兔球虫疫苗的研究现状.docx

1、兔球虫疫苗的研究现状田培荣、方素芳2,顾小龙2,崔 平2(1.河北省涿鹿县畜牧水产局，河北 涿鹿075600； 2.河北北方学院动物科技学院，河北 张家口 075000)摘要：兔球虫病是家兔最常见、危害最严重的疾病之一，国内外多采用抗球虫药物对兔球虫病进行预防和治疗。目前为 止，我国还没有研制出商品化的兔球虫疫苗，国内外仅有少部分学者开展了兔球虫病疫苗的研究工作。主要对兔球虫 疫苗活虫苗、亚单位苗、基因工程苗的研究进展进行综述，以期为兔球虫疫苗的相关研究提供参考。关键词：兔球虫；活虫苗；亚单位苗；基因工程苗中图分类号:S858.29L9文献标识码：A文章顺序编号:1672-5190(2012)

2、03-0079-02Research Status of Rabbit Coccidium VaccineTIAN Pei-rong1, FANG Su-fang2, GU Xiao-long2, CUI Ping2(l.Zhuolu Animal Husbandry and Fisheries Bureau of Hebei Province, Zhuolu 075600, China；2.College of Animal Science and Technology, Hebei North University, Zhangjiakou 075000, China)Abstract:

3、Coccidiosis is one of the most common disease and the most serious disease in rabbits. So far anticoccidial drugs are still used for the treatment and prevention of coccidiosis at home and abroad. So far China has not yet developed a commercial rabbit coccidiosis vaccine, and only a few scholars hav

4、e developed rabbit coccidiosis vaccines at home and abroad. Research progress of live vaccine, subunit vaccine and genetic engineering vaccine on rabbit coccidiosis were reviewed in order to provide reference for study on rabbit coccidium vaccine.Key words: rabbit coccidium; rabbit coccidium live va

5、ccine; subunit vaccine; genetic engineering vaccine兔球虫病是由艾美耳科的多种球虫所引起的一种最常 见的原虫性疾病,对养兔业的危害极大各种品种的兔均 易感染兔球虫，尤其是断奶后至3月龄的幼兔最易感染，感 染率为100%,死亡率高达70%,成年兔常为带虫者，在幼 兔球虫病的发生中起着关键作用。目前，国内仍然采用抗球 虫药物对兔球虫病进行预防和治疗，耐药虫株的出现及药 物残留对人体的危害，导致药物防治兔球虫病的弊端日益 明显，严重阻碍我国兔产业化的发展进程。禽球虫病免疫学 研究的范围和深度远远早于兔球虫病免疫学研究，已对鸡 球虫病免疫预防进行了大量

6、的探索，研制出不同类型的常 规和新型疫苗，积累了丰富的经验。到目前为止，国内外仅 有少部分学者进行了兔球虫病疫苗的研究，我国还没有研 制出商品化的兔球虫病疫苗。基于免疫学的防控技术已成 为当前球虫病研究的创新方向之一，研制有效的兔球虫病 疫苗显得尤为重要。尹秀凤、薛家宾已将兔球虫病疫苗前些 年的研究进展做了综述，笔者将近几年兔球虫病疫苗的 研究现状综述如下，以期为兔球虫病的免疫预防及兔球虫 病疫苗的研究提供有益的参考。1兔球虫病活虫苗的研究1.1兔球虫早熟选育苗的研究 虽然国内外对兔球虫病 的免疫研究落后于禽球虫病的免疫研究，但仍有6种兔球 虫的早熟虫株在国外筛选成功。Licois等用抱子化的

7、肠艾美耳球虫卵囊接种无球虫 兔，收集发育最早的卵囊，抱子化后接种其他兔，如此重复 6代，潜在期从215 h缩短到144 h(3JoCoudert等用SPF兔评 收精日期：2012-03-07 项目来源：国家兔产业技术体系项目(nycytx-44)；张家口市科 技局资助项目(1012004C-l)o作者简介：田培荣(1968),男，富牧师，主要从事畜牧技术推 广工作。通讯作者：崔平(1968),男，教授，硕士生导师，主要研究方向 为分子寄生虫学及寄生虫免疫学。 价了肠艾美耳球虫早熟株的致病性和免疫原性，分别用6、 6x102 OxlOxlO4个兔球虫早熟株的抱子化卵囊免疫接种 5周龄断奶兔，免疫

8、接种后2周，用3X1O3兔球虫原始株弛 子化卵囊进行攻毒。结果表明，肠艾美耳球虫早熟株有较强 的免疫原性，6个卵囊就能够减轻该病的临床症状，使卵囊 产量降低60%,600个或更多卵囊，则具有完全保护作用，攻 毒后8周可以产生有效保护四。Ucois等通过选育发育较早的卵囊，获得兔中型艾美耳 球虫的早熟系。潜伏期从108h缩短到72h,早熟系比原始 毒株致病性、繁殖率都低。通过增重和卵囊产量等指标评 价，用早熟系卵囊接种兔后，再用原始毒株攻毒，能获得完 全的免疫保护。早熟系的选育伴随着抱子化卵囊多态性的 出现，每个弛子囊含有1个大折光体而不是2个小的折光 体。Licois等通过选育发育较早的卵囊，

9、获得兔大型艾美耳 球虫的早熟系。与父母株相比，潜伏期缩短了 46h,致病性 大大降低，繁殖力降低了 500倍。用2500个早熟系卵囊接 种兔，能获得对野毒株再感染总的免疫保护。正如在其他兔 艾美耳球虫早熟系，抱子化卵囊出现异常多态性，每个弛子 囊有1个大折光体，而在父母株是2个小的折光体。 Drouet-Viard等用兔大型艾美耳球虫早熟株研究了不同免 疫日龄和免疫剂量对攻毒保护作用的影响，结果表明，在 2529日龄免疫，3500个卵囊就可获得全部保护。25日龄 免疫，可以使哺乳兔在断奶时获得足够的免疫力；27日龄可 以使用低剂量疫苗免疫接种。同时Drouet-Viard等用兔大 型艾美耳球虫

10、早熟株，对25日龄兔在窝内喷洒卵囊，分别 喷洒4xl02.4xl03和4x1。个弛子化卵囊，35日龄时用lx lb个野毒株卵囊攻毒，结果表明，喷洒4X104个弛子化卵囊 在排卵和增重方面完全有效。Pakandl用黄艾美耳球虫原始毒株的卵囊接种无特殊 病原体兔，收集最先发育的卵囊用于感染其他兔，如此经过 18次传代后，潜在期缩短了 60h。早熟系发育的内生性发 育不同于原始毒株。缺少两代裂殖生殖，即二代或三代和四 代。原始毒株的第一代裂殖生殖发生在空肠和回肠，而早熟 系发生在大肠。和其他兔球虫一样，在每一代有两型裂殖体 (A和B)。然而，原始毒株与早熟系的第五代B：A裂殖体和 小配子:大配子比例

11、不同。Pakandl等用梨形艾美耳球虫原始毒株的卵囊接种 SPF兔，从肠道收集最先发育的卵囊用于感染其他兔，如此 经过12次传代，潜在期从194h缩短到170h。在没有选择 压力下，经5代后，仍保持遗传稳定性。早熟系的卵囊表现 独特的多态性，除在子弛子内的折光体外，在每个抱子囊有 一个巨大的折光体与抱子囊残余体相连。发育成熟卵囊在 结肠近端部，有少部分在大肠的其他部位。所有阶段虫体在 隐窝上皮均可见到。与其他兔球虫一样，原始虫株在配子生 殖之前，有四代裂殖生殖，同时，也观察到两型裂殖体。A型 裂殖体通过内裂殖生殖产生多核的裂殖子，B型裂殖体产 生单核的裂殖子。早熟系的内生性发育除了缺乏最后一代

12、 裂殖生殖外，其他与原始毒株相同。这导致了配子生殖较早 出现和潜在期缩短。1.2兔球虫强毒苗的研究张龙现等采用2种方法用黄艾 美耳球虫活虫重复免疫接种2月龄无球虫新西兰兔。第1 种方法：免疫接种2x10个抱子化卵囊/(只次)，免疫3次， 每次间隔10d；第2种方法：起始剂量为2X102个抱子化卵 囊/(只次)，以后加倍递增剂量，免疫5次，每次间隔5 d。 结果表明，2种方法都有一定程度的免疫保护性，但后者免 疫效果较好13兔球虫致弱苗的研究赵孝民等研究了不同剂最(5、 15、25、35、45 KR)的y射线辐射对家兔斯氏艾美耳球虫的 抱子化卵囊致病性及免疫原性的影响。结果证明： 射线辐 射可以

13、降低斯氏艾美耳球虫的致病性，减弱它的免疫原性， 影响程度与辐射剂量有关。通过接种辐射抱子化卵囊和未 受辐射抱子化卵囊的比较试验，认为用射线辐射致弱的 球虫卵囊作为疫苗来预防球虫病是可能的。张正黎、廖党 金、杨光友等用化学试剂A影响斯氏艾美耳球虫的体内外 发育降低斯氏艾美耳球虫毒性，并使感染兔获得一定保护 性m】。2兔球虫亚单位苗的研究Hanada等用感染斯氏艾美耳球虫兔胆汁中的可溶性 抗原免疫无球虫兔，研究肝功能紊乱和抗感染保护性的关 系。结果表明，对照组兔攻虫后排出大量的虫卵，并且 谷 氨酰转移酶活性增加，血中n引噪青绿清除降低。试验组用可 溶性抗原免疫的兔攻虫后仅排出少量虫卵，攻毒后第8天

14、 丙氨酸转移酶活性暂时增加，血中呵噪青绿的清除在整个 试验过程中没有改变。肝组织病理学观察，攻毒后第8天， 未免疫兔的胆管中发现大量裂殖体；免疫兔的胆管周围聚 集较多的淋巴细胞和嗜中性白细胞，而虫体较少。原因是由 于胆汁中的可溶性抗原刺激局部免疫反应，从而导致肝球 虫的减少与消失州。Hanada等从感染兔的胆汁中检测到斯 氏艾美耳球虫裂殖体含49 ku的可溶性抗原。免疫该抗原 的兔排卵量少于未免疫的兔，表明49 ku可溶性蛋白抗原 是裂殖体特异性抗原，对抗原的免疫应答可能诱导针对感 染的保护性效应。Omata等用感染15 d后兔的胆汁免疫 兔，可从血清中检测到抗斯氏艾美耳球虫抱子体和裂殖体 的

15、抗体。用兔胆汁与霍乱毒素接种兔,感染后粪便中排出虫 卵比对照兔少。可溶性抗原在感染的急性期存在于兔的胆 汁中，可能是在侵入宿主细胞过程中通过裂殖体产生和释 放的哄。Abdel等用斯氏艾美耳球虫粪抗原研究了抗兔肝球虫 病的免疫保护性，试验用斯氏艾美耳球虫粪抗原加佛氏佐 剂免疫接种无球虫兔2次，间隔2周。1周之后，经口攻毒 弛子化卵囊。结果显示，免疫组有70%的保护，卵囊排出减 少,IgG应答水平也比对照组高。粪抗原和卵囊抗原电泳显 示了不同的分离带，两者既有共同条带，也有各自的特异条 带。免疫印迹试验，用免疫后3周兔血清检测到的粪抗原成 分有155、103、74、66、44、22ku,而卵囊抗原

16、分子大小包括 155 J15.57.26 kuo攻毒后2周和4周，兔血清与卵囊抗原 反应，显示免疫原条带分子大小分别为155、115、57、26、22 ku和155、115、57、25ku。22 ku和155 ku的抗原蛋白可以 被粪抗原免疫血清和卵囊免疫血清识别，两者可能与宿主 的保护性免疫应答有一定的相关性"。22 ku和155 ku的抗 原蛋白可以作为亚单位苗的研究方向。3兔球虫基因工程苗的研究乔军构建了 Eiedai子抱子cDNA文库，应用噬菌斑 原位杂交技术从cDNA文库中筛选微线蛋白5 (Es M7C-5) 基因片段，在毕赤酵母(pichia pastoris)中表达MI

17、C-5基因， 进一步研究了重组蛋白的免疫原性，并产生一定免疫保护 作用俱 参考文献：1 蒋金书.动物原虫病学M.北京：中国农业大学出版社， 2000.2 尹秀凤，薛家宾.兔球虫病免疫研究进展J .中国养兔杂 志,2007(6):28-30.3 UCOIS D, COUDERT P, BOIVIN M, et al. Selection and characterization of a precocious line of Eime ria irUestinalis , an intestinal rabbit coccidium J.Parasitol Res, 1990,76 (3)： 1

18、92-198.4 COUDERT P, UCOIS D, PROVOT F,et al. Eimeria sp. from the rabbit (Oryctolagus cuniculus): Pathogenicity and immunogenicity of Eimeria irUestinalis J.Parasitol Res, 1993,79(3):186-190.5 UCOIS D, COUDERT P, DROUET-VI ARD F, etal. Eimeria media* Selection and characterization of a precocious li

19、ne J. Parasitol Res, 1994,80( 1) ：48-52.6 L1CO1S D, COUDERT P, DROUET-VIARD F, et al. Eimeria magna- Pathogenicity, immunogenicity and selection of aprecociouslineJ .Vet Parasitol, 1995,60( 1/2) ： 27-35.7 DROUET -VIARD F, COUDERT P, LICOIS D, et al. Acquired protection of the rabbit (Oryctolagus cun

20、iculus) against coccidiosis using a precocious line of Eimeria magnaz effect of vaccine dose and age at vaccination J .Vet Parasitol, 1997,69(3):197-201.8 DROUET -VIARD F, COUDERT P, LICOIS D, et al. Vaccination against Eimeria magrui coccidiosis using spray文章顺序编号:1672-5190（2012）03-0081-02尔、大才、多巴、上五

21、庄6个乡镇的牛、羊、猪棘球蝴感染情 况进行了调查。13 调查方法 采用屠宰现场基线调查，在屠宰季节，对 447只羊、222头牛、148头猪进行了包虫病检测。检测方法 主要是通过肉眼观察和用手触摸。2结果包虫病病羊的感染率为6.7%,肝、肺表面包囊数在18 个之间，结果见表1。牛的感染率为3.2%,肝、肺表面包囊数在112个之间， 结果见表2。猪的感染率为3.3%,肝、肺表面包囊数在16个之间， 结果见表3。3讨论以上检查结果表明，该县的包虫病感染率比较低。这说 明近20年来连续使用阿维菌素、丙硫咪哩、达虫净等驱虫 药起到了很好的防治作用，也收到了良好的效果。因此，在 今后的包虫病防治工作中仍然

22、要坚持不懈地进行下去。另 外，羊包虫病的感染率稍高于牛、猪的感染率，应注意加强 羊包虫病的防治工作。4预防控制4.1做好包虫病流行病学调查包虫病的发生、发展具有 一定的流行规律，加强对包虫病的流行病学研究，详细了解青海省涅中县家畜包虫病感染情况调查何成伟（青海省涅中县大才乡兽医工作站，青海 涅中811605）摘要：为了掌握青海省波中县家畜包虫病的感染情况，笔者于2011年9月26日至2011年10月25 EJ对该县6个乡镇 的牛、羊、猪包虫病感染情况进行了调查，共检查羊477只，感染率为6.7%；检查牛222头，感染率为3.2%；检查猪148 头，感染率为3.3%。调查结果显示，包虫病在波中县

23、的家畜中存在流行，其感染率不高，但也应引起高度重视。 关键词：包虫病；感染率；感染情况调查；牛；羊；猪 中图分类号：S852.734文献标识码：A棘球蝴病又称包虫病，是细粒棘球缘虫Echinococcus granulosus ）的中绦期 棘球呦Echinococcus ）寄生在哺乳 动物脏器内所引起的一种人畜共患寄生虫病，对人体健康 和畜牧业发展危害极其严重。我国包虫病是典型的家养动 物循环型，即流行于终末宿主家犬（或牧犬）与中间宿主有 蹄家畜，特别是在绵羊之间流行。患病人是该病原循环过程中 的牺牲者，由于卫生意识差,人们频繁与家、牧犬接触后，在饮 食前又不注意洗手等，往往造成病从口入，感染

24、包虫病。为了 摸清青海省淀中县包虫病的感染情况，于2011年9月26 日一 10月25日进行了该病感染情况调查，现将调查结果报 告如下。1材料与方法1.1调查地区概况 浪中县地处青海省东部农业区，淀水 流域中游，全县辖属15个乡镇，393个行政村,10.72万农 户，42万农业人口。土地总面积27万hm2,其中耕地面积 6.5万hn?,占总面积的25.9%；有天然草场12.2万hn?,可 利用草场9.7万hm2 o全县共存栏牛15万余头、羊30万余 只、猪10万余头。1.2 调查动物 对青海省涅中县的田家寨、上新庄、鲁沙 收稿日期：2012-03-13作者简介：何成伟（1966）,男，兽医师，

25、主要从事畜牧兽医技 术推广工作。dispersion of precocious line oocysts in the nest box J.Vet Parasitol ,1997,70(1/3):61-66.9 PAKANDL M. Selection of a precocious line of the rabbit coccidium Eimeria flavescens Marotel and Guilhon (1941) and characterisation of its endogenous cycle J.Parasitol Res,2005,97(2)： 150-155

26、.10 PAKANDL M,JELfNKOVA A .The rabbit coccidium Eimeria piriformis : Selection of a precocious line and life-cycle study J.Veterinary Parasitology,2006,137(3/4) ：351-354.11 张龙现，林昆华.从病理变化角度探讨黄艾美耳球虫活虫 苗不同免疫程序保护性J.畜牧兽医学报,1995,26(5)： 426-434.12 赵孝民/y-射线辐射对兔球虫抱子化卵囊致病性及免疫 原性的影响J.山东农业大学学报：自然科学版， 1986,17(2):4-6.13 张正黎.斯氏艾美耳球虫卵囊孵化条件及