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文档简介

1、实验八 蛋白质的沉淀反应一、实验目的加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识，并了解沉淀蛋白质的几种方法及蛋白质变性与沉淀的关系。二、实验原理在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的现化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水面而沉淀。蛋白质的沉淀反应可分为可逆沉淀反应和不可逆沉淀反应两类。可逆沉淀反应是指蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。不可逆沉淀反应是指蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在

2、，并不析出。有些变性蛋白质并不定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。三、仪器、药品1、仪器：试管、温度计（150）、烧杯（500mL）、电炉、酒精灯、剪刀2、药品：5%卵清蛋白溶液、饱和硫酸铵、硫酸铵粉末、3%硝酸银、乙醇、0.1mol/L氢氧化钠溶液、0.1mol/L盐酸、pH4.7缓冲溶液、0.1mol/L醋酸、0.05mol/L碳酸钠四、实验步骤1、蛋白质的盐析 在一支试管中加入5mL5%卵清蛋白溶液，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀

3、为清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。2、重金属离子沉淀蛋白质 取1支试管，加入5%蛋白质溶液2 mL，再加3%硝酸银溶液12滴，振荡试管，有沉淀产生，放置片刻，倒去上清液，向沉淀中加入少量水，沉淀是否溶解？为什么？3、有机溶剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入2 mL5%蛋白质溶液，再加入2 mL乙醇。混匀，观察沉淀的生成。倒去上清液，向沉淀中加入少量水，沉淀是否溶解？为什么？4、乙醇引起的变性与沉淀 取3支试管，编号，依下表顺序加入试剂：编号5%卵清蛋白溶液0.1mol/L氢氧化钠溶液0.1mol/L盐酸溶液乙醇pH4.7缓冲溶液11一一11211一1一31一11一备注：以上单位用mL振荡摇混匀后，观察各管有何变化。放置片刻，向各管内加水8mL，然后在第2、3号管中各加一滴甲基红，再分别用0.1mol/L醋酸溶液及0.05mol/L碳酸钠溶液中和之。观察各管

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