《烟草及烟草制品 果胶的测定 离子色谱法》(报批稿)

1、ICS 65.160X 87备案号：中华人民共和国烟草行业标准YCYC/T XXX-2010烟草及烟草制品 果胶的测定 离子色谱法Tobacco and tobacco productsDetermination of pectinIon chromatographic method （报批稿）XXXX -XX-XX发布XXXX -XX-XX实施国 家 烟 草 专 卖 局 发 布前 言请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会（SAC/TC144/SC1）归口。本标准起草单位：安徽中

2、烟工业公司、上海烟草（集团）公司、江西中烟工业有限责任公司、广东中烟工业有限责任公司。 本标准主要起草人：陈开波、徐迎波、王程辉、瞿先中、孙文梁、廖堃、胡静。烟草及烟草制品 果胶的测定 离子色谱法1 范围本标准规定了烟草及烟草制品中果胶的离子色谱测定方法。本标准适用于烟草及烟草制品中果胶的测定。本方法测定果胶的检出限为0.27mg/g，定量限为0.90 mg/g。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法YC/T 3

3、1 烟草及烟草制品 试样的制备和水分测定 烘箱法3 原理采用乙醇除去试样中糖类等干扰物质，酸化后使用果胶酶分别酶解酸化液和残渣，酶解液通过离子交换分离后，采用电化学检测器定量测定半乳糖醛酸。果胶含量以半乳糖醛酸含量计。4 试剂除特殊要求外，均应使用分析纯试剂，水应符合GB/T6682中一级水的规定。4.1 半乳糖醛酸，含量97%（质量分数）。4.2 氢氧化钠溶液，50%（质量分数）。4.3 无水乙酸钠，优级纯。4.4 乙醇溶液，80%（体积分数）。4.5 苯甲酸溶液，0.1%（质量分数）。4.6 盐酸溶液，0.05 mol/L。4.7 乙酸-乙酸钠缓冲溶液，0.1 mol/L，pH 4.0。4

4、.8 果胶酶，30 u/mg。来源：Aspergillus niger。注：1个酶活力单位（u）定义为可在pH 3.5、55°C下每小时水解果胶生成1 mg半乳糖醛酸。4.9 果胶酶溶液，300 u/mL，由果胶酶（4.8）和乙酸-乙酸钠缓冲溶液（4.7）配制，即配即用。4.10 标准溶液4.10.1 半乳糖醛酸标准储备液称取30 mg半乳糖醛酸（4.1），精确至0.1 mg，以苯甲酸溶液(4.5)溶解，并定容至100 mL容量瓶中。该储备液置于4°C下保存，有效期为6个月。取用时，应放置至常温后使用。4.10.2 半乳糖醛酸标准系列溶液分别移取50.0 mL、100.0

5、mL、250.0 mL、500.0 mL和1000.0 mL半乳糖醛酸标准储备液（4.10.1）于100 mL容量瓶中，以苯甲酸溶液(4.5)稀释并定容至刻度。4.11 流动相 一级水作为流动相A。 移取50 %氢氧化钠溶液（4.2）13.1 mL，用水稀释定容至1 L，作为流动相B。 称取82 ±0.5 g无水乙酸钠(4.3)，水溶解后定容至1 L，作为流动相C。5 仪器及材料5.1 旋风式样品磨，40目筛。5.2 分析天平，精确至 0.1 mg。5.3 真空抽滤装置。5.4 定量滤纸。5.5 电热恒温水浴锅。5.6 水浴振荡器。5.7 离子色谱仪，配置四元梯度泵和电化学检测器。5

6、.8糖离子交换柱：固定相为苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，官能团为功能性季铵盐；分析柱，2 mm×250 mm，保护柱2 mm×50 mm。6 样品制备按照YC/T 31制备试样并测定水分含量。7 分析步骤7.1 样品处理7.1.1 除糖称取试样约1 g，精确至0.1 mg，置于150 mL磨口三角瓶中，加入100 mL乙醇溶液（4.4），在100 °C水浴中回流1.0 h，使用定量慢速滤纸趁热抽滤。7.1.2 酸化将滤纸及残渣转移至150 mL磨口三角瓶中。使用100 mL盐酸溶液（4.6）清洗残留在布氏漏斗壁上的试样残渣，并转移至三角瓶中，在100 °C水

7、浴中回流1 h，使用定量中速滤纸趁热抽滤，使用一级水将滤液定容至250 mL，得到溶液A。7.1.3 酶水解7.1.3.1 残渣酶水解将抽滤后滤纸及残渣转移至150 mL磨口三角瓶中，残留在布氏漏斗壁上的试样残渣，使用100 mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（4.7）清洗并转移至三角瓶中，加入1.0mL果胶酶溶液（4.9），在55 °C水浴中震荡2h，抽滤，使用一级水将滤液定容至250 mL，得到溶液B。7.1.3.2 酸化液酶水解取1.0mL溶液A于100 mL磨口三角瓶中，依次加入20 mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（4.7）和1.0 mL果胶酶溶液（4.9），在55 °C水浴中震荡

8、1h。酶解液转移至250 mL容量瓶中，加入1.0 mL溶液B，使用苯甲酸溶液(4.5)定容至刻度，得到溶液C。该溶液经过0.45 mm滤膜后待离子色谱分析用。7.2 离子色谱分析柱温：30 °C；流速：0.25 mL/min；进样量：25 µL；淋洗液洗脱程序见表1；检测器检测电位波形见表2。表1 淋洗液洗脱程序时间min流动相A% 流动相B %流动相C%0.0025601515.00256015表2 检测器检测电位波形时间s电压V积分状态0.000.100.200.10开始0.400.10结束0.41-2.000.42-2.000.430.600.44-0.100.50

9、-0.107.3 制作标准工作曲线根据半乳糖醛酸标准系列溶液（4.10.2）的浓度及其响应峰面积，建立半乳糖醛酸标准工作曲线，工作曲线线性相关系数应不小于0.999。7.4 样品测定根据保留时间定性和峰面积定量，测定溶液C（7.1.3.2）中的半乳糖醛酸含量，同时做一组空白试验以扣除干扰。烟草样品水解液离子色谱图参见附录A。7.5 结果的计算与表述样品中的半乳糖醛酸含量按照式（1）进行计算，果胶含量以半乳糖醛酸计。X=250´（C-C0）´V×100%（1）m´ (1-W) 式中：X试样中的果胶含量，%；C测试样品溶液中半乳糖醛酸浓度，单位为毫克每升（m

10、g/L）；C0空白样品溶液中半乳糖醛酸浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V溶液C的体积，单位为升（L）；m试样质量，单位为毫克（mg）；W试样含水率，%；取两次平行测定值的平均值作为样品的测定结果，两次平行测定值间的相对平均偏差不应大于5%，结果保留至小数点后1位。8 回收率本方法的回收率试验结果见表4。 表4 回收率试验结果 以%表示样品名称样品含量加标含量测定值回收率烤烟梗丝10.53.914.295%烤烟烟叶8.13.912.1103%白肋烟烟叶7.93.911.9103%香料烟烟叶7.13.910.895%烤烟型卷烟8.13.911.895%混合型卷烟9.13.912.997%烤烟梗丝10.57.317.9101%烤烟烟叶8.07.715.7100%白肋烟烟叶7.97.716.0105%香料烟烟叶7.17.714.697%烤烟型卷烟8.17.716.1104%混合型卷烟9.17.716.596%烤烟梗丝10.514.824.997%烤烟烟叶8.115.424.0103%白肋烟烟叶8.014.923.4103%香料烟烟叶7.114.921.395%烤烟型卷烟8.114.922.899%混合型卷烟9.114.923.395%9 检验报告检验报告应包括以下内容：识别被测样品需要的所有信息；参照本标准所使用的试验方法；检测结果，包括各单次