同种异基因造血干细胞移植受者血清白介素18水平与急性移植物抗宿主病的关系(一)

1、同种异基因造血干细胞移植受者血清白介素 18水平与急性移植物抗宿 主病的关系一【摘要】本研究探讨同种异基因造血干细胞移植创b HSCT受者血清白介素18IL 18与急性移植物抗宿主病aGVHD的关系，查明血清 |_ 18在aGVHD发病中的作用，为临床早期预测aGVHD提供可靠指标。 采用双夹心酶联免疫吸附法ELISA检测62例dll。HSCT患者移植前及 移植后aGVHD发生前后血清18表达水平。62例患者被分为5组： A组为无aGVHD移植前组28例，指移植后没有发生aGVHD的患者 在移植前收集的标本；B组为有aGVHD移植前组34例，指移植后发 生aGVHD的患者在移植前收集的标本;C

2、组为aGVHD病症前组34例, 指临床出现I-II级aGVHD病症前3-4天的标本；然后根据I-II级aGVHD 患者治疗后，有无进展至山-IV级回忆性地将aGVHD前组患者分为疗效 好组18例和疗效差组16例；D组为I-II级aGVHD组；E组为III-IV 级aGVHD组16例。结果说明：34例患者发生I-II级aGVHD其中 16例aGVHD进展至III-IV级；发生aGVHD患者的血清1 18表达水平 显著高于未发生aGVHD患者，血清1 18表达水平上升发生在aGVHD 临床病症出现前3天左右；血清1 18表达水平与aGVHD的严重程度 呈正相关，与HLA配型、预处理方案及感染无关；

3、aGVHD早期血清18 表达水平与预后相关；血清IL 18高表达者aGVHD容易进展至III IV 级。结论：血清IL 18与aGVHD的发病相关联，检测血清IL 18水平 有助于aGVHD早期诊断，血清1 18表达水平可作为评估aGVHD病 情、判断预后的指标。【关键词】同种异基因造血干细胞移植白介素18急性移植物抗宿主病早期预测CorrelationbetweenSerumLevelsofIL 18andAcuteGraftVersusHostDisease in Patie ntsafterAlloge neicHematopoieticStemCellTra nspla ntati o

4、n AbstractThisstudywasaimedtoi nv estigatethecorrelati on betwee ntheseruml evelsofIL 18andacutegraftversushostdisease(aGVHD)inpatientsreceivedal logeneichematopoieticstemcelltransplantation(allo HSCT)，andtoexploretheroleofserumlL lSlevelsinthepathogenesisofaGVHDsoast oprovideareliablea ndearly in d

5、icatorforthediag no sisofaGVHD.62patie ntsrec eivedallo HSCTwereenrolledinthisstudy.Beforeandaftertransplantation.as wellasatonsetofaGVHD.theserumlevelsoflL 18wereanalyzedbyELISA.62pa tie ntsweredividedi nto5groups:groupAwithoutaGVHD(28cases)referredtoth epatie ntswhohad no aGVHDaftertra nspla ntati

6、o nan dwhosespecime nwereco llectedbeforetra nspla ntatio n;groupBwithaGVHDbeforetra nspla ntatio n(34c ases)referredtothepatie ntswhohadaGVHDaftertra nspla ntatio nan dwhosesp ecime nwerecollectedbeforetra nspla ntatio n;groupCbeforethe on setofaGVH D(34cases)referredtopatie ntswithl-llgradeaGVHDwh

7、osespecime nwerecoll ectedbefore3-4days,a ndaccordi ngtowhetherthel-llgradeaGVHDpatie ntsde velopedIII-IVgradeornotaftertreatme nt,thesepatie ntsweredivided in totwos ubgroupsretrospectively ,on esubgrouphadgoodcurativeeffect(18cases)a ndt heothersubgrouphad no t(16cases);groupDwithl-llgradeaGVHD;gr

8、oupEwithl ll-IVgradeaGVHD(16cases).Theresultsshowedthat34patie ntsdevelopedl-llgr adeaGVHD,the noutofthem16patie nts(16/34)developedHI-IVgradeaGVHD.T heserumlevelsofIL ISinthesepatientSwithaGVHDwerehighertha nthati npa tie ntswithoutaGVHD.About3daysbefore on setofaGVHD,theserumlevelsoflL 18startedto

9、increaseJheserumlevelsoflL 18werecorrelatedwiththeseve rityofaGVHD,but no correlati on wasfo un dwith in fectio n,con diti onin gregime n sanddisparityofHLA typing.TheserumlevelsoflL ISintheearlystageofaGV HDwerecorrelatedwithprog no sis.TheaGVHDofpatie ntswithhigherserumlev elsofIL 18easydevelopedt

10、oIII IVgradeaGVHD.Itisconcludedthattheseru mlevelofIL ISinthepatientsreceivedallo HSCTisrelatedtotheoccurrence ofaGVHD.DetectionsofwrumlL 18arehelpfulfortheearlydiagnosisofaGVH D;andtheserumlevelsoflL lSmaybeconsideredasareliableindicatortoevalu atetheprog no sisa ndseverityofaGVHD.Keywordsallogenei

11、chematopoieticstemcelltransplantationjIL 18;acutegraft versus hostdisease;earlypredict ionJExpHematol2007;15(3):553-557中国实验血液学杂志 JExpHematol2007;15(3同种异基因造血干细胞移 植受者血清白介素18水平和急性移植物抗宿主病的关系急性移植物抗 宿主病(aGVHD是同种异基因造血干细胞移植(汕0 HSCT)的主要 并发症之一。已有的研究说明，aGVHD发生与细胞因子密切相关1-4。目前临床上主要根据皮肤、肝脏、胃肠道受累病症的出现和程度对aGVHD进行诊断

12、和分级，缺乏直接的免疫学证据，因此需要寻找一种 能够直观、实时反映aGVHD的免疫学指标。本研究采用双夹心酶联免 疫吸附法ELISA检测62例汕0 HSCT患者其中HLA配型不合/单倍型 相合的34例移植前及移植后aGVHD发生时血清8表达水平，以 探讨血清18在aGVHD发病中的作用，为临床早期诊断 aGVHD提 供可靠指标。至今为止，有关olio HSCT后血清1 18水平报道，均 为hla全相合单纯allo BMT或olio PBSCT受者血清1 18水平检测 结果，我们第一次报道hla配型不合/单倍型相合訓o BMT加Silo PBSCT受者血清IL 18水平与aGVHD的关系。材料和

13、方法病例62例dllo HSCT患者为2004年1月至2004年11月期间北京大学人 民医院血液病研究所骨髓移植病房住院病人，男43例，女19例，中位 年龄309-49岁。62例中诊断为急性淋巴细胞白血病ALL13例，急性髓 系白血病AML15例,慢性髓系白血病CML27例,骨髓增生异常综合征 MDS3例,非霍杰金淋巴瘤NHL2例，再生障碍性贫血AA1例， 多发性骨髓瘤MM 1例。HLA配型全相合28例，HLA配型不合34 例，1个位点不合4例,2个位点不合18例,3个位点不合12例。所有患 者均签署知情同意书。本研究选择 34例I-II级aGVHD患者HLA配型 不合和全相合分别为20和14

14、例，其中16例为I-II级进展至III-IV级 aGVHD患者HLA配型不合和全相合分别 9例和7例，同时选择28例无aGVHD患者作为比照其中 HLA配型不合和全相合各14例。 aGVHD的诊断及分级参照参考文献5。62例患者分为5组：A组为 无aGVHD移植前组28例，指移植后没有发生aGVHD的患者在移植 前收集的标本；B组为aGVHD移植前组34例，指移植后发生aGVHD 的患者在移植前收集的标本；C组为aGVHD病症前组34例，指临床 出现1-11级aGVHD病症前3-4天的标本根据1-11级aGVHD患者治疗后， 有无进展至III-IV级回忆性将aGVHD前组患者分为疗效好组18例

15、 和疗效差组16例；D组为I-II级aGVHD组；E组III-IV级aGVHD组16例。28例无aGVHD组与34例有aGVHD组中位年龄无显著差异 P>0.05。另设感染组24例，是指没有合并aGVHD时单纯感染患者 的标本。血清标本米集分别于移植预处理前、预处理后输注干细胞前，移植后住院期间每周1、 4采集外周静脉血标本5ml，血液标本经离心后取血清于-80度冻存备 用。血清IL 18检测患者血清IL 18水平采用人IL 18试剂盒由深圳市炬英生物科技有 限公司提供用ELISA法检测。主要步骤如下：在微孔板留一空白对照 孔，其他孔加血清标本或不同浓度标准品100卩参加50 生物素标记

16、的抗体；室温孵育3小时后洗涤3次，参加100卩酶结合物；室温孵育30分钟后洗涤3次，参加100卩底物；室温避光，显色12至15分钟， 加100卩硫酸，终止反响，450nm处读取OD值。试剂盒的最小检测浓 度为 45pg/ml。HLA配型、预处理方案、供者造血干细胞发动及采集、GVHD预防、植活检测HLA配型A、B位点检测方法为低分辨方法，DR位点采用高分辨方法。 预处理方案阿糖胞苷4g/m2, HLA配型全相合者用1天移植前10天， HLA配型不合者用2天移植前10，移植前9天；Bu马利兰 2mg/kg d X3天；环磷酰胺1.8g/m2 d X2天；甲基环己亚硝脲ME CCNU250mg/m2< 1 天。供者造血干细胞发动及采集供者接受 hG CSF日本中外制药株式会 社产品5卩g/kg ，连续皮下注射5-6天，第4天采集骨髓有核细胞； 第5至6天采集PBSC总单个有核细胞数3-4 x 108/kgGVHD预防在经典的环孢菌素 A加短程甲氨喋呤方案根底上，加用霉酚 酸酯，HLA配型不合者加用抗人胸腺细胞球蛋白预防 GVHD 植活