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文档简介

1、SolarbioShanghai Solarbio Science & Technology Co., LtdTel:ax:ttp:/ 谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）试剂盒说明书（50T） 一、 测定意义GSH-Px 是谷胱甘肽氧化还原循环中催化 GSH 氧化的主要酶之一。GSH-Px 不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与 ROS 反应，从而保护生物膜免受 ROS 的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。二、

2、 测定原理GSH-Px 可以催化 GSH 产生 GSSG，而谷胱甘肽还原酶可以利用 NADPH 催化 GSSG产生 GSH，GSH-Px 是限速酶，通过检测 NADPH 的减少量就可以计算出 GSH-Px 活性。三、 实验中所需仪器及设备紫外-可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml 石英比色皿、双蒸水四、 试剂组成和配置试剂一：粉剂一×1 支，4保存 3 个月粉剂二×2 支，4保存 3 个月（不同公司保存温度不同）粉剂三×2 支，4保存 3 个月液体一×2 支，4保存 3 个月液体二×1 支，常温保存五、 样品前处理a) 试剂

3、一配制：粉剂一加 150ml 双蒸水充分溶解，4保存b) 称约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4离心 10min，取上清(如上清不清澈，再离心 3min)六、 GSH-Px 测定操作a) 混合试剂配制：粉剂二 1 支，粉剂三 1 支，液体一 1 支混合加试剂一定容至 40ml，临用前配制b) 底物液配制：液体二加双蒸水定容至 5mlc) 按下表加样测定管 空白管混合试剂 0.8ml 0.8ml双蒸水 0.1ml样品液 0.1ml 底物液 0.1ml 0.1ml37度 预温3min加底物液后，迅速混匀，于 340nm 处测定第 0s 和第 180s 的吸光

4、值，分别记为 A1 和A2.七、 GSH-Px 活力计算a) GSH-Px 活力单位定义：每 mg 蛋白每分钟氧化 1mol NADPH 定义为 1 个活力单位。b) 计算公式：GSH-Px 活力单位=（A 测定A 空白）/3.11×(V 总/V 样)÷Cpr =（A 测定A 空白）×3.125÷CprA=A2-A1V 总：反应总体积（ml）V 样：所用样品体积（ml）Cpr：蛋白浓度（mg/ml）注意事项：1、 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力2、 混合试剂须现配现用，配完后置于冰上3、 此试剂盒仅适用于动植物组织4、 测定过程操作

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