医疗器械无菌检查操作规程

1、1. 目的建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。2. 适用范围本规程适用于本公司质管部对本厂生产的一次性微波消融针的无菌检测。3. 职责质量部负责实施。4. 内容检验依据产品注册标准中华人民共和国药典 2015 年版 无菌检查法 仪器、设备超净工作台、电热干燥箱、恒温培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪、电子天 平、PH计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶，接种环、镊子，试管架， 大试管若干等。培养基及稀释液需气菌、厌气菌培养基：硫乙醇酸盐流体培养基；霉菌培养基：大豆酪蛋白肉汤培养基；培养基 的无菌性检查每批配制的培养基均应进行无菌性检查 （可与产品无菌检验同步进行） 查时，每批培养基

2、随机取不少于 5 支（瓶）培养 14 天，应无菌生长； 稀释液氯化钠 - 蛋白胨缓冲液， 9g/L 无菌氯化钠溶液；无菌检验室的环境要求 （1）无菌检验应在环境洁净度 10000 级下的局部百级的单向流空气区域内进行。（2）缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照 室与缓冲区之间空气应保持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa无菌检验室的室温应保持 1826C,相对湿度：4565%（3）无菌检验室的单向流空气区、 工作台面及环境应定期按 医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行悬浮粒子、 浮游菌和沉降菌的监测。（4） 无菌检验

3、过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数： 每次操作 时在层流空气所及台面的左中右置 3个TSA琼脂平板，暴露30min,于3035C 培养48小时，菌落数平均应不超过1CFU平板。无菌检验前的准备器具灭菌、消毒可经压力蒸汽灭菌器内121T蒸汽灭菌30分钟后使用。人员、物料进入无菌检验室开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理，消毒时间不得少于30min。物料进入无菌检验室流程进入无菌操作室的所有培养基、 供试品等的外表都应采用适用的方法进行消毒处理，以避免将外包装污染的微生物带入无菌检验室。人员进入无菌检验室流程（1）更鞋脱衣：在一更区脱去一般区工作鞋，穿上无菌检验室工作鞋；脱去一 般

4、区工作服。（2）洗手：首先用洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水连续冲洗20 秒，洗净泡沫。（3）更衣：在二更区按照要求穿衣，要求裤子掖在上衣里，口罩掩住口鼻，帽 子包裹所有头发。（4）手消毒：用消毒液浸泡双手 5 秒以上或用浸过消毒液的棉球擦拭双手。消 毒液可用洗必泰、新洁尔灭、碘伏、 75%酒精等。（5）人员进入：经缓冲间进入无菌检验室。无菌检验操作要求（1）全过程必须严格执行无菌操作，防止微生物污染。（2）使用玻璃器皿应轻取轻放，避免破损，以防培养物扩散。（3）所有操作不得有大幅度或快速动作，以免搅动空气中的尘埃微粒。（ 4） 使用金属接种器具时，用前、用后均需灼烧灭菌。（ 5） 在接种培养

5、物时，动作应轻、准，防止培养物溅出，产生汽溶胶，造成污 染。（6）操作过程中所有的带菌物品，用后均应作消毒、灭菌处理。在检验完成后 经传递窗传至一般区，立即用压力蒸汽灭菌锅121C灭菌30分钟。对照菌液制备无菌检验所用的菌株传代次数不得超过 5 代。取金黄色葡萄球的普通琼脂斜面培养物，接种金黄色葡萄球至TSA琼脂培养基内，在3035 C培养1824h后备用，同时制备氯化钠溶液加入在6支小试管 内，每支试管内加的氯化钠溶液，在压力锅内经121C灭菌30min备用。将已 配好的金黄色葡萄球菌培养菌液取加入第一支小试管内，稀释成浓度 1:10 的菌 液；取第一支试管内 l 菌液加入第二支小试管内，稀

6、释成浓度 1:100 的菌液， 同法稀释成浓度1:10-6 （每ml含菌量w 100CFU即可。采用平皿计数法测定活菌数。. 试验方法供试液准备优先采用将供试品或其有代表性的各部分直接投放入培养基内培养的方法， 如供试品不适宜直接投放， 可按下列方法制备供试液， 应使浸提介质充分洗提供 试品的浸提表面，供试液制备应按无菌操作法进行，在制备后 2 小时内使用。根据供试品具体特性选择下列方法：a）管类器具：按管内表面积每10cm2 流过管内腔 1ml 浸提介质，流量约为10ml/min ，收集到无菌的容器内。b）容器类器具：按容器内表面积每 10cm2 加入浸提介质 1ml 的比例，振摇数次。c）

7、实体类器具：实体类器具按表面及每 10cm2加入浸提介质1ml,振摇数次。收集上述冲洗液或浸提介质于无菌容器中。接种薄膜过滤法：优先采用封闭式薄膜过滤器（集菌器） ，也可使用开放式薄膜 过滤器。滤膜孔经不大于 ym。a、如采用封闭式薄膜过滤器，取一副三联式集菌器，将供试液通过集菌仪过滤，使通过每只培养管的量基本均匀。然后通过集菌仪一只加 50ml TSB 培养基，另 两只分别加入 50ml 硫乙醇酸盐培养基（其中一只做阳性对照，内加金黄色葡萄 球菌液1ml）。另取一副二联集菌器，用同批的冲洗液或浸提介质50ml通过集菌仪过滤（每只约50ml），同法一只加硫乙醇酸盐培养基 50ml，另一只加TS

8、B培养 基 120ml 分别作阴性对照。b、 如用一般薄膜过滤器，将供试液过滤后取出滤膜，将其剪成3等份，分别置 于含50ml硫乙醇酸盐流体培养基及 TSB培养基的容器中，其中两份作检验，一 份作阳性对照。直接接种法： 适用于一次性使用注射针、 一次性使用静脉输液针 （包括输液 器、输血器、注射器配套使用注射针） 。a、敷料供试品：取规定数量，每个包装以无菌操作拆开，于不同部位剪取约120mg 或1cmx 3cm的供试品，接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。b、无菌针头：直接投入含15ml以上硫乙醇酸盐流体培养基及 TSB培养基的容器 中。c、一次性使用的材料：拆散或切成小碎断，接种于各管足以浸没供试品的适量 培养基中。培养、观察（1）上述含培养基的容器分别置规定温度的恒温培养箱中，其中硫乙醇酸盐 流体培养基，置3035C培养；TSB培养基，置2025C培养。除阳性对照管 培养4872小时外，其余管培养14天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生 长。（2） 如在加入供试品后、或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14 天后， 不能从外观上判断有无微生物生产， 可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中 或划线接种于斜面培养基上， 细菌培养 2 天，真菌培养 3 天，观察是否再出现浑 浊或斜面有无菌生长。结果判断（1）培养结束后，阳性对照管应有菌