香豆素分析（课堂PPT）

1、12l香豆素及其衍生物是中药中的主要成分之一，香豆素及其衍生物是中药中的主要成分之一，具有多种生理活性，临床上用于止咳、利尿、具有多种生理活性，临床上用于止咳、利尿、抗菌、抗放射、抗凝血等。抗菌、抗放射、抗凝血等。3举例举例定量分析定量分析定性分析定性分析定义、分布、性质定义、分布、性质4n香豆素从结构上可看成是顺式的邻羟基桂皮酸香豆素从结构上可看成是顺式的邻羟基桂皮酸脱水而成的内酯，基本母核为苯并脱水而成的内酯，基本母核为苯并- -吡喃酮。吡喃酮。n 分子中苯核或分子中苯核或- - 吡喃酮环上常有取代基存在，吡喃酮环上常有取代基存在，如羟基、烷氧基、苯基、异戊烯基等如羟基、烷氧基、苯基、异戊

2、烯基等OHCOOH-H2OOO123456785香豆素按结构分为香豆素按结构分为n 简单香豆素简单香豆素只在苯环上有取代基的只在苯环上有取代基的n呋喃香豆素呋喃香豆素 线型（线型（6 6、7 7）；）； 角型（角型（7 7、8 8）n吡喃香豆素吡喃香豆素线型（线型（6 6、7 7）；）； 角型（角型（7 7、8 8）n其他香豆素其他香豆素 吡喃酮环上有取代基的吡喃酮环上有取代基的6n基本结构即苯并基本结构即苯并- -吡喃酮。吡喃酮。n苯环上常见羟基、甲氧基、亚甲二氧基苯环上常见羟基、甲氧基、亚甲二氧基和异戊烯基等取代基。和异戊烯基等取代基。 OOHOOOHOROOOCH3OCH3O伞形花内酯伞

3、形花内酯 七叶内酯七叶内酯 R = H R = H 滨蒿内酯滨蒿内酯 七叶苷七叶苷 R = glc R = glc 7n基本结构为香豆素母核苯环与呋喃环稠合，基本结构为香豆素母核苯环与呋喃环稠合，根据稠合位置可分为线型与角型。根据稠合位置可分为线型与角型。 8nC C6 6、C C7 7位与呋喃环稠合（位与呋喃环稠合（6 6位异戊烯基位异戊烯基与与7 7位羟基环合，降解失去三个碳原子）位羟基环合，降解失去三个碳原子）的衍生物，称为线型。的衍生物，称为线型。 OOOOOOOCH3OOOH3CCH3HO 补骨脂内酯补骨脂内酯 花椒毒内酯花椒毒内酯 紫花前胡内酯紫花前胡内酯 9n C C7 7、C

4、C8 8位与呋喃环稠合（位与呋喃环稠合（8 8位异戊烯基位异戊烯基与与7 7位羟基环合）的衍生物，称为角型。位羟基环合）的衍生物，称为角型。 异补骨脂内酯异补骨脂内酯 茴芹内酯茴芹内酯 异佛手内酯异佛手内酯 OOOOOOOCH3CH3O OOOOCH310n基本结构为香豆素母核苯环与吡喃环稠合，基本结构为香豆素母核苯环与吡喃环稠合，也分为线型和角型。也分为线型和角型。11nC C6 6、C C7 7位与吡喃环稠合（位与吡喃环稠合（6 6位异戊烯位异戊烯基与基与7 7位羟基环合）的衍生物。位羟基环合）的衍生物。 花椒内酯花椒内酯 OOOOOOOCH3美花椒内酯美花椒内酯122 27,8-7,8-

5、吡喃香豆素（角型）吡喃香豆素（角型） nC C7 7、C C8 8位与吡喃环稠合（位与吡喃环稠合（8 8位异戊烯基与位异戊烯基与7 7位羟基环合）的衍生物。位羟基环合）的衍生物。 邪蒿内酯邪蒿内酯 OOO OOOOOOCH3黄曲霉素黄曲霉素B1B113n具有抗凝血作用的紫苜蓿酚具有抗凝血作用的紫苜蓿酚( (sativolsativol) )属双属双香豆素类；茵陈炔香豆素类；茵陈炔( (capillonecapillone) )属异香豆素属异香豆素类。类。OOOHOHO O 紫苜蓿酚紫苜蓿酚 OO茵陈炔茵陈炔14n 香豆素类成分广泛分布于植物界，如伞形香豆素类成分广泛分布于植物界，如伞形科、夹竹

6、桃科、萝藦科、菊科、十字花科、杜科、夹竹桃科、萝藦科、菊科、十字花科、杜鹃花科、豆科、唇形科、兰科、禾本科、芸香鹃花科、豆科、唇形科、兰科、禾本科、芸香科、蔷薇科、茄科、无患子科、瑞香科等植物科、蔷薇科、茄科、无患子科、瑞香科等植物中均有较多分布。中均有较多分布。n 含有香豆素类化合物的常用中药有白芷、秦含有香豆素类化合物的常用中药有白芷、秦皮、独活、前胡、阿魏、当归、补骨脂、茵陈皮、独活、前胡、阿魏、当归、补骨脂、茵陈蒿、川芎、防风、蛇床子等。蒿、川芎、防风、蛇床子等。 1516171 12 23 34 418 多具芳香气，能随水蒸气挥发或升华。多具芳香气，能随水蒸气挥发或升华。 不溶于水或

7、难溶于水，可溶于石油醚、苯、不溶于水或难溶于水，可溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿或乙醇等溶剂中；一般含氧取乙醚、氯仿或乙醇等溶剂中；一般含氧取代基的香豆素衍生物，在石油醚中的溶解代基的香豆素衍生物，在石油醚中的溶解度比较小，冷的情况下更小。度比较小，冷的情况下更小。 在定量测定时，多用氯仿和乙醇来提取。在定量测定时，多用氯仿和乙醇来提取。 1 1192 2n香豆素类化合物分子中具香豆素类化合物分子中具,-,-不饱和内酯结构，不饱和内酯结构，具有内酯化合物的通性。如在稀碱性条件下加具有内酯化合物的通性。如在稀碱性条件下加热可水解开环，生成易溶于水的顺式邻羟基桂热可水解开环，生成易溶于水的顺式邻羟基桂

8、皮酸盐。酸化后又闭环恢复为亲脂性内酯结构。皮酸盐。酸化后又闭环恢复为亲脂性内酯结构。n与碱液长时间加热，顺式邻羟基桂皮酸盐则发与碱液长时间加热，顺式邻羟基桂皮酸盐则发生双键构型的异构化，转变为稳定的反式邻羟生双键构型的异构化，转变为稳定的反式邻羟基桂皮酸盐，此时，再经酸化也不能环合为内基桂皮酸盐，此时，再经酸化也不能环合为内酯。酯。 顺式邻羟基桂皮酸顺式邻羟基桂皮酸 反式邻羟基桂皮酸反式邻羟基桂皮酸OOOH-H+COO-O-OH-O-COO-203 3（1 1）异羟基肟酸铁反应：）异羟基肟酸铁反应： 因香豆素具有内酯环，所以能与异羟基肟酸铁因香豆素具有内酯环，所以能与异羟基肟酸铁反应，产生紫红

9、色，可被用来鉴别和比色测定，反应，产生紫红色，可被用来鉴别和比色测定，其反应如下：其反应如下： OONH2OHNaOHONaNHOHOFe3+, H+ONaNHOOFe1321（2 2）酚类试剂反应：）酚类试剂反应： 因该类化合物多具酚羟基，能和常规酚类试剂因该类化合物多具酚羟基，能和常规酚类试剂反应，如三氯化铁、硝酸银的氨溶液、三氯化铁反应，如三氯化铁、硝酸银的氨溶液、三氯化铁- - 铁氰化钾。铁氰化钾。 如果香豆素化合物的如果香豆素化合物的C C6 6位上（即酚羟基的对位）位上（即酚羟基的对位）没有取代基，则能和没有取代基，则能和 EmersonEmerson试剂反应现橙试剂反应现橙 红色

10、；红色；与与GibbsGibbs试剂反应现蓝色。试剂反应现蓝色。 EmersonEmerson反应是将香豆素类化合物溶于碱性溶液反应是将香豆素类化合物溶于碱性溶液中，加入中，加入2% 4- 2% 4- 氨基安替比林溶液数滴及氨基安替比林溶液数滴及8%8%铁氰化铁氰化钾溶液钾溶液2323滴即可显色，其反应如下：滴即可显色，其反应如下： OOCOO-OHOH-+NNC6H5OCH3NCOO-OHNNC6H5OCH3NH2CH3CH3224 4（1 1）香豆素类化合物在紫外光的照射下显蓝色）香豆素类化合物在紫外光的照射下显蓝色荧光，不但作为定性鉴别，而且作为定量测定荧光，不但作为定性鉴别，而且作为定

11、量测定依据。依据。 但具有荧光的化合物不一定都是香豆素，如咖但具有荧光的化合物不一定都是香豆素，如咖啡酸、绿原酸等在啡酸、绿原酸等在UVUV下也能呈现蓝色荧光，二下也能呈现蓝色荧光，二氢黄酮则呈天蓝色荧光。氢黄酮则呈天蓝色荧光。 此外，个别的香豆素类化合物（如双香豆素）此外，个别的香豆素类化合物（如双香豆素）不产生荧光。不产生荧光。 23（2 2）羟基香豆素在紫外光下有强的荧光，不难辨）羟基香豆素在紫外光下有强的荧光，不难辨认；呋喃香豆素较弱，但也能在紫外光下显示蓝、认；呋喃香豆素较弱，但也能在紫外光下显示蓝、紫、棕、绿、黄等色。必要时可喷紫、棕、绿、黄等色。必要时可喷10% KOH10% K

12、OH醇液，醇液，或或20% SbCl20% SbCl3 3氯仿液以显色。氯仿液以显色。 （3 3）香豆素类化合物羟基和芳环形成的共轭体）香豆素类化合物羟基和芳环形成的共轭体系具较强的紫外特征吸收，不同的香豆素化合物系具较强的紫外特征吸收，不同的香豆素化合物在不同在不同pHpH条件下表现不同的光谱特性，对该类成条件下表现不同的光谱特性，对该类成分的分析具重要意义。分的分析具重要意义。 24 荧光法荧光法 显色反应显色反应 薄层色谱法薄层色谱法 高效液相法高效液相法 气相色谱法气相色谱法251 1荧光反应荧光反应 （1 1）秦皮的鉴别）秦皮的鉴别 取秦皮，加热水浸泡，浸出液在日光下可见碧取秦皮，加

13、热水浸泡，浸出液在日光下可见碧蓝色荧光。蓝色荧光。（2 2）前胡的鉴别）前胡的鉴别 取前胡粉末取前胡粉末1g1g，加乙醚，加乙醚10ml10ml，浸渍，浸渍2h2h后，取乙后，取乙醚液醚液2 2 滴，分别点于两张小滤纸片上，置紫外滴，分别点于两张小滤纸片上，置紫外光灯（光灯（365nm365nm）下观察，显淡天蓝色荧光。然后）下观察，显淡天蓝色荧光。然后滴加滴加1515氢氧化钠溶液数滴，氢氧化钠溶液数滴，2 min2 min后荧光消失后荧光消失。将一张滤纸片避光保存，另一张滤纸片曝光。将一张滤纸片避光保存，另一张滤纸片曝光，约，约3h3h后，置紫外光灯（后，置紫外光灯（365nm365nm）下

14、观察，曝光）下观察，曝光者天蓝色荧光加强，避光者不显荧光。者天蓝色荧光加强，避光者不显荧光。262 2颜色反应颜色反应 （1 1）蛇床子的鉴别）蛇床子的鉴别 取蛇床子粉末取蛇床子粉末2g2g，加乙醇，加乙醇20ml20ml，加热回流，加热回流30min30min，滤过。取滤液数滴，点于白瓷板上，置紫外光，滤过。取滤液数滴，点于白瓷板上，置紫外光灯（灯（365nm365nm）下观察，显蓝紫色荧光；）下观察，显蓝紫色荧光； 另取滤液另取滤液 2ml2ml，加等量的，加等量的3 3碳酸钠溶液，加热碳酸钠溶液，加热5min5min，放冷，再加新制的重氮对硝基苯胺试液，放冷，再加新制的重氮对硝基苯胺试液

15、1212滴，即显樱红色。滴，即显樱红色。27（2 2）白芷的鉴别）白芷的鉴别 取少量样品粉末，加乙醚，振摇取少量样品粉末，加乙醚，振摇5min5min后静后静置置20min20min，取上清液，取上清液 1ml1ml，加入，加入7%7%盐酸羟胺盐酸羟胺甲醇溶液甲醇溶液2323滴，滴，20%KOH20%KOH甲醇溶液甲醇溶液2323滴滴，摇匀，在水溶上微热，冷却后加稀盐酸，摇匀，在水溶上微热，冷却后加稀盐酸调到调到pH 3 4pH 3 4，然后加入，然后加入1%1%三氯化铁乙醇三氯化铁乙醇溶液溶液1212滴，溶液显紫红色。滴，溶液显紫红色。28 1 1应用特点应用特点 薄层色谱法可用于含多类成分

16、的中药的鉴别，可用标准薄层色谱法可用于含多类成分的中药的鉴别，可用标准品或标准药材对照，再与上述荧光反应、颜色反应配品或标准药材对照，再与上述荧光反应、颜色反应配合，即可方便、快速鉴别含香豆素类化合物的中药。合，即可方便、快速鉴别含香豆素类化合物的中药。 因香豆素类成分大都具荧光，含香豆素类中药提取物，因香豆素类成分大都具荧光，含香豆素类中药提取物，在硅胶板上的色谱指纹图具一定的鉴别意义，在硅胶板上的色谱指纹图具一定的鉴别意义， 可用化学对照品对照；可用化学对照品对照； 可以使用经准确鉴定学名的标准药材做对照品；可以使用经准确鉴定学名的标准药材做对照品；29 硅胶薄层色谱常用的展开系统有：硅胶

17、薄层色谱常用的展开系统有：n氯仿；氯仿；n含含1.5%1.5%乙醇氯仿；乙醇氯仿；n乙醚乙醚- - 苯（苯（1 1：1 1）；）；n乙醚乙醚- - 苯苯- 10%- 10%乙酸（乙酸（1 1：1 1：1 1）等）等30白芷的薄层定性分析白芷的薄层定性分析n 取白芷粉末取白芷粉末0.5g0.5g，加乙醚，加乙醚10ml10ml，浸泡，浸泡1h1h，时时振，时时振摇，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加醋酸乙酯摇，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml1ml使使溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每胡素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml

18、1ml各含各含1mg1mg的混的混合溶液，作为对照品溶液。合溶液，作为对照品溶液。n 吸取上述两种溶液各吸取上述两种溶液各4l4l，分别点于同一以羧甲，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶基纤维素钠为黏合剂的硅胶G G薄层板上，以石油薄层板上，以石油醚（醚（30603060）- - 乙醚（乙醚（3 3：2 2）为展开剂，在）为展开剂，在2525以下展开，取出，晾干，置紫外光灯（以下展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相对应下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点。的位置上，显相同颜色的斑点。 31 含香豆素成

19、分的中药定量测定方法有比色法、荧含香豆素成分的中药定量测定方法有比色法、荧光法、极谱法、紫外分光光度法、薄层色谱法、高光法、极谱法、紫外分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等。效液相色谱法、气相色谱法等。 每种方法都有其特点，有的简单，有的操作麻烦，每种方法都有其特点，有的简单，有的操作麻烦，有的则需要一定的仪器设备。有的则需要一定的仪器设备。 相比之下，因该类成分多具有较强的荧光，故可相比之下，因该类成分多具有较强的荧光，故可荧光分光光度法进行定量分析；薄层扫描法测其紫荧光分光光度法进行定量分析；薄层扫描法测其紫外吸收或荧光的方法较简便快速，兼有分离功能，外吸收或荧光的方法较简

20、便快速，兼有分离功能，应用日趋普遍；近年来又有了分离效率较高的高效应用日趋普遍；近年来又有了分离效率较高的高效液相色谱技术，对复杂的中药样品更为合适。液相色谱技术，对复杂的中药样品更为合适。 32一荧光分光光度法一荧光分光光度法 n香豆素类化合物在紫外光的照射下显蓝色荧光，香豆素类化合物在紫外光的照射下显蓝色荧光，可用荧光分光光度法测定。如可用荧光分光光度法测定。如 7- 7- 羟基香豆素和香羟基香豆素和香豆素混合物的测定，前者用豆素混合物的测定，前者用370nm370nm激发，在激发，在450nm450nm测定，浓度为测定，浓度为110g110gmlml时荧光与浓度成线性失时荧光与浓度成线性

21、失系。后者用系。后者用361nm361nm激发，在激发，在491nm491nm测荧光。测荧光。n如果香豆素如果香豆素7 7位上有乙氧基（代谢产物）可使其变位上有乙氧基（代谢产物）可使其变为为7- 7- 羟基香豆素用羟基香豆素用390nm390nm激发，激发，440nm440nm测定。测定。 1 1、应用概况、应用概况33 2 2应用实例应用实例 （1 1）佛手油中的香豆素分析）佛手油中的香豆素分析 可用硅胶可用硅胶GFGF254254薄层分离，以己烷薄层分离，以己烷- - 醋酸乙酯醋酸乙酯（3 3：1 1）展开，分出）展开，分出4 4个荧光点即：柠美内酯（个荧光点即：柠美内酯（Citropte

22、nCitropten）；5- 5- 牻牛儿氧基牻牛儿氧基-7-7-甲氧基香豆素（甲氧基香豆素（5- 5-geranyloxy-7-methydroxycoumaringeranyloxy-7-methydroxycoumarin）；佛手内酯；佛手内酯和佛手柑亭（和佛手柑亭（bergamottinbergamottin），可直接在薄层上进，可直接在薄层上进行荧光测定，对于行荧光测定，对于和和用用330nm330nm激发，激发，424nm424nm测测定荧光，定荧光，和和用用272nm272nm激发，激发，520nm520nm测定。测定。 34二薄层色谱法二薄层色谱法 1 1荧光扫描法测定蛇床子中

23、蛇床子素含量荧光扫描法测定蛇床子中蛇床子素含量n 精密称取在精密称取在P P2 2O O5 5干燥器中减压干燥至恒重的蛇干燥器中减压干燥至恒重的蛇床子粉末床子粉末1g1g，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇20ml20ml，振摇后放置过夜，滤过，取续滤液，作为，振摇后放置过夜，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另取蛇床子素对照品适量，精密称供试品溶液。另取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇制定，加乙醇制1mg/ml1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。的溶液，作为对照品溶液。n 精密吸取上述两种溶液各精密吸取上述两种溶液各1l1l，分别交叉点于同，分别交叉点于同一硅胶薄层

24、板上，以苯一硅胶薄层板上，以苯- - 乙酸乙酯（乙酸乙酯（3030：1 1）为）为展开剂，展开，取出，晾干。展开剂，展开，取出，晾干。n 照 薄 层 色 谱 法 进 行 荧 光 扫 描 ， 激 发 波 长照 薄 层 色 谱 法 进 行 荧 光 扫 描 ， 激 发 波 长 X X365nm365nm，测量供试品与对照品荧光强度积分值，测量供试品与对照品荧光强度积分值. .n 本品含蛇床子素（本品含蛇床子素（C C1515H H1616O O3 3）不得少于）不得少于1.01.0 。 352 2紫外光区扫描法测定独活中蛇床子素含量紫外光区扫描法测定独活中蛇床子素含量 取独活粗粉约取独活粗粉约1g1

25、g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醇加乙醇20ml20ml，超声处理，超声处理30min30min，放冷，滤过，滤液，放冷，滤过，滤液置置25ml25ml量瓶中，用少量乙醇分次洗残渣，洗液并入量瓶中，用少量乙醇分次洗残渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇液。另取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇制成每制成每1ml1ml含含1mg1mg的溶液，作为对照品溶液。的溶液，作为对照品溶液。 精密吸取供试品溶液精密吸取供试品溶液2l2l、对照品溶液、对照品溶液1l1l与

26、与2l2l，分别交叉点于同一硅胶分别交叉点于同一硅胶G G薄层板上，以苯薄层板上，以苯- -乙酸乙酯乙酸乙酯（3030：1 1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（光灯（365nm365nm）下检视定位，照薄层色谱法进行扫）下检视定位，照薄层色谱法进行扫描，描，s322nms322nm， R R370nm370nm，测量供试品吸收度积分值，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。与对照品吸收度积分值，计算，即得。 本品含蛇床子素（本品含蛇床子素（C C1515H H1616O O3 3）不得少于）不得少于0.30%0.30%。 361 1

27、白芷中白芷中3 3种香豆素的测定种香豆素的测定 测定氧化前胡素（测定氧化前胡素（oxypeucedaninoxypeucedanin，），），欧前胡素（欧前胡素（imperatorinimperatorin，）和异欧前胡素（）和异欧前胡素（isoimperatorinisoimperatorin，），其方法是：准确称取），其方法是：准确称取、标准品各标准品各5mg5mg，用乙酸乙酯溶解，定，用乙酸乙酯溶解，定容至容至50ml50ml，分别取此溶液，分别取此溶液0.50.5、1.01.0、1.51.5、2.02.0、2.52.5、3.0ml3.0ml，均用乙酸乙酯定容至，均用乙酸乙酯定容至10m

28、110m1，制得，制得 6 6个不同浓度的标准溶液。个不同浓度的标准溶液。 37 按下述条件进行按下述条件进行HPLCHPLC分析：以分析：以-Bondapak C-Bondapak C1818柱为色谱柱为色谱分离柱，加预柱以防样品污染分析柱，流动相为甲醇分离柱，加预柱以防样品污染分析柱，流动相为甲醇- - 水（水（7070：3030），流速），流速1.0ml1.0mlminmin，UV 254nmUV 254nm检测各组分检测各组分峰，进样峰，进样10l10l，以峰面积为纵坐标，各成分浓度为横坐，以峰面积为纵坐标，各成分浓度为横坐标，得标，得3 3条通过原点的直线，线性范围条通过原点的直线，

29、线性范围0.005 0.05mg0.005 0.05mgmlml，其回归方程如下：，其回归方程如下： 氧化前胡素氧化前胡素 Y = 1521X + 25.40Y = 1521X + 25.40， r = 0.999r = 0.999 欧前胡素欧前胡素 Y = 1953X + 76.53Y = 1953X + 76.53， r = 1.000r = 1.000 异欧前胡素异欧前胡素 Y = 1930X + 53.73Y = 1930X + 53.73， r = 0.999r = 0.999 精密称取白芷粉（精密称取白芷粉（4040目）目）2g2g，置索氏提取器中，用乙，置索氏提取器中，用乙醚提取

30、醚提取9h9h，回收乙醚，真空干燥，残渣溶于乙酸乙酯并，回收乙醚，真空干燥，残渣溶于乙酸乙酯并定容成定容成25ml25ml，经，经MilliporeMillipore样品过滤器过滤，同上色谱条件样品过滤器过滤，同上色谱条件测定。标准品与样品分离情况（见图测定。标准品与样品分离情况（见图 13-113-1）较好。）较好。 3839四其它定量分析方法四其它定量分析方法 （一）比色法（一）比色法（1 1）该方法基于香豆素类化合物的内酯环官能团和）该方法基于香豆素类化合物的内酯环官能团和苯环上的羟基的性质，选择适当的显色剂反应产苯环上的羟基的性质，选择适当的显色剂反应产生颜色来进行比色的方法。如异羟肟

31、酸铁、生颜色来进行比色的方法。如异羟肟酸铁、4- 4- 氨氨基安替比林或氨基比林、三氯化铁、三氯化铁基安替比林或氨基比林、三氯化铁、三氯化铁- - 铁氰化钾、磷钼酸、磷钨酸。铁氰化钾、磷钼酸、磷钨酸。n 例如短茶素片中岩白菜素的测定例如短茶素片中岩白菜素的测定40（2 2）如果酚羟基的对位或邻位未被取代，在碱性溶）如果酚羟基的对位或邻位未被取代，在碱性溶液中则能和重氮化的对氨基苯磺酸反应生成紫色液中则能和重氮化的对氨基苯磺酸反应生成紫色或红色。或红色。 如佛手内酯（如佛手内酯（bergaptenbergapten）、伞花内酯（）、伞花内酯（umbelliferoneumbelliferone）

32、都能和重氮化对氨基苯磺酸反应呈）都能和重氮化对氨基苯磺酸反应呈色。色。 OOOH3CO+N NSO3HOH-COOHOH3COOHN NSO3H41（3 3）若香豆素衍生物）若香豆素衍生物C C6 6位上没有取代基，则能与位上没有取代基，则能与GibbsGibbs试剂反应生成蓝色。试剂反应生成蓝色。 OH-OOOHCOO-+NClOClClOClClNO-OOC42（二）紫外分光光度法（二）紫外分光光度法 1 1应用原理应用原理 （1 1）香豆素类衍生物的紫外吸收光谱一般表现为）香豆素类衍生物的紫外吸收光谱一般表现为 minmin244244士士4nm4nm（log3.26 3.54log3.

33、26 3.54）；）； maxmax275275士士4nm4nm（log3.98 4.10log3.98 4.10）；）； minmin300300士士5nm5nm（log3.52 3.8log3.52 3.8）；）； maxmax315315士士8nm8nm（log3.70 3.95log3.70 3.95）。）。 （2 2）如果分子中有羟基存在，特别在）如果分子中有羟基存在，特别在 C C6 6或或 C C7 7上，上，其主要最大吸收峰向红位移。其主要最大吸收峰向红位移。 43（3 3）呋喃香豆素的吸收峰向紫位移，它的）呋喃香豆素的吸收峰向紫位移，它的 maxmax在在 220 230nm

34、220 230nm及及250nm250nm。 （4 4）pHpH影响：在碱性溶液中香豆素的最大影响：在碱性溶液中香豆素的最大吸收峰位置较其在中性或酸性溶液中多数有吸收峰位置较其在中性或酸性溶液中多数有显著地向红位移现象，且吸收系数也有所增显著地向红位移现象，且吸收系数也有所增大。例如伞形花内酯大。例如伞形花内酯 maxmax325nm325nm（log4.15log4.15），），但在碱性溶液中，其但在碱性溶液中，其 maxmax 372nm 372nm（log4.23log4.23）。）。 44 秦皮为木犀科植物白蜡树秦皮为木犀科植物白蜡树Fraxinus chinensis Roxb.、苦

35、栃白蜡树苦栃白蜡树F. rhynchophylla Hance、尖叶白蜡树、尖叶白蜡树F. chinensis Roxb. var. acuminata Lingelsh.、宿柱白蜡树、宿柱白蜡树F. stylosa Ungelsh .等的干燥树皮或干皮。具清热燥湿、等的干燥树皮或干皮。具清热燥湿、收涩明目之功效。收涩明目之功效。454647主含香豆素类成分七叶树苷（主含香豆素类成分七叶树苷（aesculinaesculin，秦皮甲，秦皮甲素）及其苷元七叶树内酯（素）及其苷元七叶树内酯（aesculetinaesculetin，秦皮，秦皮乙素），并含白蜡树苷（乙素），并含白蜡树苷（fraxin

36、fraxin）、白蜡树内）、白蜡树内酯（酯（fraxetinfraxetin）、紫丁香苷（）、紫丁香苷（syringinsyringin）等。）等。 OOOglcHOaesculinOOHOHOaesculetinOOH3COHOO glcfraxin48n 取秦皮粉末取秦皮粉末1g1g，加乙醇，加乙醇10ml10ml，加热回流，加热回流10min10min，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取秦皮甲放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取秦皮甲素与秦皮乙素对照品，加乙醇制成每素与秦皮乙素对照品，加乙醇制成每1ml1ml各含各含5mg 5mg 的混合溶液，作为对照品溶液。的混合溶液，作为对照品溶液

37、。n 吸取上述两种溶液各吸取上述两种溶液各3l3l，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲苯薄层板上，以甲苯- - 乙酸乙酯乙酸乙酯- - 乙醇乙醇- - 甲酸（甲酸（3 3：4 4：2 2：1 1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（光灯（365nm365nm）下检视。供试品色谱中，在与对）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 49502定量分析定量分析 （1 1）薄层）薄层- -分光光度法分光光度法n 对照品溶液的制备：对照品溶液的制备：精密称取经精密称取经808

38、0干燥至恒干燥至恒重的秦皮甲素对照品重的秦皮甲素对照品20mg20mg，置，置10ml10ml量瓶中，加乙量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解，必要时可微温加热，放冷醇适量，振摇使溶解，必要时可微温加热，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，即得。，加乙醇至刻度，摇匀，即得。 51n标准曲线的制备：标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液精密吸取对照品溶液3030、5050、7070、9090与与 110l110l，照薄层色谱法试验，沿硅胶薄，照薄层色谱法试验，沿硅胶薄层板的起始线分别点成层板的起始线分别点成 35cm35cm的长条（据点样量的长条（据点样量的多少而定），以正丁醇的多少而定），以正丁醇- - 氯仿氯仿

39、- - 甲苯甲苯- - 甲酸（甲酸（8 8：1 1：1 1：1 1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（光灯（365nm365nm） 下检视定位，分别刮取对照品条下检视定位，分别刮取对照品条斑置具塞锥形瓶中。同时刮取同一薄层板下端与斑置具塞锥形瓶中。同时刮取同一薄层板下端与条斑等面积的硅胶作为空白，置另一具塞锥形条斑等面积的硅胶作为空白，置另一具塞锥形瓶中，各瓶均精密加入乙醇瓶中，各瓶均精密加入乙醇10ml10ml，4545水浴小心水浴小心加热加热30min30min，放冷，滤过，取续滤液，照分光光度，放冷，滤过，取续滤液，照分光光度法，在法，在336n

40、m336nm的波长处测定吸收度，以吸收度为的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 52n 测定法：测定法：取秦皮粉末约取秦皮粉末约1g1g，精密称定，置，精密称定，置50ml50ml具塞锥形瓶中，精密加入乙醇具塞锥形瓶中，精密加入乙醇10ml10ml，称定重量，称定重量，加热回流加热回流30min30min，放冷，再称定重量，用乙醇补足，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。溶液。53 照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液照薄层色谱法试验，精密吸取供试

41、品溶液50l50l，沿硅胶薄层板的起始线点成沿硅胶薄层板的起始线点成5cm5cm的长条，另精的长条，另精密吸取对照品溶液密吸取对照品溶液5l5l，点于供试品条斑一侧间，点于供试品条斑一侧间隔隔1.5cm1.5cm处，作为对照。以正丁醇处，作为对照。以正丁醇- - 氯仿氯仿- - 甲苯甲苯- - 甲酸（甲酸（8 8：1 1：1 1：1 1）为展开剂，展开，取出，晾）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯干，置紫外光灯(365nm)(365nm)下检视，刮取与对照品下检视，刮取与对照品色谱中斑点相应位置上的供试品色谱中的条斑，色谱中斑点相应位置上的供试品色谱中的条斑，照标准曲线的制备项下的方法，自

42、照标准曲线的制备项下的方法，自“置具塞锥置具塞锥形瓶中形瓶中”起，依法测定吸收度，从标准曲线上起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中秦皮甲素的重量，计算，即读出供试品溶液中秦皮甲素的重量，计算，即得。得。 本品含秦皮甲素（本品含秦皮甲素（C C1515H H1616O O9 9）不得少于）不得少于1.36%1.36%。 54 补骨脂补骨脂: : 为豆科植物补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea Psoralea corylifolia corylifolia L. L. 的果实。具的果实。具温肾助阳、纳气、温肾助阳、纳气、止泻功效。止泻功效。55n主含香豆素类成分补骨脂内酯（主含香豆素类成分补骨脂内酯（psoralenpsoralen）、异补）、异补骨脂内酯（骨脂内酯（isopsoralenisopsoralen）、补骨脂