实验细胞器的分离

1、细胞器的分离细胞器的分离:细胞核与线粒体的分级分离细胞核与线粒体的分级分离实验六实验六一、实验目的一、实验目的了解用差速离心的方法分级分离细胞组分了解用差速离心的方法分级分离细胞组分的原理和过程。的原理和过程。熟悉离心机、匀浆器的使用方法。熟悉离心机、匀浆器的使用方法。 差速离心：根据被分离物质的体积差异，逐渐提高离心差速离心：根据被分离物质的体积差异，逐渐提高离心速度以分离大小不同的细胞器的方法。体积大的沉降快，速度以分离大小不同的细胞器的方法。体积大的沉降快，反之，则慢。反之，则慢。可分离较大颗可分离较大颗粒，如细胞核粒，如细胞核可分离较小颗粒，如线粒可分离较小颗粒，如线粒体、高尔基体、溶

2、酶体体、高尔基体、溶酶体上清液上清液二、实验原理二、实验原理 密度梯度离心法密度梯度离心法：使离心溶液含有密度逐步增加的使离心溶液含有密度逐步增加的（密度梯度）极易溶解的惰性物质，例如蔗糖，利用（密度梯度）极易溶解的惰性物质，例如蔗糖，利用这一密度梯度来维持这一密度梯度来维持重力的稳定性重力的稳定性和和抑制对流抑制对流。操作。操作时，将细胞匀浆液置于离心管的最上层，随后离心，时，将细胞匀浆液置于离心管的最上层，随后离心，这样，不同大小、形状、密度的细胞结构，由于它们这样，不同大小、形状、密度的细胞结构，由于它们的沉降系数不同，就会以不同的速率向下移动，分别的沉降系数不同，就会以不同的速率向下移

3、动，分别集中到相应的密度区带而得以分离。集中到相应的密度区带而得以分离。三、实验步骤三、实验步骤: 蛙肝蛙肝 冷生理盐水冷生理盐水10ml洗，吸干水分，放在小烧杯中洗，吸干水分，放在小烧杯中 加入预冷蔗糖液加入预冷蔗糖液(少于少于9ml)，剪碎，剪碎 匀浆匀浆 纱布过滤纱布过滤至至15ml离心管，溶液体积离心管，溶液体积14ml。 滤液滤液做做涂片涂片 2000 rpm离心离心10 min 沉淀沉淀 上清液上清液 做涂片做涂片 加预冷蔗糖液至加预冷蔗糖液至10ml，吹打均匀，吹打均匀 5ml,11000 rpm离心离心10 min，弃上清液，弃上清液 混合液混合液 沉淀沉淀 2000 rpm离

4、心离心10 min，弃上清液，弃上清液 加加2ml预冷蔗糖液，吹打均匀预冷蔗糖液，吹打均匀 沉淀沉淀 混合液混合液 加加1ml蔗糖液，混匀蔗糖液，混匀 11000 rpm离心离心10 min 做做涂片涂片 沉淀沉淀 上清液上清液 取少许于载片取少许于载片, 取取1滴于载片滴于载片 加健那绿加健那绿B 混匀混匀 加健那绿加健那绿B 混匀混匀 、片，自然干燥后，放入、片，自然干燥后，放入Giemsa染染液缸中染色液缸中染色5min，用蒸馏水洗去染液，镜检。，用蒸馏水洗去染液，镜检。 片先滴片先滴12滴健那绿滴健那绿B于玻片上，挑少许于玻片上，挑少许沉淀在染液中混匀，染沉淀在染液中混匀，染5min，加盖片镜检。，加盖片镜检。 片先滴片先滴12滴健那绿滴健那绿B于玻片上，滴一滴于玻片上，滴一滴上清液在染液中混匀，染上清液在染液中混匀，染5min，加盖片镜检。，加盖片镜检。实验注意事项：实验注意事项： 1.冰水中匀浆肝组织；冰水中匀浆肝组织； 2.过滤匀浆液的纱布事先用预冷蔗糖液过滤匀浆液的纱布事先用预冷蔗糖液浸湿；浸湿； 3.收集液体要避免吸到脂肪层；收集液体要避免吸到脂肪层； 4.标记玻片。标记玻片。实验报告实验报告： 1.绘制绘制1-5号涂片镜下形态图；号涂片镜下形态图； 2.分析比较不同涂片间结果的差异及原因。分析比较