微卫星不稳定状态对散发性直肠癌预后的影响

1、微卫星不稳定状态对散发性直肠癌预后的影响         08-07-19 16:05:00     编辑：studa20            作者：孟文建 孙晓峰 田超 王玲 于永扬 辜俊 夏庆杰 周总光 【摘要】  目的 研究汉族人散发性直肠癌的微卫星不稳定状态(microsatellite instability,MSI)及其与临床病理学和预后的关系

2、。方法 应用PCR扩增患者肿瘤组织和对应正常组织的DNA，分析微卫星不稳定状态，并采用单因素、多因素分析评估预后。结果 MSI分为高频率微卫星不稳定(microsatellite instabilityhigh,MSIH)、低频率微卫星不稳定(microsatellite instabilitylow,MSIL)、微卫星稳定(microsatellite stability,MSS)。93例直肠癌患者中，MSIH 11例(12%)，MSIL和MSS分别为23例(25%)和59例(63%)。与MSIL和MSS相比，大多数MSIH为高分化肿瘤、患者年龄小、术前CEA水平高、总的生存率高。结论 在汉

3、族人群散发性直肠癌中，MSIH发生率高，且MSI是一个相对较好的预后预测指标。 【关键词】  微卫星不稳定； 直肠肿瘤； 散发性     【Abstract】  Objective  To investigate the relationship between microsatellite instability (MSI) status and clinicopathological features and prognosis of sporadic rectal cancer in Chinese Han popul

4、ation. Methods  DNAs from freshfrozen paired samples of tumors and corresponding normal tissue from 93 rectal cancer patients were analyzed for MSI by PCR amplification. Cox proportional hazards model was used to assess prognostic significance. Results  Eleven (12%) tumors in our study wer

5、e highfrequency MSI (MSIH), 23 (25%) were lowfrequency MSI (MSIL) and 59 (63%) were microsatellite stable (MSS).  Compared with MSIL and MSS tumors, most of the MSIH tumors were found in young patients, had high grade of differentiation and high level of preoperative serum carcinoembryonic anti

6、gen. The survival rates of rectal cancer patients with MSIH were higher than those with MSIL or MSS (RR, 2.373; 95% CI, 1.351 to 4.167, P<0.01). Conclusions  There is high incidence of MSIH in sporadic rectal carcinoma in Chinese Han population. MSI is a comparatively good prognostic factor

7、of sporadic rectal carcinoma.    【Key words】  Microsatellite instability;  Rectal cancer;  Sporadic    在国内，肿瘤引起的死亡中结直肠癌居第5位，并且有上升的趋势。过去30多年由于技术的进步使其病死率有所下降，但总的预后仍然很差。微卫星不稳定状态(microsatellite instability，MSI)的评估能为结直肠肿瘤提供有用的预后信息1。本研究旨在通过检测汉族人散发性直肠癌的微卫星不稳定状态，

8、研究其与临床病理学和预后的关系。    1  材料与方法    1.1  临床资料    收集2002-2005年四川大学华西医院胃肠外科经手术切除的102例汉族患者直肠癌标本中的肿瘤组织与正常直肠黏膜组织。基于缺乏相关家族史，经详细询问，均被认为散发性。根据文献2，怀疑具有遗传性非息肉病性大肠癌的患者被排除。入选病例术前均未行放、化疗。102例患者中， 9例由于标本不足或失访，仅93例进行研究。家族史、民族情况通过口头询问获得。肿瘤组织学类型及分化程度根据WHO标准,临床病理学分期根

9、据第六版美国癌症联合委员会(AJCC)分期指南。    随访采用门诊复查、电话及书信。30例期和30例期直肠癌患者接受术后化疗(5氟尿嘧啶+四氢叶酸+奥沙利铂)，15例期患者中，10例接受术后化疗，其余患者接受中药治疗。生存时间定义为自手术治疗之日至末次随访日或死亡所经历的时间，以月为单位计算。研究终点为2006年10月，中位随访时间为34个月(448个月)。    1.2  DNA提取    石蜡组织连续切片，再进行显微切割，把切割后含70%以上肿瘤细胞的组织和正常大肠组织用二甲苯和酒精多次脱

10、蜡,加蛋白酶K消化后，用快速盐析法提取DNA，4 保存备用。    1.3  MSI测定    引物由宝生物工程(大连)公司合成。选择美国国立癌症研究所(NCI)推荐的5个标记(BAT25、BAT26、D2S123、D5S346和D17S250)进行MSI研究。所有引物序列根据基因数据库。将肿瘤与其相应正常组织基因组DNA的PCR结果同时比较，若肿瘤标本电泳带对照正常组织相应电泳带出现移位带或额外带即为MSI，若5个微卫星位点中有2位点表现为MSI则为高频率微卫星不稳定(microsatellite instabilityh

11、igh,MSIH)；若仅1个位点出现MSI，则为低频率微卫星不稳定(microsatellite instabilitylow,MSIL)；若没有位点出现MSI则为微卫星稳定(microsatellite stability,MSS)。PCR条件参照文献3，PCR产物采用2%含Goldview的凝胶进行电泳，然后用紫外线透照灯检查并证实为一条带。证实后的PCR产物在6%含8 mol/L尿素的变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离。凝胶参照文献4的方法进行银染。出现MSI的病例分别重复23次PCR和电泳。1.4  统计学分析    数据采用SPSS 13.0软件包分析。用2检验、t检验和Fisher确切概率法对临床病理学各参数进行统计；生存曲线通过KaplanMeier法生成并采用Logrank检验进行比较；多因素分析采用Cox比例风险模型，仅统计有意义变量进入最终Cox模型分析，双侧检验。P<0.05为差异有统计学意义。    2  结果    2.1  患者基本特征    93例中，男