针灸对老年痴呆模型小鼠防治作用的实验研究

1、实验研究针灸对老年痴呆模型小鼠防治作用的实验研究成都中医药大学 99博士生 (610075 张卫陕西延安卫校 (716000 刘来虎指导教师 :殷克敬摘要 :本实验采用皮下注射东莨菪碱造成小鼠阿茨海默氏病 (AD 模型 , 通过针刺百 会 、 水沟 , 艾灸命门 , 观察针灸对小鼠学习记忆能力及生化指标的影响 。结果表 明 :针灸能明显改善模型小鼠的学习记忆能力 , 增强脑内乙酰胆碱酯酶活性 , 提高大脑乙酰胆碱含量 。 提示针灸对 AD 有显著的防治作用 。主题词 :痴呆 , 老年性 针灸疗法百会水沟命门动物 , 实验阿茨海默氏病 (A lzhei m ers disease AD 俗称老年

2、性 痴呆 , 是指老年前期或进入老年后大脑功能进行性退化 , 某些神经递质的改变 (主要为乙酰胆碱及其酶类 引起的 智力进行性下降 , 并伴有情感障碍的大脑器质性疾病 。据 世界卫生组织统计 , 在老年痴呆患者中 AD 约占 50 60%1。现代医学对本病病因 、 发病机理的认识仍不太清楚 。 虽经多年探索出多种药物 , 但均存在疗效欠佳 、 服药时间 长 、 毒副作用大等弊端 。 中医虽无 AD 病名 , 据其临床表现 可归为 “痴呆” 、 “善忘” 、 “神疑” 等病范畴 , 并对其病因 、 病 机及治疗做了一些论述 , 但实验研究尚不多见 。本实验旨 在观察针灸对实验性 AD 小鼠的学习

3、记忆能力 、 脑内乙酰 胆碱 (A ch 含量 、 乙酰胆碱酯酶 (A chE 活性的影响 , 从而 为临床提供实验依据 , 并对其作用机理进行初步探讨 。 1材料与方法 1. 1实验材料 :1. 1. 1动物及分组 :选用昆明种健康 10月龄小鼠 45只 , 均为雌性 , 体重 37. 5±2. 5g 。 由西安医科大学实验动物中心提供 。 小鼠适应性 饲养 1周后 , 按每组 15只随机分为模型组 (A 组 , 模型加 针灸组 (B 组 , 模型加西药对照组 (C 组 。1. 1. 2主要药品及试剂 :氢溴酸东莨菪碱注射液 :0. 3m g m l (上海禾丰制药有限公司 , 批

4、号 :970906 , 脑复康 片 :0. 4g 片 (西安医科大学制药厂 , 批号 :970811 , 氯化乙 酰胆碱 :1. 0g 支 (北京东环联合化工厂 , 批号 :970508 , 乙 酰胆碱酯酶 (A chE 活性试剂盒 :(北京中生生物工程技术 公司 , 批号 :970905 。1. 1. 3主要仪器 :Y 型迷路 , 按陈奇 3方法制作 ; 721分光光度计 , 上海第三分析仪器厂 。1. 2实验方法 :1. 2. 1造模及处理方法 :A 组按每天 1m g kg 体重皮下注射东莨菪碱计算 , 每鼠腹部皮下每天 注射 0. 12m l , 后模拟抓取固定 。 连续 10d (为

5、第 1疗程 , 休 息 3d 再连续注射 10d (为第 2疗程 。 B 组处理同 A 组 , 并 于每次东莨菪碱注射后抓取固定行针灸治疗 。C 组处理同 A 组 , 并于每次东莨菪碱注射后灌胃脑 复康 0. 4m l (按 5m g kg 研末加 2倍量水稀释 。1. 2. 2针灸方法 :选穴 :根据文献论述选取 “百会” 、 “水沟” 、 “命门” 。参考 中国兽医针灸学 并结合人体穴位 而定位 , 于动物头部正中两耳间取 “百会” , 鼻唇沟上 1 3取 “水沟” , 第 2腰椎脊突下取 “命门” 。 穴位及针具用 75%酒精消毒 , 采用 30号 、 0. 5寸不锈钢毫针 , “百会”

6、 平刺 1 2mm ; “水沟” 向鼻端斜刺 12mm , 行捻转法 , 角度 360度 左右 , 频率 150次 m in , 行针 1m in ; “命门” 采用艾条悬灸 法 , 距穴位 3c m , 以有温热感而动物不烦躁为度 , 每次 3m in 。 每日针灸 1次 , 10次为 1疗程 , 间歇 3天后进行第 2疗程 。1. 2. 3标本采集及指标检测 : 指标采集 :去处死亡 及不合格小鼠 , 每组选取 10只小鼠用于指标检测 。 行 为指标观测 :按陈奇方法以 Y 型水迷宫观测 , 分别以小鼠 连续 5次正确达到安全平台前错误次数为指标 。 大脑 A chE 活性测定 :取左侧大

7、脑精确称重后置于玻璃匀浆器 中 , 按脑组织 10m g 与缓冲液 1. 0m l 的比例加入冰冷的 0. 1mo l L , PH 7. 4PBS 制成匀浆 , 放置 1h 后 3000r m in 离 心 10m in 取上清液 , 按试剂盒要求 , 比色法进行检测 3。 大脑 A ch 含量测定 :取右半侧大脑精确称重 , 置于 玻璃匀浆器 中 与 10倍 量 0. 01N HC l 匀 浆 , 放 置 1h 后 3000r m in 离心 10m in , 取上清液按生物鉴定法进行检 测 4。统计学处理 :各实验数据均采用均数±标准差 (X ±S 表示 , 每组样本

8、均数组间比较采用 t 检验 。2实验结果2. 1小鼠空间学习记忆能力测试结果见表 1。 表 1各组小鼠记忆能力测试结果 (次 , x ±S 组别 n 治疗前 第 1疗程后 第 2疗程后 ABC1010106. 53±1. 306. 51±1. 306. 56±1. 216. 64±1. 783. 36±1. 2333. 31±0. 8536. 92±1. 38 4. 00±1. 0933 2. 19±1. 1733备注 :3示与 A 比较 P <0. 05, 33示与 A 比较 P <

9、; 0. 01由表 1知治疗前 A 、 B 、 C 三组间连续 5次正确达到 安全平台前错误次数无显著差异 , 经第 1疗程后 B 和 C 组表现出与 A 组的差异 , 其错误次数明显少于 A 组 (P < 0. 05 , 第 2疗程后 B 和 C 组与 A 组的差别更加显著 (P 336陕西中医 2001年第 22卷第 10期<0. 01 。2. 2各组动物大脑 A chE 活性及 A ch 含量的检测 结果见表 2。表 2各组动物大脑生化指标比较 (x ±S 组别 n A chE 活性 (u g A ch 含量 (ug g A B C 10101092. 91

10、7;43. 32139. 30±16. 9733134. 82±14. 75332. 83±0. 76 5. 87±1. 0233# 4. 81±0. 6633备注 :#与 C 组比较 P 0. 05由表 2可知经治疗后 B 组和 C 组与 A 组比较在大脑 A chE 活性及大脑 A ch 含量 方面均有显著升高 (P <0. 01, P <0. 01 , 且 B 组大脑 A ch 含量也明显高于 C 组 (P <0. 05 。3讨论 3. 1选穴依据 :中医学认为 AD 其病位 在脑 , 辨证以肾精不足 , 髓海空虚为本

11、, 痰瘀蒙蔽清窍为 标 , 治疗应以补肾益精为主 , 开窍醒神为辅 。命门穴属督脉 , 有补肾填精的作用 , 为治疗肾虚 、 脑 髓不足的要穴 。百会位于巅顶 , 古称 “三阳五会” , 督脉 、 膀 胱经 、 肝经在此入络于脑 。 灵枢海论 记载 :“脑为髓 海 , 其输上在于其盖” , 针刺此穴可直通脑窍 , 具醒神开窍 之功 。 水沟穴则为开窍醒神的要穴 。 此三穴均属督脉与脑 紧密相连 , 对于脑部疾患有良好效果 。3. 2针 灸 治 疗 AD 的 机 理 探 讨 :自 1974年 D ranchm an 研究指出脑内乙酰胆碱与记忆 、 认识有密切 关系以来 , 二十多年的研究结果使人

12、们认识到了中枢胆 碱能神经系统学习 、 记忆及情感方面具有特殊的作用 。 1976年后通过大量的研究表明 AD 患者最具特征的神经 生化方面的改变为大脑皮质 、 海马中 A ch 含量的显著减 少 , 胆碱乙酰化酶 (ChA T 及 A chE 活性的显著降低 , 降 幅可达 60 90%。 脑内乙酰胆碱代谢过程如下 :胆碱 +乙 酰辅酶 A +ChA T A ch +辅酶 A ; A ch +H 2O +A chE 胆碱 +乙酸 。 ChA T 是 A ch 的生物合成酶 , 仅存在于胆碱 能神经元中 , 是衡量胆碱能神经元的指标 。 A chE 是 A ch 的水解酶 , 为观察胆碱能神经

13、元的另一重要指标 。此二者 相辅相成共同维持脑内 A ch 含量的动态平衡 , 并且它们 的改变程度与构成 AD 病理改变的脑组织老年斑 、 神经原 纤维缠结的严重程度也密切相关 。 本实验表明针灸可显 著提高 AD 模型小鼠脑组织 A ch 含量及 A chE 活性 , 并由 此推知针灸可提高 AD 小鼠脑组织中 ChA T 活性 。 针灸 治疗可使 AD 模型小鼠脑组织 A ch 含量及 ChA T 、 A chE 活性均明显升高 , 表明针灸可使 AD 小鼠中枢胆碱能神经 系统处于积极活动状态 。 脑组织 A ch 含量的增加是在既 提高脑组织 A ch 合成又加快 A ch 释放降解的

14、情况下达到 的新的动态平衡 , 是在 A ch 利用率加快的情况下得以实 现的 。参考文献1丁铭臣 . 老年性痴呆 . 实用内科杂志 , 1993; 13(6 3262陈奇 . 中药药理研究方法学 . 北京 :人民卫生出 版社 , 1994; 8953陈勤 . 抗衰老研究实验方法 . 北京 :中国医药科 技出版社 , 1996; 1084黄俊华 . 乙酰胆碱的微量生物测定 . 针刺研究 , 1981; 6(1 72(收稿 2000211220 阿胶与伪品的性状鉴别宁夏石嘴山市第二人民医院 (753000 侯桂霞王惠霞阿胶系一种名贵常用的中药材 , 其性平 、 味甘 , 主要 功能为滋阴润燥 、

15、 补血 、 止血 。 人们常以此入药或保健补 品 , 现在市场上有假阿胶出售 , 服用后影响疾病治疗 , 达 不到治病强身作用 。 现将识别方法介绍如下 :阿胶的性状鉴别 :阿胶为脊索动物门哺乳纲马科动 物驴的皮 , 经煎熬 , 浓缩而成干燥的胶块 。 呈长方形或方 形胶块 。 常用简单检查方法 :外观直视检查 :呈黑褐色 或棕黑色 , 平滑而有光泽 , 碎片对光照视显琥珀色半透明 状 , 质坚脆易碎 , 不发软粘合 。以色匀 、 质脆 、 半透明 、 断面 光亮 、 无腥气者为佳 。 水试法 :阿胶 1520g , 置烧杯中 , 加适量水 , 加热溶化 , 溶液呈红茶色 , 透明 , 清而不浊 。 口尝 :取阿胶热水溶液口尝 , 微带腥味 , 味甜 。伪品阿胶性状鉴别 :现在市场上有一种 “新阿胶” 是 用猪皮熬制所得的 , 呈方块状 , 表面棕褐棕色 , 对光照视 不透明 , 断面不光亮 。 于水中加热熔化 , 液面有一层脂胶 油 , 具肉皮汤味 。成分与阿胶相似 , 可以代替阿胶 。另外 , 有