实验五+血液生化指标的测定

1、血液生化指标的测定血液生化指标的测定实验五甘平 讲师2002 年毕业于上海医科大学，获硕士学位2002年-今，昆明医科大学2016年，毕业于云南大学生命科学学院，获博士学位2004-2005年，新加坡国立大学医学院访问学者2009-2010年，葛兰素史克中国上海研发中心访问学者联系方式：电话qq：1957178100；邮箱：ganping_(Experimental Objectives)1.1.掌握掌握GOD-PAPGOD-PAP酶法酶法测定血清葡萄糖的原理和方法；测定血清葡萄糖的原理和方法；2.2.掌握掌握脲酶法脲酶法测定血清尿素氮的原理和方法。测定血清尿素氮的原

2、理和方法。3.3.熟悉熟悉分光分析技术分光分析技术的原理、应用及其操作步骤。的原理、应用及其操作步骤。4.4.了解血糖及血清尿素氮测定的了解血糖及血清尿素氮测定的临床意义临床意义。（一）实验原理（一）实验原理 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）利用氧利用氧和和水将葡萄糖水将葡萄糖氧化氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢为葡萄糖酸，并释放过氧化氢；在；在过氧化物酶过氧化物酶（peroxidase，POD）的催化下，的催化下，过氧过氧化氢化氢氧化氧化4-氨基安替比林氨基安替比林（4-aminoantipyrine ）和和酚酚（phenol）缩合为缩合为红色醌类化合物红色醌

3、类化合物 其其最大吸收最大吸收峰为峰为505nm。红色醌类化合物红色醌类化合物的生成量在一定范围内与葡萄糖含量成正的生成量在一定范围内与葡萄糖含量成正比，与同样处理的葡萄糖标准液进行比较比，与同样处理的葡萄糖标准液进行比较，即可求得血糖含量。，即可求得血糖含量。CH3CH3CCNNCOONCH3CCNH2CH3NCO2H2O2+4-氨基安替比林红色醌亚胺PODNOH反应简式葡萄糖葡萄糖 O2 H2O GOD 葡萄糖酸葡萄糖酸 H2O2 H2O2 4-氨基安替比林酚氨基安替比林酚 POD 醌亚胺醌亚胺 (红红色色) H2O 尿素在脲酶的作用下产生氨离子和二氧化碳，氨尿素在脲酶的作用下产生氨离子和

4、二氧化碳，氨离子在碱性介质中与酚显色剂生成蓝色物质，其离子在碱性介质中与酚显色剂生成蓝色物质，其最大吸收峰为最大吸收峰为640nm。蓝色蓝色化合物化合物的吸光度值在一定范围内与反应体的吸光度值在一定范围内与反应体系系中的尿素浓度成正比，与同样处理的尿素标准中的尿素浓度成正比，与同样处理的尿素标准液液作比较，可对血清中的尿素作定量分析。作比较，可对血清中的尿素作定量分析。CO(NH2)2 + H2O 2NH3+CO2材料、主要仪器和试剂材料、主要仪器和试剂（一）材料：血清（一）材料：血清（二）仪器：（二）仪器：722S722S型分光光度计、恒温水浴箱、型分光光度计、恒温水浴箱、涡旋混匀器涡旋混匀

5、器（三）试剂：（三）试剂：1. 1. 葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶- -过氧化物过氧化物酶法）酶法）实验材料、主要仪器和试剂实验材料、主要仪器和试剂(Equipments , Materials and Reagents)主要组成成分为：主要组成成分为：（2 2）R2R2：磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、：磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、4-4-氨氨基安替比林、基安替比林、PODPOD、GODGOD、NaNNaN3 3。（3 3）标准液（）标准液（5.55mmol/L5.55mmol/L）：）：1 1 1ml 1ml。三、实验材料、主要仪器和试剂三、实验材料、主要仪器和试剂3.

6、 脲酶脲酶法测定血清尿素法测定血清尿素 （1）脲酶储备液及脲酶稀释液脲酶储备液及脲酶稀释液（2）酚显色剂酚显色剂（3）碱性次氯酸钠）碱性次氯酸钠（4）尿素）尿素标准标准液（液（10 mmol/L）操作步骤操作步骤(Operating Procedure) （一）（一）血糖血糖测定测定1、待测样品：血清；、待测样品：血清；2、配制工作液、配制工作液: 等量混合等量混合R1与与R2；3、取三支试管，按下表操作：、取三支试管，按下表操作：血糖血糖测定操作步骤测定操作步骤各管混匀，置各管混匀，置37水浴水浴15分钟分钟，于，于505nm波长处，波长处，以空白管以空白管调调“零零”点点，测定各管吸光度（

7、，测定各管吸光度（A）值。）值。 （试剂盒线性范围：（试剂盒线性范围：028mmol/L） 加入物加入物 空白管空白管(B) (B) 标准管标准管(S) (S) 样品管样品管(U)(U)样本（样本（ll） 15 15标准液（标准液（ll） 15 15 蒸馏水（蒸馏水（ll） 15 15 工作液（工作液（mlml） 1.5 1.51.5 1.5 1.5 1.5 血清血清尿素尿素测定操作步骤测定操作步骤1 1、待测样品：血清待测样品：血清2 2、取三支试管，按下表操作：、取三支试管，按下表操作： 加入物（加入物（ml） 空白管空白管(B) 标准管标准管(S) 样品管样品管(U)蒸馏水蒸馏水 0.0

8、2 尿素标准液尿素标准液 0.02 待测样本待测样本 0.02酶缓冲液酶缓冲液 0.25 0.25 0.25 充分混匀，充分混匀，37水浴水浴 10分钟分钟酚显色剂酚显色剂 1 1 1碱性次氯酸钠碱性次氯酸钠 1 1 1 3. 各试管充分混匀，置各试管充分混匀，置37水浴水浴中加热中加热10 min，在在640 nm波长处，用空白管调零，分别测定标准波长处，用空白管调零，分别测定标准管，测定管吸光度值。管，测定管吸光度值。血清血清尿素尿素测定操作步骤测定操作步骤五、结果与分析五、结果与分析 A测测 A标标葡萄糖测定葡萄糖测定尿素测定尿素测定血糖的结果与分析血糖的结果与分析G (mmol/L)

9、=A标标A测测 C标标(5.55mM)G (mg/dl) = m mol/L 18空腹血糖的正常范围：空腹血糖的正常范围：3.9 6.1 mmol/L 血糖测定的临床意义 1正常人的血糖为什么能维持在一定水平正常人的血糖为什么能维持在一定水平? 2. 在那些情况下需做血糖含量的测定在那些情况下需做血糖含量的测定?血清尿素的结果与分析血清尿素的结果与分析尿尿素素（mmol/L）= mmol/L A标标A测测 C标标(10 mM)血清尿素测定的临床意义生理性：生理性：高蛋白饮食；年龄增加。高蛋白饮食；年龄增加。病理性：病理性：1血清尿素增加的原因可分为肾前、肾性及肾血清尿素增加的原因可分为肾前、肾

10、性及肾后三个方面：后三个方面： (1) 肾前性：肾前性：失水引起血液浓缩，导致肾血流量减少，肾小球滤失水引起血液浓缩，导致肾血流量减少，肾小球滤过率降低使血尿素潴留，见于剧烈呕吐、幽门梗阻、肠梗阻和长期过率降低使血尿素潴留，见于剧烈呕吐、幽门梗阻、肠梗阻和长期腹泻等。腹泻等。(2) 肾性：肾性：急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎、肾结核、肾动脉硬化、先天性多囊肾、肾肿瘤所致的尿毒症等炎、肾结核、肾动脉硬化、先天性多囊肾、肾肿瘤所致的尿毒症等，使肾小球滤过率减少，导致血尿素增高。，使肾小球滤过率减少，导致血尿素增高。 (3) 肾后性：肾后性：前列腺肥大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱前列腺肥大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤，致使尿道受压、尿路堵塞，使上部压力增高，肾小肿瘤，致使尿道受压、尿路堵塞，使上部压力增高，肾小球滤过减少甚至停止，且管内尿素扩散入血液，导致血尿球滤过减少甚至停止，且管内尿素扩散入血