植物组织培养

1、植物组织培养植物组织培养Page 2植物组织培养的原理植物组织培养的原理n 植物组织培养是把植物的器官，组织以致单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，既愈伤组织。这一过程“脱分化作用”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输到系统以及根和芽等组织和器官，这一过程“再分化作用”。n 植物细胞的全能性。Page 3植物组织培养的目的植物组织培养的目的n 培养条件可以人为控制 n 组织培养采用的植物材料完全是在人为提供的培养基质和小气候环境条件下进行生长， 摆

2、脱了大自然中四季、昼夜的变化、以及灾害性气候的不利影响， 且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。n 生长周期短，繁殖率高 n 植物组织培养由于可人为控制培养条件， 根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长快，往往个月左右为一个周期 。所以，虽然植物组织培养需一定设备及能源消耗， 但由于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。n 管理方便，利于工厂化生产和自动化控制n 植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，极利于高度集约化的高密度工厂化生产，也利于自动化

3、控制生产。 与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、 浇水施肥、防治病虫等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。Page 4组织培养的流程Page 5植物组织培养成功的因素n 一般来说，主要有： 培养基的成分及pH值、n 供体植物的基因型n 外源激素的种类和浓度n 外植体的年龄和来源n 碳源的种类和浓度n 此外继代次数、培养条件、培养方式等也会影响培养成功率。Page 61。褐变现象及对策n现象：外植体在培养过程中切口产生的多分类物质被氧化成褐色的醌类物质。褐变现象主要发生在外植体的，外植体的部位不同，取材时期不同，褐变程度不同。n对策：在培养基中加入活性炭可以防止细胞褐

4、变的发生和发展。 ：外植体接种后1-2天既转移到新鲜培养基上，使细胞在褐化之前及时转移可以大大减轻或避免褐化。Page 72.玻璃化现象及对策n现象：玻璃化指在组织培养过程中，有些植物的嫩茎叶片往往会呈现半透明状，水浸装的现象。n对策：选择不易玻璃化的基因型及部位做外植体。：采取改善氧气供应状况和通气条件，控制温度，适当低温处理，降低容器内相对湿度。：适当提高蔗糖含量降低培养基中的水势，减少细胞分裂素及生长素等方法均可减少玻璃苗的发生。Page 83.污染现象及对策n现象：在培养过程中，如果环境，培养基或外植体灭菌不彻底，操作不规范等。微生物则会在培养基中滋生，并使培养物的生长受到影响甚至死亡

5、。n对策：严格的无菌操作是降低污染率的关键，选择在植物生长旺盛期采用外植体并进行消毒，并在培养基中加入适量抗生素杀菌剂，实行开放式组织培养，简化了组织培，并将污染率控制在10一下，能有效的解决杂菌感染的问题。一下，能有效的解决杂菌感染的问题。Page 9食荚型豌豆组织培养和植株再生研究杂志：西南师范大学学报（自然科学版）杂志：西南师范大学学报（自然科学版） 关键词】关键词】 豌豆；豌豆； 外植体筛选；外植体筛选； 植株再生；植株再生； 增殖系数增殖系数作者】作者】 苏承刚；苏承刚； 吴学科；吴学科； 郑占伟；郑占伟； 孙文俊；孙文俊； 肖波；肖波； 张兴国张兴国；Page 10 食荚豌豆的组织

6、培养的原因食荚豌豆的组织培养的原因 l食荚豌豆（食荚豌豆（Pisum sativum LPisum sativum L）, ,因荚大翠绿，口因荚大翠绿，口感清香脆嫩，营养丰富，深受人们喜爱。对豌豆品感清香脆嫩，营养丰富，深受人们喜爱。对豌豆品种品行改良，利用常规育种方法周期长，又达不到种品行改良，利用常规育种方法周期长，又达不到预期效果，而利用转基因工程技术对作物进行品种预期效果，而利用转基因工程技术对作物进行品种 改良能快速有效，但必须建立高效的再生繁殖体系改良能快速有效，但必须建立高效的再生繁殖体系. .Page 11食荚豌豆组织培养的意义食荚豌豆组织培养的意义l 我们以食荚型豌豆子叶，茎

7、和真叶为材料我们以食荚型豌豆子叶，茎和真叶为材料进行组织培养及植株再生研究，为豌豆品种进行组织培养及植株再生研究，为豌豆品种的遗传转化，资源试管保存以及优良品种快的遗传转化，资源试管保存以及优良品种快繁提供技术参考。繁提供技术参考。 Page 12豌豆组织培养的试验方法豌豆组织培养的试验方法l 1.1.材料与方法材料与方法 l l 1.11.1共试材料共试材料 试验材料为食荚型豌豆试验材料为食荚型豌豆1 1号号 l l 1.21.2无菌苗获得无菌苗获得 将豌豆种子用洗衣粉溶液浸泡将豌豆种子用洗衣粉溶液浸泡1min1min，然后用，然后用自来水冲洗干净，在超净台上用自来水冲洗干净，在超净台上用7

8、575的乙醇金袍的乙醇金袍30s,30s,转入转入0.10.1HgCL2HgCL2溶液浸泡溶液浸泡8-10min8-10min后，无菌水后，无菌水漂洗漂洗4-64-6次，接种于次，接种于1 12NS2NS培养基中培养生长，培养基中培养生长，13d13d左右长出幼苗供实验备用。左右长出幼苗供实验备用。Page 13l 1.31.3外植体的筛选外植体的筛选 将无菌苗子叶和真叶切成将无菌苗子叶和真叶切成0.5cm0.5cm见方小块，见方小块，茎带节或不茎带节或不带节切成0.5小段分别接MS+BA0.5mgL+NAA0.5 mgL培养基中进行外植体筛选试验，统计外植体愈伤组织诱导率和芽分化率。l l

9、1.4愈伤组织诱导 根据1.3 筛选出的外植体为材料进行愈伤组织诱导试 验，筛选出最佳的诱导愈伤组织培养基。基本培养基为MS，附加不同浓度配比的激素BA,NAA和2,4D。Page 14 l l 1.5 1.5芽分化芽分化 以MS为基本培养基，添加激素BA0.5-3mgL,KT0.5-3mgL,分别与NAA0-0.5mgL组合进行芽分化试验，统计分化率，芽长，增殖系数等指标。 l l 1.6 1.6 根诱导根诱导 在MS 培养基中分别附加激素NAA0.5,1,2,3mgL进行根的诱导，统计生根的情况。 l l 1.7 1.7愈伤组织的诱导愈伤组织的诱导 以上各项试验处理都为3次重复，培养基中附加3蔗糖和0.65琼脂，PH5.8,在室温25左右光照为40W日光灯14hd条件下培养，每30d观察并记录生长情况。Page 15豌豆组织培养的结果豌豆组织培养的结果n n 以豌豆，子叶，茎，真叶为材料进行