霉菌和酵母菌检测

1、霉菌和酵母菌检测1 设备和材料除微生物试验室常规灭菌及培育设备外，其他设备和材料如下：1.1 冰箱：25。1.2 恒温培育箱：28±1。1.3 均质器。1.4 恒温振荡器。1.5 显微镜：10×100×。1.6 电子天平：感量0.1g。1.7 无菌锥形瓶:容量500ml、250ml。1.8 无菌广口瓶：500ml。1.9 无菌吸管：1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)。1.10 无菌平皿：直径90mm。1.11 无菌试管：10mm×75mm。1.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。2 培育基和试剂2.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培育基：见附录A

2、中A.1。2.2 孟加拉红培育基：见附录A中A.2。3 操作方法3.1 试验前预备3.1.1 将供试品及全部已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀释剂等移至操作室内。预备好足够用量，避开操作中出入操作间。3.1.2 开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置30min。3.1.3 操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。 3.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手、工作台面，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处四周，待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封。 3.2

3、样品稀释液的制备依据供试品的理化特性与生物学特性，实行适宜的方法制备样品稀释液。样品稀释液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45。样品稀释液从制备至加入检验用培育基，不得超过1小时。3.2.1 固体和半固体样品称取25g样品至盛有225ml灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225ml无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10的样品匀液。3.2.2 液体样品以无菌吸管吸取25ml样品至盛有225ml无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。3.3 霉菌和酵母菌计数3.3.1 用1ml无菌吸管或微量移

4、液器吸取1:10样品匀液1ml，沿管壁缓慢注于盛有9ml 稀释液的无菌试管中（留意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。3.3.2 按3.3.1操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1ml 无菌吸管或吸头。3.3.3 依据对样品污染状况的估量，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对比。3.3.4 准时将15ml20ml冷却至46的马铃薯-葡萄糖-琼脂培

5、育基或孟加拉红培育基（可放置于46±1恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。3.4 培育待琼脂凝固后，将平板翻转，28±1培育5d，观看并记录。3.5 菌落计数肉眼观看，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位（colony forming units，CFU）表示。选取菌落数在10CFU150CFU的平板，依据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌集中生长掩盖整个平板的可记录为多不行计。菌落数应接受两个平板的平均数。3.6 结果与报告3.6.1 计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。3.6.1.1 若全部平板上菌

6、落数均大于150CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不行计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。3.6.1.2 若全部平板上菌落数均小于10CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。3.6.1.3 若全部稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。3.6.2 报告菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，接受两位有效数字报告。菌落数大于或等于100时，前3位数字接受“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，接受两位有效数字。称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/ml为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。附录 培育基和试剂1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培育基1.1 成分马铃薯(去皮切块) 300g葡萄糖 20.0g琼脂 20.0g氯霉素 0.1g蒸馏水 1000ml1.2 制法将马铃薯去皮切块，加1000ml蒸馏水，煮沸10min20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000ml。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装后，121灭菌20min。倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培育基中2 孟加拉红培育基2.1 成分蛋白胨 5.0g葡萄糖 10.0g磷酸二氢钾1.0g硫酸镁（无水）0.5g琼脂 20.0