冰冻切片固定方法的改进-

1、体外抗菌作用研究。中国抗生素杂志,1994,19:147.(收稿:1997210220修回:1998203222(本文编辑俞瑞纲冰冻切片固定方法的改进姚海嵩杨践金晓龙曹福妹丁长囡冰冻切片在病理快速诊断中运用广泛,但要做好一张优良的冰冻切片并非容易,尤其是冰冻组织固定不良会造成切片背景不清,染色不良等问题1。近年来我们运用改良H S(H azard and Steven son固定液2和C larke固定液的双重固定法替代C larke固定液3单液固定法对切片进行固定,使冰冻切片质量有了明显的提高,报道如下。材料及方法一、固定液的配制(一改良H S固定液(A液中性缓冲福尔马林80m l,95%酒

2、精19m l,冰醋酸1m l。(二C larke固定液(B液无水酒精75m l,冰醋酸25m l。二、组织切片切取1.5c m×1.2c m厚0.5c m手术新鲜组织用O CT包埋后置于恒冷切片机快速冷冻后,同一组织制备厚为6m连续切片2张。三、固定方法实验组:将一张切片放置半干后,立即放入A液内固定30秒1分钟,后流水冲洗30秒,再置入B液内固定1分钟;对照组:将另一张切片放置半干后,直接置于B液固定1分钟。四、染色两组切片经固定后入哈立氏苏木素液3分钟后, 1%盐酸酒精分化5秒,流水泛蓝5分钟,伊红染液1分钟,梯度酒精脱水,二甲苯透明,树胶封片。结果显微镜观察两组切片发现:应用双

3、重固定法的实验组比使用单固定法的对照组冰冻切片质量明显提高,具体优点为:切片背景清楚,实质细胞及间质组织结构清晰,细胞核嗜苏木素,胞浆嗜伊红性,两者对比分明,结果见图1、2 。 图1实验组:乳腺导管内癌,腺管结构清楚,细胞核浆对比鲜明图2对照组:乳腺导管内癌,腺管结构模糊,细胞分界不清讨论近年来随冰冻切片技术的发展,冰冻切片质量明显提高,但与石蜡切片相比仍有一定的差距。石蜡切片由于组织受福尔马林的作用,固定迅速而完全,且组织经脱水透明及浸蜡多道步骤后,使游离在组织中一些小分子物质被洗脱,组织再经过充分的脱脂后非常容易与染色剂亲合。故石蜡切片中细胞界限明确。染色分明,背景清晰。由于冰冻切片的制作

4、原则与石蜡切片不同,制作一张质量高的冰冻切片不仅要做到组织速冻完全,防93上海医学1998年5月第21卷第5期响4。实验组冰冻切片先经H S固定液,使其具有与石蜡切片相类似的环境,组织固定彻底,经流水冲洗,将多余的固定液和切片中溶于固定液的小分子物质洗去,这就消除了切片被遮盖以至染色模糊的缺点。切片再经第二液C larke固定液的再固定及酒精脱脂作用,使染色剂与组织亲合性增强染色鲜明。还消除了因细胞核固定不良,所致染色对比不分明的缺陷。对照组切片未经H S固定液及流水冲洗而直接入C larke固定液,固定效果不如双重固定法,与实验组切片相比较则显染色不甚清晰,背景模糊。通过使用两种不同固定方法

5、结果的比较,我们认为双重固定液法在冰冻切片中应用良好,明显优于C larke氏单液固定法,值得推广应用。参考文献2.Schm ideW A.P rinci p les and tenchniques of surgical patho logy Cali2fo rnia:A ddison W esley,1983;119.4.赫丽,张意平,肖同浩.制作冰冻切片的几点技巧,临床与实验病理学杂志,1996,12:258(收稿:1997212210修回:1998203210本文编辑:刁会正三种指示剂对测定氯化钠注射液含量的影响杨婉花张芳华朱磊按中国药典95版,测定氯化钠注射液含量通常采用荧光黄吸附指

6、示剂法,测定液pH与荧光黄pH变色范围有差异,往往使终点变化不明显,结果偏高。U SPXX I版使用不加亲水性高分子溶液,也未调节pH 的二氯荧光黄吸附指示剂法,B P1988使用铬酸钾指示剂法。本文用铬酸钾指示剂法,荧光黄、二氯荧光黄吸附指示剂法在不同条件下分别对标准氯化钠液含量进行测定,比较了三种不同指示剂对氯化钠含量测定的影响。试剂与药品氯化钠(基准试剂中国精细化工研究所,硝酸银(基准试剂上海试剂一厂,铬酸钾、荧光黄、二氯荧光黄、碳酸钙、糊精均为分析纯,铬酸钾指示剂、荧光黄指示剂均按照中国药典1995版方法配制,二氯荧光黄指示剂按照美国药典XX I版配制,氯化钠注射液(瑞金医院制剂室批号

7、961022、961112、970103、970402。实验方法一、0.1m o l L A gNO3滴定液配制精称经110干燥至恒重的硝酸银放置棕色量瓶中,蒸馏水溶解并定容,摇匀。二、1.2%氯化钠标准液配制精称经110干燥至恒重的氯化钠适量,蒸馏水溶解并定容,摇匀。三、测定方法分别精吸氯化钠标准液10m l,加水40m l,在不同条件下对氯化钠标准液含量进行测定(n=6。(一铬酸钾指示剂法 法、 法(加CaCO30.1克分别加铬酸钾指示剂10滴,以A gNO3(0.1m o l L滴定至砖红色沉淀生成。(二荧光黄指示剂法 法、 法(加CaCO30.1克、 法(加2%糊精5m l、 法(加CaCO30.1克,加2%糊精5m l分别加荧光黄指示剂8滴,以0.1m o l L A gNO3滴定终点依次为淡橙色、粉红色、淡红色、粉红色。(三二氯荧光黄吸附指示剂法 法、 法加(CaCO30.1克、 法(加2%糊精5m l、 法(加Ca2 CO30.1克,加2%糊精5m l分别加二氯荧光黄指示剂10滴,以0.1m o l L A gNO3滴定至粉红色。(四样品测定精吸氯化钠注射液10m l,按 法、 法、 法、 法分别测定氯化钠含量