PCR法鉴定T-DNA插入突变体1_第1页
PCR法鉴定T-DNA插入突变体1_第2页
PCR法鉴定T-DNA插入突变体1_第3页
PCR法鉴定T-DNA插入突变体1_第4页
PCR法鉴定T-DNA插入突变体1_第5页
已阅读5页，还剩5页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、PCR法鉴定T-DNA插入突变体T-DNA插入 T-DNA，转移DNA（transferred DNA)是根瘤农杆菌Ti质粒中的一段DNA序列，可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组 将目的基因转入到经过改造的T-DNA区，借农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，获得转基因植株 除用于转基因以外，T-DNA插入到植物基因中能引起基因的失活，从而产生基因敲除突变体 T-DNA大多为单拷贝插入，使其利于进行遗传分析。鉴定原理BP: T-DNA载体上的插入片段的左边界序列 通用引物（LB）LP、RP: 用已知的被插入的基因的侧翼序列设计的特异性引物WT 没有插入HZ杂合体HM 纯合体鉴定

2、原理鉴定原理本次实验材料：插入位点1100 bp500 bpExonIntronUTRpromoter提取植物基因组PCR反应鉴定实验安排 每每2 2个人一个小组，每小组提个人一个小组，每小组提 1 1 个样品个样品 每行一个大组，另提每行一个大组，另提1 1个对照个对照WTWT 注意写好样品编号注意写好样品编号提取植物基因组实验安排（1）剪取约0.5-1 cm2大小的幼嫩植物叶片，放入离心管中；（2）在液氮中，用研磨棒将叶片磨碎；（3）研磨结束后，向管中加入400 uL的提取缓冲液，混匀；（4）室温，12000 rpm离心3 min；（5）吸取300 uL上清液至一新的离心管中，加入300

3、uL异丙醇，混匀；（6）室温，12000 rpm离心5 min；（7）倒掉上清，加入300 uL 70%乙醇；（8）室温，12000 rpm离心3 min；（9）倒掉上清，待管中液体晾干后，加入50 uL ddH2O溶解。提取植物基因组实验安排实验安排PCR反应鉴定 每小组做每小组做 1 1 管管PCRPCR反应反应( LP+RP+( LP+RP+LBLB ) ) 注意写好样品编号注意写好样品编号实验安排PCR反应鉴定成 分 用 量 ( ul )primers0.5+0.5 +0.52X Taq Mix10ddH2O6template3total20Mix 17 ul 94 94 55 72 72 16 3min 30s 30s 1:00 10:00 32

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 备课教案

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论