以树突状细胞疫苗为基础的恶性肿瘤免疫治疗.docx

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2、crials,2013,34(37):9393-9400.17 KongP,XieX,LiF,etal.PlacentamesenchymalstemcellaccelerateswoundhealingbyenhancingangiogenesisindiabeticGoto-Kakizaki(GK)ratsJ.BiochemBiophysResCom-mun,2013,438(2)：410-419.18 LiuZH,MengGW,WangBW,etal.Researchonhumanplacenta-derivedmesenchymalstemcellstransfectedwithpJR

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4、romotescutaneouswoundhralingofsevereburnedratsJ.PLoSOne,2014,9(2)：e88348.21TaoR,SunTJ,HanYQ,etal.Epi-morphin-induceddifferentiationofhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellsintosweatglandcellsJ.EurRevMedPhannacolSei,2014,18(9)：1404-1410.22 ZhangY,HaoH,LiuJ,etal.Repairandregenerationofskininjurybytrans

5、plantingmicroparticlesmixedwithWhartonrsjellyandMSCsfromthehumanumbilicalcordJ.IntJIx)wExtremWounds,2012,11(4)：264-270.23 KimH,ChoiK,Kweon0,etal.Enhancedwoundhealingeffectofcanineadipose-derivedmesenchymalstemcellswithlow-levellasertherapyinathymicmiceJ.JDermatolSci,2012,68(3):149-156.24 SongS,LeeM,

6、IeJ,etal.Geneticmodificationofhumanadipose-derivedstemcellsforpromotingwoundhealingJ.JDermatolSei,2012,66(2)：98-107.25 NautaA,SeidelC,DevezaL,etal.Adipose-derivedstromalcellsoverex-presaingvaitcularendothelialgrowthfactoracceleratemouAeexcisionalwoundhealingJ.MolTher,2012,21(2):445-455.(收稿：2014-07-0

7、2编辑：袁宁)以树突状细胞疫苗为基础的恶性肿瘤免疫治疗邓子清刘琼荣曹家庆树突状细胞(dendriticcells,DC)是2011年诺贝尔生理学或医学奖得主拉夫尔-斯坦曼于1973年发现的，作为T细胞介导的免疫反应的中介体，起识别、呈递抗原等关键作用，参与免疫反应的启动、调控及维持等各环节。DC作为疫苗治疗恶性肿瘤已有20多年历史，至今，多数DC疫苗都是由患者体内分离而来的DC或DC前体细胞，体外诱导分化扩增后负载各种肿瘤相关抗原组成，再回输患者体内。目前，DC疫苗的研究已进入对传统方法治疗失败的晚期癌症患者展开临床I期试验阶段，并证明这种新治疗方法具有以下特点：(1)对多数恶性肿瘤有效；(2

8、)耐受性好且毒副作用小；(3)可doi:10.3969/j.issn.1005725.2014.21.053基金项目：江西省自然科学基金资助项目(编号：2O122BAB2O5O21)作者单位：330006南昌大学第二附属医院骨肠外科通信作者；冒家庆E-mail：cao.jiaqing诱导产生肿瘤特异性免疫反应。本文就DC疫苗与恶性肿瘤免疫治疗的研究作一综述。1不同DC亚群与抗肿瓶免疫反应为研制新一代DC肿瘤疫苗，需考虑DC网络逐渐显露出的复杂性。人类和老鼠体内不同位置存在表型不同的DC亚群，大致可分为三类：圈系DC、淋巴系DC及炎性单核细胞来源DC。散!系DC按部位又可进一步划分为定居淋巴组织

9、DC及迁移性DC,定居淋巴组织DC可以直接从血液、淋巴液或其他DC中捕获抗原，迁移性DC位于肺、皮肤、肠道等外周器官，捕获抗原后迁移至淋巴组织，直接把抗原呈递给T细胞或把抗原信息共享给定居淋巴组织DC叫老鼠实验已证明，定居淋巴组织CD8髓系DC亚群及其相关的CD103-迁移性僚系DC是刺激初始CD8T细胞分化为效应细胞必不可少的环节。上述实验模型中，肿瘤消退也依赖于I型干扰素及CD8*DC在肿瘤部位的聚集。人体内.与上述两种DC亚群功能相同的是分布于淋巴及外周组织中的CD14PDC亚群。人CD141及鼠CD"/CD103DC亚群可共享趋化因子受体XCRl、Necl2/CADMl等的表

10、达，这些因子对细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)的激活及Toll样受体3(Toll-likereceptor,TLR3)介导的交叉启动非常重要。人CD141*及鼠CD8*/CD103*DC亚群也共享C型凝集素受体(C-typelectinreceptor,CLR)CLEC9A的表达,CLEC9A具有识别死细胞暴露的肌动蛋白微丝和抗原交叉呈递功能。这些发现为利用人CD141，DC亚群进行肿瘤免疫治疗提供了有力论据。另有证据表明，人CD141*和鼠CD8DC亚群并不是唯一具有交又呈递功能的亚群，鼠CDllb*DC亚群也有类似功能，与之相对应的人CDlc*域系D

11、C亚群类似功能尚未明确。目前多数临床试验使用的DC都是在体外对炎性单核细胞来源DC加入GM-CSF及白介素-4之后诱导、分化、培养扩增而得到的。炎性单核细胞来源DC类似于炎症DC亚型，由感染或炎症反应中的单核细胞分化而来。最近发现，小鼠体内肿痛部位存在一种对化疗产生抗癌免疫应答具有十分重要作用的DC业型，此亚型形态和表型上都类似于炎性单核细胞来源这是炎性单核细胞来源DC在肿痛免疫作用方面第一个证据。2DC模式识别受体与恶性肿瘤免疫治疗各DC亚群会表达一系列特异的和共享的模式识别受体，包括CLR和TLR等可增强抗癌免疫反应效果的受体。体内特异的DC亚群可表达CLR特异性单克隆抗体直接捕获目标抗原

12、。这能有效克服体外加工制备的DC疫苗迁移性差的缺点，并保证体内多个DC亚群与目标抗原特异性结合的精确性。DEC-205,一种高表达于鼠CD8,DC的CLR,现已是肿痛疫苗研究的一个主要焦点。通过DEC-205特异性抗体与肿瘤抗原结合，DC将抗原呈递给CD4*和CD8T细胞，诱导产生免疫应答，抑制或延迟体内肿瘤生长，这比体外诱导分化后得到的DC再回输体内更高效。人类炎性单核细胞来源DC、CDI41*DC'CDlc，DC及淋巴系DC等DC亚型都表达DEC-205,体外实验中，诱导CD4*和CD8*T细胞产生免疫应答均需依赖于DEC-205抗体介导的抗原呈递环节。依靠DEC-205,CD14

13、1*DC亚群可以高效地将抗原交叉呈递给CD8*T细胞。CLEC9A是另一种非常有研究潜力的CLR,特异性表达于人CD14PDC亚群表面，具有识别死细胞功能。在鼠体内，抗CLEC9A抗体能高效地捕获递送抗原至CD8DC,诱导体液和细胞毒性T淋巴细胞免疫应答。与DEC-2O5在诱导生成细胞毒性T淋巴细胞方面比较，CLEC9A可维持抗体在血液循环中持续存在，延长DC抗原呈递过程，并激发更为强效的体液免疫应答n。）。表达于人CD141-DC的CLEC9A在体外可激发CD4*和CD8*T细胞两种免疫反应，但在休内其效果尚需进一步研究明确。总结经验，DC要:激活最理想的细胞毒性T淋巴细胞反应须有一定必要条

14、件。DC可表达-批Toll样受体，这些受体被激动后叫增强疫苗免疫原性。为保证激活的特异性，不同DC亚群特异性表达不同的Toll样受体，且这种特异性表达在人和老鼠之间乂存在差别。老鼠体内，TLR9可表达于所有DC亚群表面，且它的配体CpG是一种非常有效的疫苗佐剂。人体内，临床试验已证明CpG可增强体液及细胞介导的疫苗反应，旦耐受性好°Poly（l：C）是TLR3的陀体，正逐渐普及成为临床疫苗的佐剂；它能激活CD14PDC,增强抗原交又呈递，并可引起I型干扰素反应：如。塞德斯医疗公司的Poly（I：C）衍生物产品Hikonol和Ampligen可以引起强效的I型干扰素反应，且其在人体内耐

15、受性良好，目前正在试验与DEC-205靶向抗体联合使用皿。宙西莫特，一种具有免疫作用的抗病毒药，作为TLR7/8的激动剂，能激活多种人DC亚型，现在也正试验将其与DEC-2O5抗体.Hikonol联合使用。同时在DC疫苗研究领域，现在包括靶向性肿瘤抗原单克隆抗体融合性DC与TLR激动剂联合应用、发展纳米颗粒、表达DC受体单克隆抗体的脂质体和纳米乳液等这些研究方法正逐渐取代多种抗原混合、佐剂及单一运载工具等传统方法心气3增强肿瘤内环境免疫原性肿瘤内环境中存在的免疫抑制，是诱导产生有效抗肿瘤免疫反应需要克服的主要困难之一。肿痛可通过细胞和可溶性因子的作用直接抑制DC及T细胞的活化"七因此

16、为达到治疗目的，需君虑如何增强肿想内环境的免疫原性，并增强DC的功能。DC表达的模式识别受体能识别损伤相关分子模式（DAMPs）,类损伤或濒死细胞释放的正常细胞成分，包括钙网蛋白、纤维状肌动蛋白、高迁移率族蛋白B1及三磷酸腺昔等。DAMPs可致DC迁移增强，激活或促进肿瘤衍生相关抗原的加工处理【闵。一些放、化疗可促进肿瘤细胞中具有免疫原性部分细胞死亡，释放DAMPs,从而增强DC功能；化疗也可以直接增强DC的部分功能，包括促进DC活化，增强迁移和抗原递呈能力叫。这为DC疫苗.与放、化疗的联合应用提供了有力的理论依据。早期试验已证明这种联合治疗方法是可行的，患者耐受性也良好；在对晚期卵巢癌、胰腺

17、癌、结直肠癌、肝癌肾转移、恶性黑色素瘤和低分化神经胶质瘤等患者的治疗中取得了一定的临床效果"刀。为使临床疗效最大化，需合理安排联合疗法中各治疗方法的先后顺序。4克服免疫抑制细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）与程序性死亡受体l（PD-l）是两种T淋巴细胞抑制性受体，参与免疫反应负调节，针对两者抗体方面取得的成果是最近肿瘤免疫治疗研究中的可喜进展之一【卜义。对恶性黑色素瘤及其他肿瘤，抗CTI-4及PD-1抗体能诱导产生显著高效持久的临床治疗反应，但遗憾的是针对CTLA-4的治疗会产生较严重的毒副反应【宣。有研究将DC疫苗与抗CTLA-4两种方法联合应用治疗晚期黑色素痛患者，证明

18、是可行的，比两者单一使用治疗反应率更高"抗PD-1抗体与其他疫苗联合应用也被认为有同样的协同作用动物实验证明，可以通过降低髓源抑制性细胞及调解性T细胞的数蛀或功能、激动剂与CD137等协同剌激分子共作用增强T细胞的功能、阻断抑制性细胞因子IL-10及TGF-p等方法来克服免疫抑制未来这些方法与DC免疫治疗结合起来应是非常有前景的。5DC疫苗的临床应用早期临床研究表明DC疫苗与多肽类、重组蚩有类、肿瘤细胞、病毒载体等间接疫苗相比较有明显优势，其客观反应率达7.1%河。近期通过对晚期黑色素瘤、前列腺癌和肾癌等一系列DC疫苗试验分析，得知注射DC疫苗后其客观临床反应率可达到7.7%-12.

19、7%,若把维持病情稳定计算在内，其总体临床获益率可达到30%54%：叫Dendreon公司的自体细胞免疫疗法Sipuleucel-T在针对转移性前列腺癌患者111期临床试验中证明能获得显著生存受益oSipulcucel-T于201C年获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准，成为迄今为止首个被FDA批准的治疗性肿瘤疫苗，用于治疗无症状或症状轻微的转移性去势难治性前列腺癌。目前，放、化疗往往同时带来严重治疗毒副作用，患者难以耐受，而DC免疫治疗方法患者耐受性好，并产生直接靶向抗肿瘤作用，但存在难以克服的肿瘤引起的免疫抑制现象，故叮考虑联合性放化疗-免疫治疗策略，也许能解决免疫抑制而提高DC疫苗免

20、疫治疗的疗效.同时降低放、化疗强度或剂域，减轻其导致的毒副作用或并发症。局部放疗不仅能杀伤肿瘤，而且会产生一种炎性微环境，可以增强DC递呈肿瘤抗原的能力，活化T细胞，使肿瘤细胞更易遭到肿瘤特异性细胞毒性T细胞的攻击。针对免疫耐受及抑制，可以将DC与抑制分子或细胞因子，及调节性T细胞等调节免疫耐受及抑制的方法联用，加强抗肿瘤免疫反应。前文也阐述了化疗与DC联用可以增强DC功能，因此，联合治疗策略应该会获得更好的临床疗效，也是未来肿瘤治疗的一种趋势。6结语近年来，DC疫苗研究取得K足进步，已从之前体外制务具有个体特异性疫苗这样简单的概念向直接在体内将抗原及激活剂特异性地作用于各DC亚群这样复杂精确

21、的途径发展。虽然对DC网络的复杂性及亚群特异性方面的了解在快速增加，关于人CD141*DC亚群靶向研究方面也取得显著成果，但关于特异性DC亚群在肿痛进展及免疫中作用方面的研究，目前尚处于初级阶段，并且还应对各DC亚群抗肿痛作用之间进行系统的比较性研究。7参考文献I吴凤丽，李国华.树突状细胞疫苗在胃癌免疫治疗中的研究进展J.世界华人消化杂志，2014,22(1):46-52.2JMeradM,SatlieP,HelftJ,etal.Thedendriticcelllineage：ontogenyandfunctionofdendriticcellsandtheirsubsetsinthestea

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