GB坂崎肠杆菌检验

1、GB坂崎肠杆菌检验2022-3-32 Enterobacter sakazakii(ES)Enterobacter sakazakii(ES)2022-3-33内内容容第一部分：一般特征第一部分：一般特征第二部分：流行病学特征第二部分：流行病学特征第三部分：第三部分：ESES的检验的检验2022-3-34第一部分：一般特征第一部分：一般特征命名命名培养特征培养特征生化反应生化反应抵抗力抵抗力增殖能力增殖能力致病性致病性2022-3-35 1980 1980年之前一直被称为年之前一直被称为黄色阴沟肠杆菌黄色阴沟肠杆菌。 DNA-DNADNA-DNA杂交杂交 生化反应生化反应 黄色素黄色素 抗生素

2、敏感性抗生素敏感性 一、命名2022-3-36二、二、培养特征培养特征 G G无芽孢杆菌，兼性厌氧，在无芽孢杆菌，兼性厌氧，在6-476-47范范围内均可生长，适温围内均可生长，适温35-3735-37 营养要求不高：营养要求不高： VRBGAVRBGA、TSATSA、NANA、MACMAC、EMBEMB、其他、其他与其他常见肠杆菌相似与其他常见肠杆菌相似2022-3-37三、生化反应三、生化反应 生化反应结果D-山梨醇-产生吐温80脂酶+细胞外Dnase+氧化酶试验-黄色菌落 +-葡萄糖苷酶 +8ES及亲缘关系较近的肠杆菌生化反应比较试验生化反应1阪崎肠杆菌阴沟肠杆菌产气肠杆菌成团肠杆菌日勾

3、维肠杆菌赖氨酸脱羧酶精氨酸双水解酶鸟氨酸脱羧酶KCN生长v发酵:蔗糖()卫矛醇()()核糖醇()棉子糖vD-山梨醇v-甲基-葡萄糖甙()D-阿拉伯糖醇()黄色素()注： ：90-100；() ：75-89%； V ：25-74；()：10 -24； ：0-9第三部分第三部分食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验阪崎肠杆菌检验2022-3-310主要内容主要内容一、制订的主要依据一、制订的主要依据二、二、食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 阪崎肠杆菌检阪崎肠杆菌检验验制订的主要依据制订的主要依据 ISO 2006年“乳和乳制品中阪崎肠杆菌的检测”（Milk and milk

4、 productsDetection of Enterobacter sakazakii）方法； 美国FDA 2002年颁布的“婴儿配方粉中阪崎肠杆菌的分离和计数”（Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant Formula）方法； 2004年荷兰乳及乳制品控制中心对各种阪崎肠杆菌检测方法的比较研究； 雀巢研究中心2005年环境样品中阪崎肠杆菌快速检测方法； 阪崎肠杆菌快速检测培养基DFI研究资料。 SN第一部分：分离与计数方法 第二部分：PCR方法 第三部分：荧光PCR

5、方法2022-3-313常见选择性培养基常见选择性培养基 DFI (Oxoid, UK)DFI (Oxoid, UK) ESIA (AES, France)ESIA (AES, France) R RF F（R&F LaboratoriesR&F Laboratories，SwitzerlandSwitzerland） OK mediumOK medium 其他：国内阪崎肠杆菌显色培养基、其他：国内阪崎肠杆菌显色培养基、CES (Merck, CES (Merck, Germany)Germany)，NA+ NA+ -MUG-MUG2022-3-314显色培养基的特点显色培养基

6、的特点 -葡萄糖苷酶活性葡萄糖苷酶活性指示剂：指示剂：5-溴溴-4-氯氯-3-吲哚吲哚- - ，D-D-吡喃葡糖甙（吡喃葡糖甙（X X GlcGlc）4-4-甲基伞形酮甲基伞形酮- - -D-D-葡糖苷（葡糖苷（ -MUG-MUG）1.1.4-4-邻硝基苯邻硝基苯- - -D-D-吡喃葡糖甙吡喃葡糖甙 2022-3-3152022-3-316选择性培养基的选择选择性培养基的选择1 1. . FDAFDA方法使用方法使用VRBGAVRBGA，ISO ISO 方法中使用方法中使用ESIAESIA，本方，本方法中我们选用法中我们选用DFIDFI。和和DFIDFI的基本原理相似，二者都是根据的基本原理

7、相似，二者都是根据ESES能产生能产生-葡萄糖苷酶，分解底物葡萄糖苷酶，分解底物XaGlcXaGlc产生有色菌落。产生有色菌落。对对ESES的选择性差，的选择性差，ESES、阴沟肠杆菌和成团肠杆菌等、阴沟肠杆菌和成团肠杆菌等多种肠道菌都可以在该平板上生长并产生粉紫色多种肠道菌都可以在该平板上生长并产生粉紫色菌落，胆汁酸沉淀形成紫色晕圈。菌落，胆汁酸沉淀形成紫色晕圈。即：不能观察到即：不能观察到ESES的特征性菌落。的特征性菌落。2022-3-3显色培养基的选择性较好显色培养基的选择性较好 DFIDFI对对ESES的选择性较好，的选择性较好，ESES形成的蓝绿色特征性菌落易形成的蓝绿色特征性菌落

8、易于辨认，而且：于辨认，而且： 硫化氢指示剂可以区分硫化氢指示剂可以区分ESES和产生少量和产生少量-葡萄糖苷酶但葡萄糖苷酶但H H2 2S S阳阳性菌株（如普通变形杆菌）。性菌株（如普通变形杆菌）。 ESES都可以在都可以在DFIDFI平板上生长并产生蓝绿色菌落平板上生长并产生蓝绿色菌落 其他常见菌在其他常见菌在DFIDFI平板的菌落颜色平板的菌落颜色白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希氏白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希氏菌、泛菌属的多种菌等菌、泛菌属的多种菌等黄色菌落：赫氏埃希氏菌黄色菌落：赫氏埃希氏菌黑褐色、粉色或中心蓝绿菌落：少量菌种黑褐色、粉色或中心蓝绿菌落：

9、少量菌种 ESIA:ESIA:蓝蓝色，色，1-3mm1-3mm172022-3-3选择性增菌肉汤的选择选择性增菌肉汤的选择 FDAFDA方法选择方法选择EEEE肉汤，肉汤，ISOISO方法选择方法选择mLST-VmmLST-Vm，即在，即在LSTLST中加入中加入NaclNacl和和VmVm。本标准使用。本标准使用mLST-VmmLST-Vm。 EEEE肉汤适合所有肠道菌群的生长繁殖，这就可能肉汤适合所有肠道菌群的生长繁殖，这就可能对对ESES的生长产生竞争性抑制作用，降低检出率。的生长产生竞争性抑制作用，降低检出率。 研究证明与其他肠杆菌科细菌（如沙门氏菌，大研究证明与其他肠杆菌科细菌（如沙

10、门氏菌，大肠埃希氏菌等）相比，肠埃希氏菌等）相比，ESES具有较高的耐渗透压能具有较高的耐渗透压能力。加入的力。加入的NaclNacl在保证在保证ESES良好生长的同时，可以良好生长的同时，可以有效地抑制上述其他细菌的生长。有效地抑制上述其他细菌的生长。 VmVm可有效地抑制可有效地抑制G+G+菌的生长。而较高的生长温度菌的生长。而较高的生长温度可以进一步抑制其他细菌的生长。可以进一步抑制其他细菌的生长。2022-3-319二、食品卫生微生物学检验二、食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验阪崎肠杆菌检验2022-3-320本标准修改采用本标准修改采用 ISO/TS 22964 （ 1st edit

11、ion 2006-02-01 ）Milk and milk products Detection of Enterobacter sakazakii FDA July 2002; Revised August 2002 Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant Formula 2022-3-321第一法：阪崎肠杆菌的检验第一法：阪崎肠杆菌的检验第二法：阪崎肠杆菌的计数第二法：阪崎肠杆菌的计数2022-3-322第一法第一法 阪崎肠杆菌的检验阪崎肠杆菌的检验阪崎肠杆菌检验

12、程序阪崎肠杆菌检验程序 报 告TSA251，48h4h生化鉴定挑取黄色菌落DFI琼脂361，24 h2h挑取蓝绿色菌落1mL + mLST-Vm 10mL440.5，24 h2h检样100 g（mL）+BPW稀释液 900 mL361，18 h2h前增菌选择性增菌选择性分离生 化 鉴 定100 g（ mL ）2022-3-3245.1 5.1 前增菌和增菌前增菌和增菌 左图：未混合；左图：未混合； 右图：混合后。右图：混合后。加样入已预热到44的BP中2022-3-3255.2 分离分离DFIDFI36361124 h24 h2h2h2022-3-326TSATSA： 25 25 培养后培养后

13、典型典型ESES：黄色：黄色阴性对照阴性对照E. coli E. coli ATCC 25922ATCC 25922：白色菌落：白色菌落黄色素黄色素2022-3-3275.3 鉴定（生化反应）鉴定（生化反应）生化试验特征黄色素产生氧化酶L-赖氨酸脱羧酶L-鸟氨酸脱羧酶（）L-精氨酸双水解酶柠檬酸水解()发酵：D-山梨醇（）L-鼠李糖D-蔗糖D-蜜二糖苦杏仁甙注：99%阳性；99%阴性；（）90%99%阳性；（）90%-99%阴性。2022-3-328商业生化鉴定系统的应用商业生化鉴定系统的应用 推荐使用的推荐使用的ESES生化鉴定方法有很多，主要有生化鉴定方法有很多，主要有API API 20

14、E20E，ID 32EID 32E，Biolog GN2 MicroPlateBiolog GN2 MicroPlate，VITEK VITEK GNI+GNI+等。等。上述方法都比较成熟，稳定性较好，已被许多国家和组上述方法都比较成熟，稳定性较好，已被许多国家和组织的标准采用。织的标准采用。 在肠杆菌的生化鉴定中使用最广泛的是在肠杆菌的生化鉴定中使用最广泛的是API 20EAPI 20E和和Vitek GNI+Vitek GNI+。2022-3-329API 20EAPI 20E生化鉴定板典型生化反应图示生化鉴定板典型生化反应图示 API 20E反应编码API 20E结果评价3345 373Excellent identification3305 173Excellent identification3305 363Very good identification3305 373Good iden