生脉注射液细菌内毒素检查法研究

1、生脉注射液细菌内毒素检查法研究摘要：通过初步筛选试验和干扰试验对生脉注射液的细菌内毒素检查法进行了研究，结果表明，生脉注射液经10倍稀释，用灵敏度为0.25EU.mL-1的鲎试剂进行细菌内毒素检查无干扰作用。主题词：生脉注射液/标准；生脉饮；内毒素类/分析；鲎试剂中分类号：R286.0文献标识码：A文章编号：1007-3213(2000)04-0351-02Bacterial Endotoxin Test for Shengmai InjectionPENG Xiaoqing(The First Peoples Hospital of Guangzhou, Guangzhou 510180,

2、China)REN Jiemei(The First Affiliated Hospital, Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, China)Abstract: Preliminary screening test and interfering test were used to study the bacterial endotoxin test (BET) for Shengmai Injection (SI). The results showed that there is no interference when the

3、SI is diluted by 10 times and limulus reagent with a sensibility of 0.25EU/mLis used for BET.Key words:SHENGMAI INJECTION/standards;SHENGMAI DRINK;ENDOTOXINS/analysis; LIMULUS REAGENT细菌内毒素检查(Bacterial Endotoxin Test, BET)法具有灵敏、准确、快速和经济等优点，比热原检查法更加适应现代制药工业的发展。某些中药注射剂的BET法已有文献研究报道，本文就建立生脉注射液的BET法进行了探讨

4、。1实验材料细菌内毒素工作标准品(批号：1405-9605，效价：20EU，中国药品生物制品检定所)；鲎试剂(批号：990907，灵敏度：0.25EU/mL，规格：0.1mL，湛江安度斯生物有限公司)；鲎试剂复溶液(以下简称BET水，批号：990705，规格：2mL，湛江安度斯生物有限公司)；生脉注射液(批号：9902261，规格：10mL，常熟雷允上制药有限公司)。经除热原处理的刻度吸管、试管等。2实验方法与结果2.1鲎试剂灵敏度复核根据中国药典(2000年版)所载“细菌内毒素检查法”的规定对实验中所用的鲎试剂进行灵敏度复核，结果见表1。复核灵敏度Jc=0.5J，符合使用规定。2.2初步筛选

5、试验12.2.1供试品内毒素限值(JL)的确定JL=K/M，K为规定的给药途径，临床无任何不良反应的内毒素阈值，以EU/kg表示，静脉给药的K为5.0EU/kg；M为规定的给药途径，药品的家兔注射剂量，以mL/kg表示，根据部颁标准，生脉注射液的M为2mL/kg，计算得JL=5.0/2=2.5EU/mL。2.2.2稀释内毒素工作标准品用BET水把内毒素工作标准品稀释成0.5EU/mL的浓度备用。2.2.3稀释供试品计算供试品生脉注射液的稀释倍数(MVD)，MVD=JL/J，当J=0.5、0.25、0.125、0.06、0.03EU/mL时，相应地MVD0.5=5，MVD0.25=10，MVD0

6、.125=20，MVD0.06=40，MVD0.03=80。用BET水把供试品稀释成以上5个浓度备用。表1鲎试剂灵敏度复核结果鲎试剂批号J/(EU.mL-1)不同内毒素浓度J/(EU.mL-1)的灵敏度阴性对照Jc/(EU*mL-1)J1=0.5J2=0.25J3=0.125J4=0.069909070.25+-0.125 2.2.4加样及反应进行供试品阴性对照(NPC)和供试品阳性对照(PPC)两个系列的反应。NPC系列：取上述经灵敏度复核合格的鲎试剂(J=0.25EU/mL)10支，分别加BET水0.1mL，再各加上述稀释好的供试品0.1mL，每一供试品浓度重复两反应管。PPC系列：取上述

7、鲎试剂(J=0.25EU/mL)10支，分别加上述稀释好的供试品0.1mL，再各加上述稀释好的2J(0.5EU/mL)的内毒素工作标准品0.1mL，每一供试品浓度重复两反应管。将两系列的反应管置(371)水浴中，保温(602)min。反应结果见表2。结果表明供试品对BET法的相容性好，使用J=0.50.03EU/mL的鲎试剂在对应的供试品浓度(稀释580倍)下进行BET，没有干扰。 表2生脉注射液初步筛选试验结果MVD0.5=5MVD0.25=10MVD0.125=20MVD0.06=40MVD0.03=80NPC系列-PPC系列+ 2.3干扰试验取经灵敏度复核合格的鲎试剂(J=0.25EU/

8、mL)进行干扰试验。用BET水把供试品稀释10倍，按“鲎试剂灵敏度复核”项下试验，以BET水和稀释液分别制成含内毒素工作标准品0.5、0.25、0.125和0.06EU/mL4种浓度的内毒素溶液，水溶液和稀释液制成的每一浓度平行做4管，另取BET水和稀释液各做2管阴性对照2。对同一批号的生脉注射液进行了3次实验，结果见表3。3次实验结果显示，JM，Es=0.5(J=0.25EU/mL)，JM，Et在0.52.0JM，Es，认为生脉注射液经10倍稀释不干扰试验2。 表3生脉注射液10倍稀释液干扰试验结果J内毒素/(EU.mL-1)阴性对照反应终点浓度的几何平均值JG/(EU.mL-1)J1=0.

9、5J2=0.25J3=0.125J4=0.06水溶液+-JG，Es=0.125供试品10倍稀释液+-JG，Et=0.2102水溶液+-JG，Es=0.125供试品10倍稀释液+-JG，Et=0.1486水溶液+-JG，Es=0.125供试品10倍稀释液+-JG，Et=0.2102 3讨论 实验结果表明，生脉注射液经10倍稀释后可用灵敏度为0.25EU/mL的鲎试剂进行细菌内毒素检查。用同一批号鲎试剂对同一厂家生产的5个批号的生脉注射液进行相同浓度的重复试验，结果与上述一致。通过初步筛选试验，可以确定供试品有效稀释范围和可使用的鲎试剂灵敏度范围。从初步筛选试验确定的供试品有效稀释范围内选定一个浓度，使用相应灵敏度的鲎试剂来做干扰试验，可以减少干扰试验的盲目性，减少试剂消耗和节省时间。初步筛选试验中鲎试剂灵敏度，可以在0.50.03EU/mL范围内根据方便任意选择，经实验，用以上几个灵敏度的鲎试剂进行初步筛选试验结果一致。本文初步筛选试验和干扰试验均选择灵敏度为0.25EU/mL的鲎试剂是考虑其较常用且经济。作者简介：彭晓青(1973-)，女，药师彭晓青（广州市第一人民医院，广州5101