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文档简介

1、粒细胞抗体测定方法流式细胞仪 (BeckmanCoulter，贝克曼库尔特 )原理：直接免疫荧光法。 FITC 标记的各型多克隆抗体，加到经溶血处理后的样本中，与粒系胞膜上的相应的 IgG-Fc 片段结合，经过洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析标本采集与处理受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态，空腹采血。采集部位静脉采血抗凝剂EDTA或肝素抗凝血要求1样本量至少 1ml。2 样本应在采集后 6 小时内处理，冷冻的标本不能用。3 样本白细胞计数应在 4.0-10.0 ×109 /L 之间。若 >10.0 ×109 /L ，样本需要稀释，用 PBS稀释；若

2、 <4.0 ×109 /L ，应分离单个核细胞。4 溶血样本不能用。试剂品牌剂型规格贮存联科成分1 ：单克隆抗体液体1ML282：全血溶血试剂液体A：甲酸液体70ML室温B：碳酸钠等液体32ML室温C：多聚甲醛液体14ML室温3：鞘液液体20L室温4：清洗液液体5L室温5：荧光微球液体10ML2-8质控品BEKAMANCOULTER产品，未开瓶的试剂于 2-8 保存，可在有效期内保持稳定，稀释的试剂于 2-8 可稳定 2 周；每天校准一次：遇特殊情况随时进行校准。仪器BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra操作：1) 溶血： a. OptiLyse

3、 C(按说明书步骤溶血 )b. 使用 COULTER QPREP制备系统开机 - 显示 READY灯亮 - 选择 35SEC灯亮 - 开门 - 放入试管关门 - 自动进行溶血 - 显示 READY灯亮 - 开门 - 取出试管- 再进行下一个样品测定。（ * 溶血前确认 A/B/C 管路充满并能打出液体）2) 分别向已编好号的试管中加入 10 ul 单克隆抗体和同型对照 (IgG-FITC)2) 分别向试管中加入经溶血处理得样本 100u1。3) 混匀，避光，室温孵育 20-30 分钟，洗涤离心4) 上机测样报告结果报告百分数操作性能精密度批内五次重复 CV<2灵敏度500 1000 个荧光素分子参考值IgA<2.68%IgG<2.66%IgM<2.49%IgD<

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