生长调节物质NAA对碧桃幼嫩茎段愈伤组织诱导的影响_第1页
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文档简介

1、生长调节物质NAA对碧桃幼嫩茎段愈伤组织诱导的影响一、 选题依据及基本内容碧桃 ( Prunus persica Batsch. var. duplex Rehd ),别名:  粉红碧桃、千叶桃花、花桃科属:蔷薇科(Rosaceae),李属。落叶小乔木,高可达8米,一般整形后控制在3-4米,小枝红褐色,无毛;叶椭圆状披针形,长7-15厘米,先端渐尖。花单生或两朵生于叶腋,重瓣,粉红色。其它变种有白色、深红、洒金(杂色)等。为保持优良品质,必须使用无性繁殖的方法,故本实验通过生长调节物质NAA对幼茎愈伤组织诱导的研究,来初步确定愈伤组织诱导的培养基激素成分。二、步骤、方法及措

2、施 1、以陕西师范大学长安校区格物楼门前碧桃为试材。2、外植体的采集与消毒:幼茎用自来水流水冲洗小时 , 无菌水漂洗 次,75% 酒精灭菌30s, 0. 1 %升汞灭菌 min , 无菌水漂洗3 次;3、愈伤组织的诱导: 茎段截取长1 cm左右。所有外植体分别接种于愈伤组织诱导培养基(以MS为基本诱导培养基,附加定量的2,4-D 1.0mg/L,6-BA 0.1mg/L和不同浓度的NAA,pH5.8,高压灭菌。NAA的不同浓度分别为:0.1mg/L、0.3 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L。)培养室温度为(25±2)。每天光照时间101

3、2h,光强20003000Lx。培养过程中对其生长情况每天进行观察,若有污染要及时处理。4、15d后统计诱导出愈伤组织数量并计算诱导率,同时记录愈伤组织的质地,颜色及生长情况。愈伤组织按以下公式计算: 诱导率=(长出愈伤组织的外植体数/总接种外植体的块数)×1003三、实验用品1、材料:陕西师范大学长安校区格物楼门前碧桃2、药品及试剂:(1)HgCl2、75%酒精等(2)MS培养基母液、激素母液用以前配制的3、器材:培养瓶40个,玻璃棒,电炉,天平,搪瓷杯,烧杯,皮筋,牛皮纸,pH试纸,称量纸,药匙,容量瓶,烧杯,广口瓶,量筒,移液管,超净工作台及其操作用具,无菌水等四、污染预防及其

4、处理污染是细胞培养的大敌。预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。 一开始就要十分重视,防止污染,否则会前功尽弃,不仅浪费时间,而且浪费人力、物力,甚至造成无法弥补的损失。造成污染的原因很多,从时间角度可以将污染发生原因归纳为3 个阶段: 前期准备阶段。包括培养基灭菌不彻底、器皿的灭菌不完全,外植体的选择不当与消毒不彻底; 无菌操作阶段。包括无菌操作室灭菌和超净工作台有问题,操作不规范,操作工具的消毒不彻底等; 培养阶段。培养环境不清洁和培养体系意外开放等。污染处理:1、通过实验室的合理设计及建立规范的操作规程,可以减少环境中物理因素对细胞的影响。2、若发现污染情况,应及时将同一瓶中未污染的材料接入新的培养瓶中。五、工作进度 序号时间内容备注12天药品的准备、培养基的配制及灭菌王婵媛:药品的准备,称取及培养基的配制刘 洁:洗培养瓶,分装,灭菌21天接种每人接种一半3每天培养及观察每天观察一次,可同时去也可两人轮流观察,遇到污染情况应及时处理415天后统计计算六、参

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