心脉灵注射液对内毒素休克大鼠海马组织NOS活性的影响

1、    心脉灵注射液对内毒素休克大鼠海马组织NOS活性的影响        摘要：采用尾静脉注射大肠杆菌内毒素复制大鼠内毒素休克模型，检测动物血压、脑系数、海马组织一氧化氮合酶(NOS)活性及海马CA1区形态学改变，探讨心脉灵注射液对内毒素休克大鼠的作用机理。结果显示：与病理组相比，注入心脉灵注射液后1h、6h，动物血压上升，脑系数下降，海马组织NOS活性显著增高，海马CA1区神经元损伤明显减轻，动物无死亡。提示心脉灵注射液能够改善内毒素休克所致的低血压及脑水肿，保护海马CA

2、1区神经元，增强海马组织NOS活性，起到抗内毒素休克的作用。关键词：心脉灵注射液；内毒素休克；一氧化氮合酶；海马；大鼠 Effects of Xinmailing Injection on NOS Activity of HippocampalTissue of the Endotoxin Shocked RatTao Hong(陶虹),Li Xiaoyue(李小粤),Liu Zhaohui(刘朝晖),et al.(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)ABSTRACT: Injecting col

3、itoxin to caudal vein was used to duplica te rat mod el of endotoxin shock. Examine blood pressure, cerebral coefficient, nitrous oxi de synthetase (NOS) activity of hippocampal tissue and morphological modificatio n in the CA1 section of the hippocampal tissue, to discuss the mechanism of action of

4、 Xinmailing Injection on the endotoxin shocked rat. Results: Compared with the pathologic group, after injecting Xinmailing 1h and 6h respectively, the blood pressure was increased, cerebral coefficient decreased, NOS activity of hippocampal tissue markedly acce ntuated, the injured neurons of the C

5、A1 section of hippocampal tissue markedl y rel ieved. It suggests that Xinmailing Injection can improve the hypotension and ven ous edema caused by endotoxin shock, protect neurons of the CA1 section of hippo campal tissue, enhance the NOS activity of hippocampal tissue, so to take an eff ection of

6、anti-endotoxin shock.KEY WORDS: Xinmailing Injection; Endotoxin shock; NOS; hippocamp al tissue; Rat心脉灵注射液是在四逆汤基础上研制成的注射液，具有回阳救逆，益气固脱的功效。研究表明1,2，它对狗、兔、大鼠等内毒素休克有显著疗效。本实验着重检测内毒素休克大鼠海马组织一氧化氮合酶(NOS)活性，观察海马CA1区神经元形态变化，以及心脉灵注射液对其的影响，为阐明心脉灵注射液抗休克的作用机制提供实验依据。1材料与方法1.1材料雄性Wistar大鼠(北京医科大学实验动物中心提供)，体重140200g；大

7、肠杆菌内毒素(北京生物制品所提供，批号：810011)；心脉灵注射液(北京中医药大学制剂教研室提供)；RBP-1型大鼠尾压心率测定仪(中日友好医院临床医学研究所提供)；NOS活性试剂盒(军事医学科学院放射医学研究所提供，批号：970825)；紫外分光光度计(HITACHI，U-2000)。1.2方法1.2.1模型制备：实验动物禁食1d，随机分为3组。正常组：尾静脉一次推注生理盐水10mL/kg，5min后再注射1次，剂量同前；病理组：将10mg/kg大肠杆菌内毒素溶于10mL/kg生理盐水中，尾静脉推注，5min后再注入同等剂量的生理盐水；治疗组：按10mL/kg注入心脉灵注射液，5min后再

8、给予内毒素，剂量与方法同病理组。1.2.2血压测定：用RBP-1型大鼠尾压心率测定仪测量造模后1h、6h大鼠尾动脉血压。1.2.3大鼠海马组织NOS活性测定：大鼠分别于造模1h、6h杀检、取脑，冰浴下分离脑组织，取海马200mg。组织样品按200g/L加入40mmol/LpH7.2磷酸钾缓冲液中，匀浆，10000r/min离心20min，取上清液，加入反应底物L-Arg、NaDPH等，立即计时、振荡，分别在401nm、421nm波长下测定每一样品的OD值，同时每隔30s记录1次，最后计算出每克组织每分钟产生的一氧化氮(NO)量，即NOS活性。1.2.4脑系数测定：脑组织称重，按脑湿重/体重&#

9、215;100%计算。1.2.5海马CA1区神经元形态检测：取大鼠脑组织冠状切面，20%福尔马林固定，石蜡切片，HE染色，光镜下观察。1.2.6死亡率检测：按各组动物6h死亡数/各组动物数×100%计算。1.2.7统计学处理用±s表示检测结果，用t检验法比较组间差异的显著性。2实验结果2.1心脉灵注射液对内毒素休克大鼠血压的影响实验前大鼠平均血压为(18.30±0.56)kPa(n=25)，注入内毒素后血压呈不可逆性下降，1h降至(4.40±2.72)kPa，6h降为(3.36±3.36)kPa，与实验前相比有显著差异(P0.001)；治疗组血

10、压回升，1h升至(10.42±2.61)kPa，6h继续上升到(12.22±3.10)kPa(各组均为n=5)，病理组6h死亡率为57.14%，其余组无死亡。2.2心脉灵注射液对内毒素休克大鼠海马组织NOS活性的影响病理组1h、6h海马组织NOS活性迅速降低，与正常组比较有显著差异(P0.001)，随着休克的发展，NOS活性呈下降趋势；治疗组1h、6hNOS活性较病理组明显升高(分别为P0.01、P0.001)。见表1。表1心脉灵注射液对内毒素休克大鼠海马组织NOS活性的影响(nmol/(ming)；±s；n=5)组别NOS活性1h6h正常组0.6218±

11、;0.0719病理组-0.3109±0.0777*-0.4275±0.0719*治疗组0.1166±0.0991*0.3109±0.0777*注：与正常组比较*P0.05*P0.01*P0.001； 与病理组比较P0.01P0.0012.3心脉灵注射液对内毒素休克大鼠脑系数的影响正常组1h脑系数为0.93±0.01，病理组1h、6h脑系数分别为1.05±0.05，1.09±0.04，均显著高于正常组(P0.05)；用心脉灵注射液治疗后，脑系数呈持续降低趋势；1h、6h分别为1.03±0.06，1.00±0

12、.06，与病理组比较差异不明显(各组均为n=5)。2.4心脉灵注射液对内毒素休克大鼠海马CA1区神经元形态结构的影响光镜下，正常组CA1区神经元呈复层排列，细胞形态正常；病理组1h变化不明显，6h可见神经元排列紊乱，有的出现核固缩、核碎裂、空泡变性，部分神经元肿胀、溶解、脱失成为鬼影细胞，并有神经细胞被噬现象，血管与周围组织间隙加宽；治疗组CA1区神经元排列整齐，细胞结构基本正常，神经元周围组织未见明显异常，6h比1h有更明显的改善。3讨论用静脉注射内毒素的方法复制大鼠休克模型，结果显示动脉血压呈不可逆下降。动物表情淡漠，四肢厥冷，呼吸微弱，相当于中医厥证的阳气衰微型，进一步发展可导致死亡。用

13、心脉灵注射液治疗后，大鼠血压持续回升，动物肢体转温、表情自然、呼吸平稳，并且无死亡。说明心脉灵注射液具有回阳救逆、益气固脱的作用，能够升高血压、降低死亡率，对内毒素休克有显著疗效。一氧化氮(NO)是一种具有多种生理功能的介质，能够调节微血管血流、抑制血小板聚集、防止白细胞激活和附壁4。NO合成释放异常与内毒素休克有密切关系，由于NO必须在NOS催化下以L-Arg为底物合成，故本实验通过检测海马组织NOS活性来反映NO的变化情况，以探讨心脉灵注射液抗内毒素休克的机理。实验结果显示，内毒素休克大鼠的海马组织NOS活性较正常组明显降低，并随休克的发展呈持续下降趋势。海马神经元对缺血缺氧尤为敏感5，当

14、内毒素入血激活机体某些潜在的反应系统引起微循环障碍时，脑组织灌流不足，可导致海马神经元的损伤；此外内毒素刺激机体产生细胞因子、氧自由基等，也可在一定程度上造成海马神经元的损伤。这与我们在光镜下观察到的病理组海马CA1区神经元明显损伤、脱失、神经细胞及细胞间质水肿的结果是一致的。由于海马神经元中有浓集的NOS，结合NOS活性及海马神经元形态观察结果，我们推测：NOS活性降低是由海马组织被破坏、大量NOS神经元损伤、丢失引起的。NOS活性下降使NO的产生减少，因而血管收缩，血液灌流更加不足，海马组织的损伤和脑细胞的破坏愈加严重。对海马CA1区形态结构观察结果显示：病理组6h的损伤明显重于1h。同时血液灌流障碍引起脑组织缺血缺氧，脑细胞能量代谢障碍，钠泵功能减低，毛细血管通透性增高，导致脑水肿。病理组脑系数较正常组明显升高，正反映了脑水肿的存在。提示：NOS活性下降促进了海马损伤及脑水肿，进一步导致脑功能障碍，使休克恶化。由此推测：NOS活性降低在内毒素休克的发展过程中有重要意义。实验还观察到，治疗组海马组织NOS活性较病理组显著增高，这反映出海马组织结构得到保护、NOS神经元功能逐渐恢复，与光镜下对海马CA1区的形态学观察结果相吻合。可见心脉灵注射液有良好的保护脑组织、增强海马组织NOS活性的作用。作者简介：