广东黄秋葵黄脉曲叶病样中检测到烟粉虱传双生病毒_图文

1、 66勉扬保力2010其等围广泛种植,是一种深受欢迎的蔬菜作物。近年来,中国大陆从我国台湾及日本引进黄秋葵种植。目前,在广东、北京、上海、山东、江苏、浙江、海南和福建等地均有栽培。黄脉花叶病和曲叶病是黄秋葵生产上的主要病害。前者由黄秋葵黄脉花叶病毒(Okra yellow vein mosaic virus,OYVMV、秋葵黄脉花叶病毒(Bhendi yellow vein mosaic virus,BYVMV或墨西哥黄秋葵黄叶病毒(Okra mosaic Mexico virus, 0kMMV侵染引起;后者则由黄秋葵曲叶病毒(Okra leaf curl virus,(kLCuV、杰济拉棉花

2、曲叶病毒(Cotton leaf curl Gezira virus,CI.CuGV或木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMV等侵染引起;其中(YVMV和BYVMV是其生产上最主要的制约因子r1叱。上述这些病毒均属双生病毒科(Geminiviridae菜豆会色花叶病毒属(Begomovirus,由于该属病毒均由烟粉虱以持久方式传播,因此又称之为烟粉虱传双生病毒。2008年,广东省广州市花都区蔬菜基地发生了黄秋葵黄脉曲叶病,其症状与文献3描述的OYVMV症状有差异。本文报道了对黄秋葵黄脉曲叶病样的枪测与鉴定。l材料与方法1.1毒源材料黄秋葵黄脉

3、曲叶病样采自广东省广州市花都区花东蔬菜基地。1.2病样总DNA提取采用NaOH法H1提取病株总DNA,作为PCR 模板。1.3PCR扩增、克隆和序列测定利用烟粉虱传双生病毒通用简并引物AV494和CoPR进行PCR扩增,预期特异片段大小为570bp。PCR反应体系为:lo×PCR反应缓冲液2.5肛I。、25mmol/L MgCl21.5弘I。、10mmol/L dNTPs0.5“L、5pmol/L的3端和5端简并引物各2.5ttL、Taq酶(TaKaRa1U,上述病株总DNA (1520ng/mI,1弘I。作为模板,加双蒸水至25弘L。94预变性4min,然后94变性1min,50退

4、火45S,72延伸45S,30个循环,72最终延伸10min。反应结束,取lo”L PCR产物在1.2%琼脂糖凝胶上电泳检查结果。取3个病株的PCR特异片段分别克隆到T_载体(Promega公司上,随机选取每个病株克隆各1个进行序列测定。1.4序列分析通过上述方法获得570bp特异片段序列。利用美国生物技术信息中心(national center for bio-technology information,NCBl的BI。AST(basic local alignment search t001程序,对3个特异序列进行比较及同源性检索。2结果与分析2.1田间病株症状田间黄秋葵病株典型症状表现

5、为叶脉黄化,在叶片正面形成网络状,在叶背面叶脉肿大突起明显,叶片向下卷曲,叶质脆硬;病株幼叶症状明显,叶小且向下卷曲,甚至整片幼叶黄化,而老叶症状不明显或不表现病症。植株若早期被感染,则表现矮化、植株结实少且小。在发生黄脉曲叶病的黄秋葵田间,病株率高达60%以上。a:叶脉黄化;b:叶脉肿大;c:健康叶片 图l黄秋葵黄脉曲叶病株症状36卷第1期董迪等:广东黄秋葵黄脉曲叶病样中枪测到烟粉虱传双生病毒672.2PCR检测结果利用烟粉虱传双生病毒特异简并引物对黄秋葵黄脉曲叶病样进行PCR检测,结果显示:从这些病样总DNA中均能扩增获得1条大小约570bp的特异片段(图2,与预期大小一致。表明这些黄秋葵

6、黄脉曲叶病样中含有烟粉虱传双生病毒。1:DNA分f醋标准(100bp ladder;2:CK一;3-7:待检测黄秋葵病样;8:ToLCGuV(CK+l图2黄秋葵黄脉曲叶病样PCR检测结果2.3特异片段的克隆及序列分析结果黄秋葵黄脉曲叶病样的PCR特异片段克隆及序列比较结果显示:3个片段序列完全相同。BI。AST结果表明,与该特异片段序列有同源关系的病毒均属双生病毒科菜豆金色花叶病毒属,其中与CLCuMV-G6DNAA6的序列相似性高达99%,与CLCuMV其他8个分离物、CLCuV(8个分离物及CLCuRV-Sirsa:04的DNAA序列相似性均大于95%;而与BYVMV(4个分离物、OkYV

7、MV-201、OkLCuMV及CLCuGV-Okra/Niger的DNAA序列相似性均小于88%(表1。这些结果进一步表明:广东黄秋葵黄脉曲叶病样存在烟粉虱传双生病毒,且该病毒与CLCuMV分离物G6高度同源。3讨论本研究在国内首次报道了在表现黄脉曲叶病的黄秋葵中检测到烟粉虱传双生病毒,而且该病毒PCR特异片段与发生在同一地区侵染朱槿的CLCuMV分离物G6的DNAA相似性达99%。黄秋葵与朱槿同属锦葵科,先前的研究表明,广东多个地区的朱槿已遭受CLCuMV的严重危害s-63,而发生黄秋葵黄脉曲叶病的菜区周边朱槿曲叶病也严重发生;同时,该病毒传播介体烟粉虱在该地区普遍存在。因此推测,广东黄秋葵

8、黄脉曲叶病很可能是由CLCuMV朱槿株系侵染所致。作者正在克隆该病毒分离物的全基因组并构建侵染性克隆加以验证。由于广东的黄秋葵病株表现为叶脉黄化、叶脉肿大、花叶和曲叶等症状,所以称之为黄秋葵黄脉曲叶病。但PCR特异片段序列比较结果显示,该病毒与国外报道的侵染危害黄秋葵的0YVMV、BYVMV、0kI。CuMV和CLCuGV等相似性均小于88%(表1,说明该病毒分离物明显不同于目前世界上已报道的危害黄秋葵的烟粉虱传双生病毒。至于广东黄秋葵黄脉曲叶病是否仅由CLCuMV朱槿株系侵染引起,还是存在其他病毒或复合侵染引起,尚需要做进一步研究。表1与广东黄秋葵中烟粉虱传双生病毒DNA相似性较高的Bego

9、movirus病毒分离物¨1CLCuMV:木尔坦棉花曲叶病蓐(Cotton leaf curl Multanvirus;ClfuV:棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus;CLCuRV:拉贾基妞棉花曲叶病毒(cotton leaf curl Rajasthan virus;0YVMV:黄秋葵黄脉花叶病(Okrayellowvein?rlosaicvirus;BY、,MV:秋葵黄脉花叶病毒(Bhendi yellow vein mosaic virus;CLCuGV:杰济拉棉花曲ut病毒(Cotton leaf curl Gezira virus;okLCuMV:马

10、里黄秋葵曲叶病毒(Okra leaf curl Mali virus。目前,世界上报道可引起棉花曲叶病的至少有6种,包括CLCuMV、CIuGV、CLCuRV、Cotton lea厂crumple viru5(CI.CrV、Cotton lea f curl Alabad viru5(CIuAV和Cotton lea f curl Kokhran virus(CLCuKV81,其中CLCuMV和CLCuGV的 广东黄秋葵黄脉曲叶病样中检测到烟粉虱传双生病毒作者:董迪, 何自福, 柴兆祥, Dung Di, He Zifu, Chai Zhaoxiang作者单位:董迪,Dung Di(甘肃农业大

11、学草业学院,兰州,730070;广东省农业科学院植物保护研究所,广州,510640, 何自福,He Zifu(广东省农业科学院植物保护研究所,广州,510640, 柴兆祥,Chai Zhaoxiang(甘肃农业大学草业学院,兰州,730070刊名: 植物保护英文刊名:PLANT PROTECTION年,卷(期:2010,36(1被引用次数:0次参考文献(9条1.Ali M.Hossain M Z.Sarker N C Inheritance of Yellow vein mosaic virus(YVMVtolerance in a cultivar of okra(Abelmoschus e

12、sculentus(LMoench 20002.Jose J.Usha R Bhendi yellow vein mosaic disease in India is caused by association of a DNA satellite with a Begomovirus 2003(23.Sastri K S M.Singh S J Effect of Yellow vein mosaic virus infection on growth and yield of okra crop 1974(34.刘玉乐.蔡健和.李冬玲中国番茄黄化曲叶病毒-一个双生病毒新种 1998(25.

13、何自福.毛明杰.虞皓朱槿曲叶病样中烟粉虱传双生病毒的分子检测 20076.毛明杰.何自福.虞皓.李华平侵染朱槿的木尔坦棉花曲叶病毒及其卫星DNA全基因组结构特征期刊论文-病毒学报 2008(17.Zhou Xueping.Liu Yule.David J Four DNA-A variants among Pakistani isolates of Cotton leaf curl virus and their affinities tO DNA-A of geminivirus isolates from okra 19988.Wauquet C M.Stanley J Revising the way we conceive and name viruses below the species level:A review of geminivirus taxonomy calls for new standardized isolate descriptors 20059.Harrison B D.Li