以紫杉宁为原料合成多药耐药逆转活性紫杉烷类化合物

1、以紫杉宁为原料合成多药耐药逆转活性紫杉烷类化合物于海涛1，潘文龙1，王金兰1，赵明1，沈敬山2，张树军1，(1 齐齐哈尔大学化学与化学工程学院，齐齐哈尔 161006；2 中国科学院上海药物研究所，上海 201203)摘要 目的：以紫杉宁为原料合成具有肿瘤细胞多药耐药逆转活性的taxinine NN-3类似物。方法：先将紫杉宁的9,10-乙酰氧基选择性水解、保护，再选择性水解5-肉桂酰基，然后还原13-酮羰基，重新引入肉桂酰基，再脱保护、乙氧基化。结果：以紫杉宁为原料，经过8步反应合成了具有肿瘤细胞多药耐药逆转活性的taxinine NN-3类似物。结论：紫杉宁的9,10-二羟基化合物在碱性条

2、件下容易发生开环反应，难以获得9,10-二乙氧基化合物。关键词 紫杉宁；多药耐药；Taxinine NN-1; Taxinine NN-3Synthesis of taxoid analogs against multidrug resistana from taxinineYU Hai-tao1, PAN Wem-long1, WANG Jin-lan1, ZHAO Ming1, SHEN Jing-shan2, ZHANG Shu-jun1 (1 College of Chemistry and Chemical Engineering, Qiqihar University, Qiqih

3、ar 161006; 2 Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 201230)Abstract：Objective To synthesize taxinine derivatives with activity against multidrug resistant from taxinine. Methods. The synthesiswas achived by selective deacetoxylation of 9,10 positions, protections

4、, then selective decinnamoyl group of 5 position, at last reduction of 13-carbonyl group, introduction cinnamoyl group over again, then deprotection, ethoxylation. Results Taxinine NN-3 analogs with activity against multidrug resistant were synthesized in 8 steps from taxinine. Conclusion At basic c

5、ondition 9,10-hydroxyl taxinine derivatives favorably get the ring opening reaction than to give 9,10-diethoxyl derivatives.Key words: taxinine; multidrug resistant; taxinine NN-1; taxinine NN-3多药耐药 (Multidruge Resistance, MDR) 是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生抗药性的同时，对结构和作用机制完全不同的多种抗肿瘤药物产生交叉抗药性，从而大大降低药物疗效的现象。东北红豆杉针叶

6、中的taxinine NN-11、taxinine NN-32、taxinine NN-73、taxinine NN-14以及从紫杉愈伤组织中分离得到的txinine NN-114等都显示较强的MDR逆转活性。但是，由于上述紫杉烷类化合物在紫杉针叶中的含量非常少，难以满足生物活性研究的需要。为了进行更高层次的活性试验，本研究用东北红豆杉针叶中的主要成分（约占新鲜针叶重量的0.1%）紫杉宁 (taxinine) 为原料，对体外实验MDR逆转活性最好的taxinine NN-1进行了合成5。但是动物试验结果表明，taxinine NN-1未显示很强的活性。推测原因可能是由于其9,10位或13-位乙

7、酰氧基在动物体液的作用下发生水解反应，生成了没有活性的其他衍生物，从而使taxinine NN-1在动物试验中失去活性。为了进一步探讨紫杉烷类化合物MDR逆转活性的构效关系，开发新型MDR逆转活性剂，本研究设计将taxinine NN-1的9,10位和13位乙酰氧基转换成较难水解的乙氧基的化合物1，并参照taxinine NN-1的合成方法，设计了如下合成路线 (Scheme 1)。但是，11在碱性条件下（无论是强减还是弱碱，室温或加热条件下）的乙氧基化很容易发生9,10-位的开环反应6，得不到化合物3 (Scheme 2)。推测可能是由于13-位羰基的存在有利于开环反应的进行，所以对合成路线

8、进行了如下调整（Scheme 3）。但在实际反应过程中，10的9,10-位羟基乙氧基化反应同由11合成3一样，无论是强碱还是弱碱，室温或者加热条件下，都容易发生9,10位的开环反应，得不到目标产物1。1 实验部分1.1 仪器材料Agilent 1100 series G1311A高压液相色谱仪；Varian Mercury-400核磁共振仪；MAT-95型质谱仪 (Thermo Finnigan公司) Perkin EImer 公司质谱仪；Model 341 polarimeter旋光仪；美国Nicolet公司Magna FTIR-750型傅立叶变换红外光谱仪；柱层析用硅胶：200-300 目

9、，青岛海洋化工厂。薄层层析硅胶板：烟台汇友硅胶开发有限公司 (20×20 cm)。1.2 主要化学试剂：紫杉宁（taxinine）由日本神户天然物化学有限公司提供。实验中所用正己烷、乙酸乙酯、甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷、二氧六环、四氢呋喃、丙酮、苯、吡啶等有机溶剂为上海国药集团化学试剂有限公司分析纯或化学纯化学试剂。1.3 合成反应以紫杉宁为原料合成taninine NN-1类似物 (2) 的合成路线如下：1.3.1. 由紫杉宁合成化合物7的反应氮气保护下，于1 L的烧瓶中加入紫杉宁3.00 g、无水1,4-dioxane 310 mL、无水甲醇310 mL、1 mol/L KO

10、H水溶液20 mL，冰浴下搅拌2小时，室温搅拌1小时，加入饱和NH4Cl水溶液100 mL，终止反应。然后将该混合液浓缩除去甲醇，用氯仿萃取 (3×200 mL)，再将得到的氯仿层依次用饱和NaHCO3水溶液 (1×300 mL)、饱和食盐水 (2×200 mL) 洗涤，用无水硫酸钠干燥后过滤、浓缩得3.90 g粗生成物的无定形固体。将该粗生成物用硅胶柱色谱分离 柱径：3.5 cm，硅胶117.0 g，洗脱剂：EtOAc-Hexane (4/6) 得二醇化合物11 (2.33 g, 92%) 的无色晶体。取0.19 g化合物11放入200 mL的烧瓶中，加入2.0

11、0 g PPTS，用38 mL无水CH2Cl2溶解后，加入2,2-二甲氧基丙烷9.6 mL，氮气保护下，室温搅拌1.5小时，加入饱和NaHCO3水溶液50 mL，终止反应。然后将该混合液用氯仿萃取 (3×50 mL)，得到的氯仿层依次用饱和NH4Cl水溶液 (1×30 mL)、饱和食盐水 (2×50 mL) 洗涤，用无水硫酸钠干燥后过滤、浓缩得2.20 g粗生成物的无定形固体。将该粗生成物用硅胶柱色谱分离 柱径：3.5 cm，硅胶110.1 g，洗脱剂：EtOAc-Hexane (4/6) 得化合物12 (2.07 g, 97%) 的白色微晶体。取5.21 g 化

12、合物12放入200 mL的烧瓶中，加入无水1,4-dioxane 47 mL、无水乙醇47 mL、搅拌溶解后，加入由3.80 g的硫酸羟胺、7.59 g的醋酸钠溶于47 mL水制成的水溶液，氮气保护下，于80oC搅拌20小时，冷却至室温后，于旋转蒸发仪上（45oC）浓缩除去乙醇，加入饱和食盐水100 mL。然后用乙酸乙酯萃取 (4×100 mL)，再将乙酸乙酯层用饱和食盐水 (2×100 mL) 洗涤，用无水硫酸钠干燥后过滤、浓缩得4.77 g粗生成物棕黄色固体。将上述粗生成物用硅胶柱色谱分离 柱径：4.2 cm，硅胶200.1 g，洗脱剂：EtOAc-Hexane (1/

13、1) 得化合物7 (2.60 g, 65%) 的白色晶体。. 由化合物7合成8的反应于300 mL的烧瓶中加入0.99 g化合物7、1.70 g的CeCl3·7H2O、0.87 g NaBH4，加入60 mL 1,4-dioxane搅拌10分钟后，分批滴加甲醇20 mL（每隔10分钟滴加0.5 mL）。甲醇滴加完毕后继续搅拌2小时，至反应原料消失，缓慢滴加30 mL丙酮消除剩余的NaBH4，加入300 mL饱和NH4Cl水溶液，然后用乙酸乙酯萃取 (4×100 mL)，再将得到的乙酸乙酯层用饱和食盐水 (2×200 mL) 洗涤，用无水硫酸钠干燥后过滤、浓缩得1.

14、03 g粗生成物白色固体。将上述的粗生成物用硅胶柱色谱分离 柱径：2.8 cm，硅胶50.0 g，洗脱剂：EtOAc-Hexane (4/6) 和EtOAc-Hexane (1/1) 得化合物13 (0.57 g, 56%)。于100 mL的烧瓶中加入0.33 g化合物13、DMAP（4-N,N-二甲基吡啶）0.19 g，用19 mL无水吡啶溶解后，加入乙酸酐87 L，室温搅拌2.5小时，加入100 mL饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取 (4×50 mL)，再将得到的乙酸乙酯层依次用饱和NH4Cl水溶液 (1×100 mL)、饱和NaHCO3水溶液 (1×100 mL)

15、、饱和食盐水(2×100 mL) 洗涤，用无水硫酸钠干燥后过滤、浓缩得0.39 g粗生成物白色固体。将上述的粗生成物用硅胶柱色谱分离 柱径：2.8 cm，硅胶50.0 g，洗脱剂：EtOAc-Hexane (4/6) 得化合物8 (0.34 g, 92%) 的白色晶体。. 化合物8的肉桂酰化反应于100 mL的烧瓶中加入0.30 g化合物8、DMAP 0.39 g，用13 mL无水吡啶溶解后，加入肉桂酰氯1.05 g，升温至70-80oC搅拌21小时，加入100 mL饱和NaHCO3水溶液，用乙酸乙酯萃取 (3×50 mL)，再将得到的乙酸乙酯层依次用饱和NH4Cl水溶液

16、(1×100 mL)、饱和食盐水 (2×100 mL) 洗涤，用无水硫酸钠干燥后过滤、浓缩得0.48 g粗生成物棕黄色固体。上述粗生成物用硅胶柱色谱分离 柱径：2.8 cm，硅胶50.0 g，洗脱剂：EtOAc-Hexane (3/7) 得化合物9 (0.37 g, 98%) 的白色晶体。. 化合物9的脱保护反应于100 mL的烧瓶中加入0.21 g化合物9、加入36 mL的80%醋酸水溶液，室温搅拌24小时，加入100 mL饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取 (4×50 mL)，再将得到的乙酸乙酯层依次用饱和NaHCO3水溶液 (3×100 mL)、饱和食盐水

17、 (2×100 mL) 洗涤，用无水硫酸钠干燥后过滤、浓缩得0.24 g粗生成物白色无定形体。将上述粗生成物用硅胶柱色谱分离 柱径：1.0 cm，硅胶12.0 g，洗脱剂：EtOAc-Hexane (4/6)和EtOAc-Hexane (1/1) 得化合物10 (0.17 g, 87%) 的白色晶体，原料回收0.03 g (12%)。. 化合物10的乙氧基化反应于5 mL的烧瓶中加入0.04 g化合物10、0.02 g碳酸钾，用1.5 mL无水DMF溶解，室温搅拌22小时，加入10 mL饱和NH4Cl水溶液，用乙酸乙酯萃取 (3×20 mL)，再将得到的乙酸乙酯层用饱和食盐

18、水 (2×30 mL) 洗涤，用无水硫酸钠干燥后过滤、浓缩得0.05 g粗生成物白色无定形固体。将该粗生成物用硅胶柱色谱分离 柱径：1.5 cm，硅胶15.0 g，洗脱剂：EtOAc-Hexane (3/7) 得化合物2 (5 mg,13%) 的白色晶体，原料回收0.01 g (26%)。2 讨论2-1. 关于化合物7的还原反应关于化合物7的13位羰基的还原反应（Scheme 2-5），直接用NaBH4还原，容易发生1,4-加成，不仅收率低，且生成物比较复杂，分离困难。因此加入了CeCl3，再用NaBH4还原，可以选择性地还原13位的羰基，生成物a体和b体的生成比为4/3。2-2. 关于化合物10的乙氧基化反应对于化合物10的乙氧基化反应，尽管13位的