行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。3. 设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。二、实验设计矢于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1. 取样：

3、从肥沃、湿润的3 cm左右，再取土壤中取样。应先一样，将样品装入事先准备好的一中。2. 制备：准备牛肉膏蛋白腺培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白脓培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白脓培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。3. 微生物的与观察将10g 土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液一，转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、IO?依次等 比稀释至稀释度，并按照由107IO?稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。每将涂布好的培养皿放在30C个稀释度下需要3个

4、选择培养基、1个牛肉膏蛋白月东培养基。温度下培养，及时观察和记录。斜面中，爛睦瞬培贈醋琳护同形态的菌落接入含培养基的4细菌的计数210的颜色反应。当菌落数目稳定时，选取菌落数在个平板进行重复计数， 出菌的数目。毀書棗进行计数。在同一稀释度下，至少对 :并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细三：思考与讨论(1)如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数?(2)为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数 量，选用的稀释范围相同吗？四：典例分析类型一选择培养基的配制【例1】分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HP04、MgSO4 7H20、

5、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答：(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别和(2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，又是如何进行选择的类型二统计菌落数目【例2】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为中得到以下几种统计106的培养基结果，正确的是A涂布了一个平板，统计的菌落数是B涂布了两个平板，统计的菌落数是C涂布了三个平板，统计的菌落数分别是D涂布了三个平板，统计的菌落数分别是230215和260,取平均值23821、212和2墨6，取平均值163210、240和250,取平均值233类型三设置对照【例3】用来判断选择培养基是否起到了选择作

6、用需要设置的对照是A .未接种的选择培养基B 未接种的牛肉膏蛋白陈(全营养)培养基C .接种了的牛肉膏蛋白腺(全营养)培养基D 接种了的选择培养基 基础自测一、选择题1 . PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受你来寻找这 93C左右的高温。如果请 种耐高温的酶，你会去哪里寻找()A土壤中海水中C .热泉中D.冷库中2 下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是A . KH2PO4、Na2HP04、MgS04 7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水B . KH2PO4、Na2HP04、MgS04 7H2O、葡萄糖、琼脂、水C. KH2PO4、Na2HPO4、MgSOq 7H2O、尿素、琼脂

7、、水D . KH2PO4、Na2HP04、MgS04 7H20、牛肉膏、蛋白腺、琼脂、水;3.某冋学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为o.1 mL).()A . 2.34 氷 0B . 2.34 X0C 234D. 23.44在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应1 06培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同 学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因()由于土样不同由于培养基污染由于操作失误没有设置对照A gB .噩C .(D®®D .(D®®5矢于土壤取样的叙

8、述错误的是0A 土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤B .先铲去表层土 3cm左右，再取样C .取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D .应在火焰旁称取土壤6下列矢于从土壤中分离细菌的操作步骤中，正确的是(土壤取样称取10g 土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中行平板涂布 依次 吸取0.1 mL进 稀释至 10、102、103、1。4、1。5、1。6、107 稀释度A 777B 777C 777D 7777.下列矢于测定土壤中细菌数量的叙述，正确的是 A .一般选用103IO?倍的稀液分别涂布B 测定放线菌的数量，一般选用C .测定真菌的数量，一般选用D.当第一次测量某种细菌的数量，103、I

9、O 4和105倍稀释103、104和IO：倍稀释可以将 1107倍的稀释液分别涂布到平板上8.下列矢于微生物的培养叙述错误的是A .细菌一般在3037C的温度下培养12 dB 放线菌一般在2528 C的温度下培养57 dC .霉菌一般在2528 C的温度下培养34 dD .不同种类的微生物，一般需要相同的培养温度和培养时间9.下列操作需要在火焰旁进行的一组是( )土壤取样称取土壤稀释土壤溶液涂布平板微生物的培养c10.B .®o)®(5)®D .下列口J以鉴定出分解尿素的细菌的方法是A以尿素为唯一氮源的培养基中加人酚红指示剂B以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试

10、剂C以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹川试剂D 以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩腺试剂11. 土壤取样时最好选择哪种环境中的土壤做分离细菌的实验A .街道旁 B .花盆中C 农田中D .菜园里二、非选择题12. 统计菌落数目一般用稀释涂布平板法，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个，来源于样品稀释液中的一个。计数时一般选择菌落数在的平板计数。13. 在做本课题实验时，一位同学在稀释倍数为106的培养基中涂布了 3个平板，统计的菌落数分别为21 >212和256，该同学以这3个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这一结果 是否接近真实值？如果需要改进，如何改进？14.

11、在进行操作本课题实验时应特别注意： 、。15. 在做本课题实验时，甲同学筛选出的菌落与其他同学不同，并且他在设计实验时并没有设置对照。思考下 列问题：(1) 你认为出现甲同学这种结果的原因可能是什么？(2) 要帮助甲同学排除可能影响实验结果的因素，需要设置，实验方案有两种：一种方案是可以由其他同学用与甲同学进行实验，如果结果与甲同学一致，则证明甲同学，如果结果不同，则证明甲同学存在操作或的配制有问题。另一种方案是将甲同学配制的培养基在不加的情况下进行培养，作为空白对照，证明培养基是否受到(3) 由此问题你得出的启示是什么16 在105稀释度下求出3个平板上菌落数的平均值是63,那么每克样品中的

12、菌落数是多少？参考答案：一、1 (1)目的菌珠抑制阻止(2)特定抑制阻止(3)自养能固氮的微生物；2(1 )有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。(2).稀释度 细菌 30-300显微镜3.非测试因素可信度无杂菌污染二、1 土壤，铲去表层土。2.培养基多于对照均数3.培养 1 ml 9ml 0.1 mL 4.30-300三：思考与讨论1统计某一稀释度下平板上的菌落数，然后按课本旁栏的公式进行计算最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，2这是因为土壤中各类微生物的数量本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为(单位：株/kg )是不同的，例如在干旱土壤中的上层样2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为

13、23.1万。同时还应当有针对性地提此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离， 供选择培养的条件。四：典例分析类型一选择培养基的配制1解析：碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是 尿素。绝大多数生物都能 利用葡萄糖，但是，只有能合成腺酶的微生物才能分解尿素，所以这种培养基对微生物有选择作用。选择的原则是只 有能够利用尿素的微生物才能够生长。答案：(1)葡萄糖尿素9)有选择作用。因为此配方中尿素是唯一氮源，因 此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。启示：选择培养基筛选微生物的原理：人为提供有利于目的茵株生长的条件度、pH等)，同时抑(包括宫养、温

14、 制或阻止其他微生物生长。2解析：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板.作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了 3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能岀现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。答案：D启示：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组；在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需重新实验。3解析：将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白陈培养基上生长的菌落数目应明显多于选 择培养基上的数目，因此， 牛肉膏蛋白陈培养基作为对照。对照遵循的原则是单一变量，所以与选择培养基一样接种、培养。答案：C启示：对照实验是指除了被测试的条件以外，其他条件都相同的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。基础自测一、1. C2.A3. B4. A5. C6. C 7. B8. D9.