手针刺激大鼠肾俞穴对下丘脑室旁核功能状态的影响

1、    手针刺激大鼠肾俞穴对下丘脑室旁 核功能状态的影响         摘要目的为探讨PVN与“肾俞”穴针刺效应的关系提供形态学证据。方法以大鼠为对象，采用免疫细胞化学ABC法，探讨了手针刺激大鼠右“肾俞”穴诱导的c-fos在PVN中的表达。结果PVN中FLN密度值组间、组内差异显著(P0.01)，手针组对照组空白组；手针组对侧同侧。结论手针刺激右“肾俞”穴对PVN神经元具有激活作用；PVN神经元对同一方法刺激单侧“肾俞”穴的这种反应上的两侧差异，可能是导致“肾俞

2、”穴针刺效应同侧与对侧差异的重要环节之一。关键词手针肾俞穴下丘脑室旁核c-fos动物实验中国书分类号R224.1Effect of acupuncturing Shenshuon Point PVN in RatsChen Zebin, et alDept. of Anatomy, HuBei TCM, 430061Abstract:By observing the expressions of c-fos gene in PVN,the effect of acupuncturing“Shenshu”on PVN of rats was studied with immunocytochem

3、ical way of ABC. The results showed that the densities of FLN in PVN had significantly differences between different groups(P0.01);the acupuncture groupcontrol groupblank group,non-acupuncture side acupuncture side.The results indicated that acupuncturing“Shenshu”can activate the neuron in PVN and P

4、VN plays an certain role in the affectwing of acupuncturing “Shenshu”.研究显示，针刺“肾俞”穴具有影响机体下丘脑垂体肾上腺皮质轴功能，影响肾的泌尿功能等多方面的效应，提示神经体液因素在这一效应中的重要作用1，2，而作为神经内分泌系统关键中枢核团之一的下丘脑室旁核(Hypothalanic Paraventricular nucleus, PVN，下同)对针刺“肾俞”穴反应如何却未见报道。为此，本文采用免疫细胞化学技术，着重观察了手针刺激大鼠右“肾俞”穴诱导的c-fos在PVN中的表达，并对PVN及其各部分c-fos阳性神经元

5、(Fos like immunoreactive neuron,FLN,下同)密度进行了比较，拟探讨手针刺激大鼠“肾俞”穴对PVN功能状态的影响，并为进一步探讨PVN与“肾俞”穴针刺效应的关系提供形态学依据。1材料和方法1.1材料Wistar大鼠15只，重量220250g，雌雄不限。随机分成三组：手针组，对照组，空白组。每组5只。1.2方法3，于第二腰椎棘突下右侧旁开7mm取右“肾俞”穴，直刺8mm。采用甲氧氟烷吸入加1%戊巴比妥钠腹腔注射的复合麻醉方式。手针组：麻醉加手针；对照组：只麻醉，不刺激；空白组：不麻醉，不刺激。手针参照蔡乃真的方法，手捻针刺激10分钟，留针20分钟，运针频率控制在4

6、次/秒，捻针幅度360°左右，中等强度42O25型0.5网形目镜尺(实际划刻面积为5mm×5mm，400倍镜下划刻面积为156.25?m2)进行，记数与任一测点外上角和测线(横线)上缘交叉的FLN(核着色均匀、深染、边界清晰)。每片于PVN各部相应处取二视野，分别计数，取均值即为该片该部的FLN密度值。将三片的相应值累加取均值，依此即得该鼠一侧PVN各部、一侧PVN和双侧PVN的FLN密度值。终值单位为：个/156.25?m22实验结果2.1镜下观察Fos阳性细胞表达呈现在细胞核上，呈深蓝色，胞浆未着色，核为圆形或卵圆形，背景基本无色。2.2FLN在PVN及其各部(双侧)的

7、表达密度及其组间两两比较(见表1)。2组别nPaVPaMPPaLMPaDCPVN手针组512.38±0.4116.34±0.538.75±0.8413.30±0.5012.75±0.31对照组58.55±0.1614.13±1.136.51±0.305.54±0.218.71±0.19空白组52.42±0.844.05±0.251.59±0.221.88±0.292.43±0.30*     注：F检验P0

8、.01，*组间比较P0.01。PaV：室旁核腹侧部。PaMP：室旁核内侧小细胞。.PaLM：室旁核外侧大细胞部。PaDC：室旁核背侧小帽。由表中可以看出，FLN在各组PVN及其各部双侧(指两侧合并的平均密度)的密度存在差异。在F检验(P0.01)基础上进行的Q检验，显示彼此间差异显著(P0.01)。说明麻醉刺激对PVN神经元具有影响；但手针组刺激对PVN神经元的激活作用是在麻醉刺激基础上的进一步加强，且对PVN各部分神经元均具有激活作用。2.3FLN 在PVN及其各部(单侧)的分布密度及组内同侧、对侧比较(见表2) 2组别n侧别PaVPaMPPaLMPaDCPVN手针组5同侧10.17

9、7;0.43*15.92±0.747.83±0.43*13.08±0.5711.75±0.38*对侧14.59±0.4216.75±0.3210.17±0.4313.50±0.4313.75±0.24对照组5同侧8.73±0.5414.25±0.886.59±0.425.58±0.578.79±0.10对侧8.58±0.5714.00±1.476.42±0.575.50±0.438.63±0.41空白组5同

10、侧2.45±0.834.25±0.321.50±0.432.00±0.272.50±0.24对侧2.59±0.923.83±0.431.67±0.272.00±0.272.44±0.37     注：*与对侧比较P0.01由表中可以看出，FLN在各组PVN及其各部的密度值是不一致的。手针组对侧显著高于同侧(P0.01)，主要表现在PaV，PaLM两部分，对照组和空白组同侧、对侧间无差异(P>0.05)。以上说明：手针组刺激激活了PVN双侧各部神经元，

11、但以对侧更为明显，重点表现在对侧PaV和PaLM两部分。麻醉刺激不导致两侧差异。2.4各组PLN照片见72页片。    3讨论3.1c-fos癌基因的诱导和显示是一种反映神经通路的新方法，是神经元被激活的标志5，国内少数学者将这一方法用于针刺研究6。本研究在实施过程中，采取多项措施以防止非特异性应激反应的发生，并设立实验对照组和空白对照组，使得能从实验结果中有效分离出非特异性刺激所致的应激反应。结果显示针刺“肾俞”穴所致PVN中FLN密度值的组间差异、组内同侧、对侧差异十分显著，甚至在同一侧PVN的不同部分差异也非常明显。因此提示：(1)手针刺激右“肾俞

12、”穴对PVN神经元具有激活作用，PVN参与了“肾俞”穴的针刺效应过程；(2)PVN神经元对同一方法刺激单侧“肾俞”穴的这种反应上的两侧差异，可能是导致“肾俞”穴针刺效应同侧、对侧差异的重要环节之一。3.2关于“肾俞”穴针刺效应机理，国内外已有一些研究报道，虽各自的研究方法和着重点不同，但结果基本一致，即神经-内分泌系统在针刺效应中具有极其重要的作用1，2，4。神经生物学研究揭示，PVN是神经体液调节的关键部位之一，它既具有神经内分泌的功能，又参与植物神经的控制，在实现交感肾上腺髓质和下丘脑垂体肾上腺皮质两大系统的整合中起着重要作用。神经电生理学研究显示，电刺激PVN可引起ACTH的分泌，PVN参与调节肾交感神经节前神经元的传出活动7，参与肾神经传入所引起的升血ACTH效应等等8。鉴于本实验研究的结果证明PVN参与了“肾俞”穴的针刺效应，因而可以设想：“肾俞”穴的针刺信息，在触发以背根节和交感神经节为中心的中枢外反射通路和脊髓低级中枢反射通路的同时可经背根节和脊髓的两次整合，上行(直接或间接)入PVN，并使其神经元激活，被激活的PVN神经元一方面由其投射到正中隆起的纤维分泌CRF和AVP，引起垂体前叶ACTH和EP的分泌，进而影响下丘脑垂体肾上腺皮质