人乳头瘤病毒疫苗的应用研究进展.docx

1、人乳头瘤病毒疫苗的应用研究进展陈兰曹佩霞人乳头痛病毒（humanpapillomavirus,HPV）的感染是宫颈癌发病的必要条件，在99%的宫颈癌中可以检测到生殖道HPV的感染，其中涉及到大约15种致癌型HPV,而流行病学和基础研究亦证实高危型人乳头痛病毒（high-riskhumanpapillomavirus,HR-HPV）持续感染是宫颈上皮内瘤样病变（cervicalintraepithelialneoplasia,CIN）和宫颈癌的主要病因。运用分子生物学技术研制HPV疫苗控制HPV感染的治疗策略近年来已受到假日。以下就有关HPV的致病机理、作用机制、疫苗防治HPV感染应用情况及今后

2、研发趋势做一综述。1 HPV的致病机理HPV的生活周期与宿主上皮细胞分化程度密切相关，最初病推感染是分化程度较低的基底层细胞.病毒基因组在其内以低拷贝质粒的形式存在。早期，基因以低水平表达，不产生了代病毒,机体也无法产生有效的免疫反应;随着基底层细胞的分裂和子代细胞迁移至基底上层细胞组分中进行最终分化，病毒也随之进入复制阶段，并对基底上层细胞进行程序重编,使之适于病毒基因组的高拷贝复制，这时病毒结构基因编码的主要蛋白L1和次要蛋由12开始表达，病毒颗粒进行组装，造成组织病变，病毒由最表层的上皮细胞释放至外界环境。HPV病毒基因组整合于人类细胞染色体后，早期转录区E6、E7基因的表达产物E6、E

3、7原癌蛋白在细胞周期调控及凋亡调节中起重要作用，是官颈癌发生的主要原因。2 HPV疫苗的作用机制2.1预防性疫苗主要通过体液免疫防疫因HPVL1衣充蛋白在适当的细胞表面可组装成无毒性的病毒样颗粒（viruslikeparticles,VLPs）tVLPs在形态学上与HPV颗粒完全相同，但不含有潜在的病毒致癌基因，因此能诱导抗体应答而无感染或致癌危险°VLPs可以诱导很强的体液免疫,产生中和抗体，是HPV预防性疫苗试验中成好的免疫原候选者之一。但LIVLP的免疫表位具有特异性,由一种类型HPVVLP引起的免疫反应对其他类型的HPV可能没有交叉保护作用，为了解决这一问题，需要研制多价疫苗

4、C因此，现在研究的预防性HPV疫苗主要是一种二价疫苗作者单位：210046南京中医约大学（陈兰）213003江苏省常州市中医院妇产科（曹佩酸）（针对HPV16/18）和四价疫苗（针对HPV6/11/16/18）o2.2治疗性疫苗既通过细胞免疫乂通过体液免疫起治疗作用治疗性疫苗的任务更具挑故性。不同于预防性疫苗.治疗性疫苗通过早期HPV基因编码玺白（如E6、E7）的抗原表位来产生免疫反应，而非晚期基因编码蛋白（L1、12）,因为大部分肿痛特异性抗原来自正常或变异的蛋白，而E6.E7编码蛋白则是外来病逐蚩白，比变异蚩白的抗原决定簇更稳定，是抗原特异性免疫治疗或疫苗的最佳攻击位点，也不会出现因抗原丢

5、失而逃逸宿主免疫反应的现象CE7癌蛋白表达多，免疫原性更强，而口结构更保守，因此,目前的研究较多关注E7癌蛋白。治疗性疫苗的形式多样，根据制备疫苗的策略，HPV疫苗可分为病毒样颗粒、多肽疫苗、核酸疫苗、活载体疫苗、树突状细胞疫苗、嵌合疫苗和融合蛋白疫苗等。2.3影响疫苗的因素各个年龄组都可以看到抗体水平高于自然感染水平好凡倍，而旦背少年（15岁以下）明显高于年龄大的人群，在2655岁的妇女中，同样可以看到这种情况的发生12?,疫苗接种后的抗体水平与年龄呈负相关。疫苗的抗体反应与种族、民族、接种HBV疫苗或使用口服避孕药无关，只与疫苗是否按推荐方案中接种时间的早晚有略微不同，但是间隔的时间K短范

6、围并不很宽（剂量1和2之间-般是13个月，剂量1和3之间一般是48个月）。3 HPV预防性疫苗目前Li经进入nni期临床实验的预防性疫苗有HPV16单价VLP疫苗、二价HPV（16J8）VLP疫苗和四价HPV（6、】1、16、18）VLP疫苗，其中，葛兰素史克公司生产的二价VLP疫苗（商品名:Cervarix）和默克公司生产的四价HPV疫苗（商品名：Gardanil）已经分别上市。3.1HPV16单价VLP疫苗Rowhani-Rahbar等对】623岁共2391例感染HPV16的试验者进行随机、双盲、对照研究，用40|igHPV16LIVLP单价疫苗或者安慰剂注射，在6个月内接受3剂注射（0、

7、2、6个月），试验期间多次采取生殖道标本进行HPV16DNA检查，同时进行宫颈细胞学检住，有异常者进行阴道镜和宫颈组织活检,采用放射免疫方法测定血清HPV16抗体滴度，结果显示，对照组750例中，】11例呈持续HPV16感染、】2例发生与HPV16相关的CINU-皿，而疫苗组755例中,7例呈持续HPV16感染，无一例发生与HPV16相关的CINU-DI,血清HPV16抗体滴度在接种后7个月达到高峰，然后下降约1个指数单位，宜至第I次接种后18个月，接种后3048个月仍保持在较高水平的稳定状态，高于自然感染所检测到的抗体水平，表明该疫苗在接种后至少3.5年内能减少HPV16感染及与之相关的CI

8、N发生率，从而减少患宫颈癌的危险。3.2 HPV16J8二价VLP疫苗迄今为止最大的疫苗疗效试验一年轻成人乳头状痛抗癌研究(PapillomaTBIala-gainstCancerInyoungAdults,PATRICIA)，是一项评价HPV16/18AS04佐剂疫苗(Cervarix)有效性的随机、双盲、对照皿期临床试验。对完整接受3次疫苗注射的受试者进行队列分析(ATP-E)、对至少接受过一次疫苗注射的受试者进行队列分析(TVC)、对还没有性生活基本没有致癌性HPV感染证据的女性进行队列分析(TVC-naive)，结果显示，ATP-EHPV16/18AS04佐剂疫苗预防HPV16/18相

9、关的CINII+有效率为92.9%、TVC中有效率为98%、而不考虑感染的HPVDNA类型时有效率为30.4%、TVC-naive中有效率为70.2%、预防CINIII的有效率TVC为33.4%、TVC-naive为87.0%，对12个非致癌型HPV相关的CINU'ATP-E中有效率为54.0%oTVC分析中还发现该疫苗对HPV31、HPV33和HPV45相关的CINU*有交叉预防作用，而对1113例15-25岁宫颈细胞学正常、血清HPV16/18抗体阴性J4种致癌型HPV阴性的女性进行长达6.4年的随机、双盲、对照研究.发现疫苗预防HPV16/18感染的有效率为95.3%oSchwa

10、rz等发现15-25岁、2645岁和4655岁三组女性接种Cervarix疫苗后，其免疫原性高、安全性好。3.3 HPV6、11、16、18四价VLP疫苗Rowhani-Rahbar等在四价疫苗接种后，以血清HPV抗体为参照.发现疫苗接种前后口腔液中HPV抗体检测的敏感度分别为49.6%和100%,认为通过检测口腔液中HPV抗体来监测预防性HPV疫苗使用后抗体的表达情况是可行的。4 HPV治疗性疫苗4.1多肽疫苗由于启动特异性细胞免疫应答并非整个抗原分子，而是抗原分子在被抗原呈递细胞吞噬后与HLA分子共同提呈至细胞表面的多敷，因此，与特异性CTL去位结合的多肽可以作为一种有效的疫苗。该疫苗具有

11、安全及容易制备的优点，但免疫原性较弱，需要与HLA正确匹配。4.2DNA疫苗Lu等证明CRT/E7与DNA疫苗甲基化剂一5氧杂胞昔(DAC)结合可导致CRT/E7表达上调，从而提高DNA疫苗的作用效力。研究发现.预处理DAC可增强CRT/E7DNA的表达，从而提高E7的特异性CD/T细胞免疫反应并使CRT/E7DNA疫苗产生抗肿瘤作用，因此，推测DAC处理过的CRT/E7DNA疫苗可能是一种控制HPV相关性恶性肿瘤的潜在方式。4.3病毒及细菌载体疫苗临床前的研究发现，利用病毒作为E6、E7蛋白的载体，可以使机体产生很强的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)反应

12、，而细曲载体疫苗与病毒载体疫苗的制备原理相类似，仅载体不同。H前用载体的减毒细菌有志贺菌、沙门菌和利斯特曲等。4.4 DC疫苗DC细胞是最重要的抗原呈递细胞,经过重组的全KE7蛋白致敏后，DC细胞可以激发特异性的CD/CTL反应.同时,DC细胞也可以被转染或转导人编码抗原的核甘酸序列或与某些抗原成分嵌为-体。以DC为基础的HPV疫苗包括病毒蛋白及肽段负载的DC疫苗、HPVDNA的DC疫苗及肿瘤细胞与DC融合疫苗等，动物实验表明，这些疫苗能有效诱发特异性细胞毒性T细胞反应和促使炎症消退。5存在的问题除倍受公众关注的疫苗接种后的安全性及远期疗效外，作者认为,其高昂的价格也应引起重视，因为全球80%

13、的宫颈癌发生在发展中国家，所以，要降低全球宫颈癌的发生率、充分发挥疫苗的作用，就必须将市场开拓到发展中国家。但是，现在四价疫苗在美国的零售价格是每支$120元，而完成接种则需要3剂$360元的高价,这样昂贵的价格发展中国家在经济上目前绝对无法承受。因此，价格与购买力之间的问题是实现全球接种必须解决的问题。参考文献Cid-ArreguiA.Therapeuticvaccinesagainsthumanpapillomavirusandcervicalcancer.OpenVirolJ,2009,3(1)：67-83.1 SchwartzTE,SpaczynskiM,SchneiderA,elal

14、.ImmunogenicityandtolerabilityofanHPV-16/18ASO4-adjuvantedprophylacticcervicalcancervaccineinwomenaged15-55years.Vaccine,2009,27:581-587.2 MunozN,ManalastasJrR,PitisuttitthumP,etal.Safety,immunogenicityandefficacyofquadrivalenthumanpapillomavinis(types6,11,16,18)recombinantvaccineinwomenaged24-45yea

15、rs:Arandom-izml.double-blindtrial.1(1,2009,373：19491957.3 HarperDM.CurrentlyapprovedprophylacticHPVvaccines.ExpertRevVaccines.2009,8(12)：1663-1679.4 Rowhani-RahbarA,MaoC,HughesJP.etal.Ixmgertermefficacyofaprophylacticmonovalenthumanpapillomavirustype16vaccine.Vaccine,2009,27(41)：5612-5619.5 Paavonen

16、J,NaudP,Salmer6nJ,cla.IEfficacyofhumanpapillomavirus(HPV)-16/18A804-adjuvantedvaccineagainstcervicalinfectionandprecancercausedbyoncyenicHPVtypes(PATRICIA):finalanalysisofadouble-blind,randomisedstudyinyoungwomen.Lancet,2009,374(9686)：301-314.6 GlaxoSmithKlineVaccineHPV-007StudyGroup,RomanowskiB,deB

17、od»aPC,NaudPS,etal.Sustainedefficacyandimmunogenicityofthehumanpapilloniavims(HPV)-16/18AS04-adjuvantedvaccine:analysisofarandomisedplacebo-controlledtrialupto6.4yeam.Lancet,2009,374(9706)：19751985.7 SchwarzTF,SpaczynskiM,SchneiderA,etal.ImmunogenicityandtolerabilityofanHPV-16/18ASO4adjuvantedp

18、rophylacticcervicalcancervaccineinwomenaged)5-55yrant.Vaccine,2(X)9.27(4):581-587.8 Kowhani-RahbarA,CarterJJ,HawesSE,ctal.AntilmdyrrsjM>risesinoralfluidafteradministrationofprophylactichumanpapillomavirus浙江临床医学2010年12月第12卷第12期vac<*ines.JInfwtDis.2009,200(9):14521455.9 IaiI).HooryT,M<»n

19、icA,etal.Treatmenlwill)demethylatingagent.5-aza-2cleoxyryticlineenhancesihcruprtiticHPVDNAvaccinefxilency.Vaccine,2009,27(32)；4363*4369.乙型肝炎母婴传播和阻断的研究进展翁慈斌刘寿荣乙型肝炎是我国乃至全球严重危害人类健康的传染病之一。全球目前约有3.5亿人为乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitisBsurfaceantigen,HBsAg)慢性携带者，其中25%-40%的人将最终转归为肝硬化或肝细胞痛。我国人群中慢性乙型肝炎病毒携带率9.5%左右，约I.25亿.

20、慢性乙型肝炎患者2000多万，而旦每年有2040万婴儿感染乙型肝炎病毒,成为新的传染源。因此,了解乙型肝炎病毒(HBV)母婴垂宜传播的途径，采取有效预防措施阻断其传播具有重要意义。现就乙型肝炎病毒母要传播途径及其阻断措施的研究现状及进展作一综述。1乙型肝炎病毒母婴传播的途径1.1产前感染产的感染即宫内感染，是指孕妇在妊娠期HBV就侵入胎儿肝细胞并进行笈制，使胎儿在宫内即被感染，这是母婴垂直传播的主要方式，也是最难阻断的母婴传播。宫内感染的机制尚不完全清楚，目前主要有以下儿种：(1)胎盘感染学说:HBV可通过感染胎盘各层细胞而导致胎儿感染,Xu等用免疫组化法检测感染胎盘的各层细胞，发现HBV感染

21、率从胎盘的母体面至胎儿面依次递减，推测HBV感染可能是通过“细胞传递”方式实现.即母血经蜕膜毛细血管内皮和蜕膜细胞和/或绒毛间隙直接感染绒毛滋养层细胞,然后进一步感染绒毛间质细胞，最终感染绒毛毛细血管内皮细胞造成胎儿官内感染，段明HBV感染可以HBsAg抗原-抗体夏合物形式，由分布于滋养层细胞和绒毛间质细胞的Fey受体ID介导而引起胎儿感染；(2)胎盘渗漏学说:胎盘组织的轻微裂伤或通透性改变,会使号血渗入胎儿的血液，形成宫内感染,Xu等的研究认为，由于先兆早产等引起胎盘血管的破损.可使含高水平HBV的母血也接进入胎儿循环系统造成感染；(3)外周血单个核细胞(PBMC)感染学说:研究发现HBV感染者的PBMC中作者单位=310()53浙江中医药大学(翁憩斌)310014杭州市笫六人民医院(刘寿荣)可检测到HBV-DNA和共价闭合环状DNA(cccD-NA)心，证实PBMC是HBV转录和翻译的场所，可产生具有感染性的病毒颗粒引起感染，但HBV如何进入PBMC的机制仍未阐明,PBMCJWj变形游走特性，可在绢织间隙内自由移动，在正常或病理妊娠时少址母血PBMC可以穿过胎盘屏障，从而使胎儿感染乙型肝炎病獴，李淑红等选择血清HBV-DNA(-)、PBMC中HBV-DN