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1、虫草香菇多糖口服液对人SCG-7901胃癌细胞株活性的抑制机理研究摘要:目的 观察虫草香菇多糖口服液对人胃癌SCG-7901细胞株活性的作用,初步探讨其作用的时效和量效关系,为该药应用于胃癌治疗提供实验依据。方法按照倍比稀释原则配制8个不同浓度的培养药液,作用于人胃癌SCG-7901细胞24h、48h、72h后,采用噻唑盐(MTT)比色法测定各培养孔的OD值,并计算其细胞生长抑制率(IR,%)。结果 不同作用时间比较和不同浓度间比较,均具有显著性差异,F=566.685,P<0.05和F=33.041,P<0.05;在作用48h-72h之间所能达到的最高抑制率为70.56%,与终浓

2、度为100µg/ml的环磷酰胺相当。结论 低浓度的虫草香菇多糖口服液可提高人胃癌SCG-7901细胞株的细胞活性,中、高浓度口服液则可显著降低其细胞活性,其抑制作用存在量效和时效依赖性,最高抑制率为70.56%。关键词:虫草香菇多糖;人SCG-7901胃癌细胞;体外实验;量效关系;时效关系据有关媒体报道,国家发明专利药物虫草香菇多糖口服液(专利号:.3)对多种癌症具有较好的资料效果,本文通过体外实验,观察了虫草香菇多糖口服液对人SCG-7901胃癌细胞株活性的作用,现总结如下。1、 实验材料与方法1.1 .靶细胞株 人胃癌SCG-7901细胞株,为河南省生物工程技术研究中心冻存。1.

3、2 主要仪器及试剂 INCO2/108型CO2培养箱,德国MEMMERT公司产品;MK3型酶标仪,Thermo Labsystems 公司产品;XD-101型倒置显微镜为上海精密仪器仪表有限公司产品;96孔细胞培养板和24孔细胞培养板均为NUNC产品;RPMI-1640为Gibco BRL产品,MTT和DMSO为Sigma产品,其他试剂均为国产分析纯。1.3 培养药液的配置与实验分组 将虫草香菇多糖口服液(批号20090201)按5000rpm转速离心10min,尽取上清,高温高压灭局,作为储备液,封口后4°C冰箱保存备用。使用先配置成口服液终浓度为0.5、1、2、4、8、16、32

4、、64µl/ml的RPMI-1640培养药液,作用于细胞时分别命名为浓度1、浓度2、浓度8组,并以不加药品的标准RPMI-1640培养液作为本实验的阴性对照组,以终浓度为100µg/ml的环磷酰胺(CTX)作为本实验的阳性对照组。1.4 噻唑盐(MTT)比色法进行体外细胞药物敏感性试验 将人胃癌SCG-7901细胞柱传代至对数生长期后,经胰酶-EDTA液消化,以台盼蓝拒染试验调整细胞悬液终浓度为2×104/ml,接种于96孔培养板中,每孔200µl。置37°C 、5%CO2温箱培养使细胞贴壁,常规24h后,弃去板上各孔内原有液体,再分别换上含有

5、相应浓度药物的药物培养液200µl,于37°C 、5%CO2 培养箱中培养,每个药物每浓度设3个平行孔。分别于作用24h、48h、72h后,小心吸去上清,每孔加入80µl新鲜RPMI1640培养液,再加入20µl MTT溶液(5mg/ml,即1.5%MTT),继续培养4h,弃去96孔板上各孔中原有液体,每孔再加入DMSO 200µl,置摇床上低速震荡10min,以充分溶解结晶微粒,用酶标仪在492nm波长下测定各孔的吸光值(OD值),以不加药的阴性对照组A492的OD值均数作为对照,重复上述实验两次,以验证两次,以验证可重复性。细胞存活率及药物

6、对细胞的抑制率按下式计算:细胞生长抑制率(IR,%)=(阴性对照组平均值OD值-用药组平均OD值)÷(阴性对照组平均吸光值)×100%;1.5 统计学方法 数据采用SPSS13.0统计分析软件进行分析处理,资料采用均数±准差进行描述,组间比较采用析因设计方差分析和重复测量资料的方差分析,以a=0.05作为检验水准。2 结果 不同浓度虫草香菇多糖口服液对人胃癌SCG-7901细胞株活性及抑制率的影响,见表1及图1、图2。表1 虫草香菇多糖口服液对人胃癌SCG-7901细胞株活性的作用时期OD值(mean±SD),抑制率(IR,%)24h 48h 72h 阴

7、性对照组0.033±0.020,0.111±0.033,0.024±0.009,浓度10.035±0.028,-7.630.122±0.046,-9.910.026±0.007,-15.6浓度20.037±0.037,-13.000.140±0.065,-26.100.031±0.012,-31.3浓度30.031±0.026,5.340.096±0.047,13.290.022±0.013,15.00浓度40.028±0.010,14.500.091±0

8、.083,18.470.017±0.004,23.40浓度50.025±0.031,24.430.075±0.033,32.430.015±0.011,35.6浓度60.022±0.018,33.590.064±0.054,42.120.014±0.008,66.67浓度70.020±0.019,38.930.048±0.028,56.530.013±0.007,71.55浓度80.021±0.014,37.410.036±0.032,67.120.011±0.01

9、7,72.18阴性对照组0.020±0.016,40.460.035±0.038,68.920.014±0.009,69.65注:不同作用时间的比较:F=566.685,P<0.05;不同浓度间的比较;F=33.041,P<0.05。图 1 不同浓度口服液作用效果图2 口服液不同作用时间后的抑制率3 讨论胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,每年约有64万人因胃癌死亡,居癌症死因的第二位,外科手术的其治愈率不到30%,严重威胁着我国人民的生命健康。中医药对胃癌的治疗,在缓解临床症状,配合手术治疗,减轻放化疗的毒副反应,提高治疗有效率,延长生存时间等方面

10、具有很大的优势。因而,抗癌中药的研究与开发,一直是中医药领域研究的热点。 虫草香菇多糖口服液由虫草、香菇、胡萝卜、山药等药材的提取物组成,方中虫草为我国名贵中药,可产生虫草酸、虫草素、虫草多糖及SOD等多种活性物质,其中虫草素具有公认的抗肿瘤作用,可在体内试验及体外通过抑制RNA、DNA、蛋白质的合成,降低c-myc表达,增强放疗及化疗的敏感性,增强NK细胞活性等多个方面发挥作用。香菇多糖(EGb)在体内、体外对多种肿瘤细胞均有良好抗肿瘤活性和增强机体免疫力的作用,并呈剂量依赖性。-胡萝卜素可以抑制乳腺癌、结肠癌、白血病、黑色素瘤以及前列腺癌等多种肿瘤细胞的增殖,并能通过多种机制促进肿瘤细胞凋

11、亡。山药的多糖同样具有调节免疫和抗肿瘤作用。上药合用,不但从各个组分上可以提示其具有潜在的抗肿瘤作用,更通过其共同的免疫调节作用而可能对在体的肿瘤具有更好的治疗作用。 本研究表明,在72h内,低浓度(浓度1、浓度2)的虫草香菇多糖口服液可提高人胃癌SCG-7901细胞株的细胞活性;而中、高浓度(浓度3至浓度8)的口服液可显著降低其细胞活性;在中、高浓度口服液作用下,药物在24h、48h、72h均能抑制人胃癌SCG-7901细胞株的细胞活性,并显示出一定的剂量依赖关系和实效依赖关系,即随着药物浓度的增高和作用的延长,其抑制率越高;在作用72h后,在浓度5至浓度8之间都达到最高抑制率,最高抑制率为

12、70.56%,且以较高浓度的口服液,较先达到最高抑制率,但组间无显著性统计学差异。人而提示,本药对胃癌细胞生长和增殖的影响,可能存在双向作用,但高浓度的本药对胃癌细胞具有较强的活性抑制作用。在临床使用本药治疗胃癌时,应当适当使用较高浓度的药物。同时建议,专利持有者和有关学者应对本药的作用机理进行进一步的研究,以便为临床应用提供更可靠的依据。参考文献【1】 徐飚,王建明,胃癌流行病学研究j华肿瘤防治杂症,2006.13(1)1-7【2】 Hohenberger P Gretschel S Gastric Cancer j Lancet ,2003,362(9380):305-315【3】 孙大志,徐晶钰,魏品康,胃癌中医基础实验研究现状j 云南中医学院学报,2010,33(3):65-68【4】 丁向萍,马力,虫草素抗肿瘤机制

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