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文档简介

1、专题3 植物的组织培养技术课题1菊花的组织培养1.能记住植物组织培养的基本原理。2.能说出植物组织培养的基本过程。3.完成菊花或其他植物的组织培养。一二三四一、植物组织培养的基本原理植物细胞具有全能性,即当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时,在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下,表现出可以发育成完整植株的能力。一二三四二、植物组织培养的基本过程1.重要概念(1)细胞分化:在植物的个体发育过程中,细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异,形成这些差异的过程叫做细胞分化。(2)愈伤组织:离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过细胞分裂过程形成的组织,叫

2、愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则,是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。(3)脱分化:由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程,又叫去分化。(4)再分化:脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成根或芽等器官的过程。一二三四2.过程马铃薯长期种植,产量会降低而且易感染病毒,要想提高马铃薯的产量,培育无病毒的马铃薯,应该怎么办?提示:长期进行无性繁殖的植物,只有根尖和茎尖中几乎无病毒,因此,可以茎尖或根尖为材料利用植物组织培养获得无病毒的马铃薯植株。一二三四三、影响植物组织培养的因素1.材料的选择植物材料的选择直接关系到实验的成败。植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等

3、都会影响实验结果。菊花的组织培养,一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。2.培养基植物组织培养需要适宜的培养基,常用的是MS培养基,其主要成分包括:大量元素,如N、P、K、Ca、Mg、S;微量元素,如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co;有机物,如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素,以及蔗糖等。常常还需要添加植物激素。一二三四3.植物激素植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。培养基中添加的植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等,都会影响实验结果。以生长素和细胞分裂素为例。一二三四一二三四4.其他影响因素pH、温度、光照等条件也是重要因素,不同的植物对各

4、种条件的要求往往不同。进行菊花的组织培养时,一般将pH控制在5.8 左右,温度控制在1822 ,每日用日光灯照射 12 h。一二三四四、实验操作1.制备MS固体培养基(1)配制各种母液。(2)配制培养基。(3)灭菌:将分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。 2.外植体消毒一二三四在上述消毒过程中,是不是消毒强度越大越好,为什么?提示:不是。对外植体进行表面消毒时,既要考虑到药剂的消毒效果,又要考虑到植物细胞的耐受力。3.接种所有的接种操作都必须在酒精灯火焰旁进行,并且每次使用器械后,都需要用火焰灼烧灭菌。4.培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养,培养期间应定期消毒。5.移栽6.栽培

5、一二三一、植物的组织培养1.植物组织培养的概念植物组织培养指植物的离体部分(包括器官、组织、细胞或原生质体),在人工控制的培养基及环境条件(温度及光照)下,得以生长和分化成完整植株的一种无菌培养技术。2.植物组织培养的理论基础细胞的全能性。具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞,都具有发育成完整生物体的潜能,也就是说,该细胞具有全能性的特点。一二三3.植物细胞全能性表达的条件(1)脱离原来所在植物体(离体培养)。(2)适宜的营养物质:大量元素、微量元素等无机营养和有机营养。(3)植物激素:生长素、细胞分裂素等。(4)适宜环境条件:温度、pH和光照条件等。(5)无菌条件。特别提醒细胞全能性大小的

6、比较:受精卵生殖细胞体细胞;幼嫩组织细胞成熟组织细胞;分化程度低的细胞分化程度高的细胞。一二三4.植物组织培养的过程(1)植物组织培养的一般过程分析一二三(2)根尖分生组织和愈伤组织的异同 一二三二、影响植物组织培养的因素1.内因:不同植物的组织,培养的难易程度差别很大,如烟草和胡萝卜的组织培养较为容易,枸杞愈伤组织的芽诱导比较难;同一种植物材料的年龄、保存时间的长短等也会影响培养结果,一般选择幼嫩的组织,如茎尖、根尖等进行组织培养。一二三三、污染的预防1.污染组织培养过程中的污染是指培养容器内滋生菌斑,使培养材料不能正常生长发育,从而导致培养失败的现象。2.污染原因与处理一二三3.无菌技术是

7、植物组织培养获得成功的关键植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差,所以对培养条件的要求高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物,如一些细菌、真菌的生长。而培养物一旦受到微生物的污染,就会导致实验前功尽弃,因此要进行严格的无菌操作。可以通过以下措施做好预防。(1)防止外植体带菌。选择好外植体采集时期和采集部位。外植体采集以春、秋季为宜,优先选择地上部分作为外植体;阴雨天勿采,可在晴天的下午采集,采前喷杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋。在室内或无菌条件下进行预培养。外植体严格消毒。进行多次消毒和交替消毒,并做消毒效果实验。一二三(2)保证培养基及接种器具彻底灭菌。分装时,培养基勿粘瓶口。检查封

8、口膜是否有破损。扎瓶口时要位置适当、松紧适宜。保证灭菌时间和高压蒸汽灭菌锅内的温度。接种工具使用前彻底灭菌。工作服、口罩、帽子等布质品定期进行湿热灭菌。(3)操作人员严格遵守无菌操作规程。如一定要规范着装、操作过程中不说话等。(4)保证接种与培养环境清洁。污染瓶经高压蒸汽灭菌后再清洁。接种环境定期熏蒸消毒,用紫外灯照射或用臭氧灭菌和消毒。定期对培养室消毒。一二三特别提醒对外植体进行表面消毒时,既要考虑到药剂的消毒效果,又要考虑到植物的耐受力。不同药剂、不同植物材料,甚至不同器官都要区别对待。消毒用过的有毒药品应收集后统一交给有关专业部门处理,以免引起环境污染。一旦发现培养材料被污染,特别是真菌

9、污染,一定不要打开培养瓶。应先将所有被污染的培养瓶统一放在高压蒸汽灭菌锅中灭菌后,再打开培养瓶进行清洗。题型一题型二题型三题型一 细胞的全能性【例题1】 下列实例中能体现细胞全能性的是()用培养基把单个胡萝卜细胞培养成了可育的植株植物用种子进行繁殖用烟草组织培育出了可育的完整植株A.B.C.D.解析:和都属于已分化的细胞或组织经过培养形成可育的植株,体现了细胞的全能性。植物用种子繁殖后代,实际上是由一个受精卵,通过细胞的增殖和分化发育成新个体,是由未经分化的细胞(受精卵)发育成新个体的过程,因此不能体现细胞的全能性。答案:B反思领悟由单个细胞或组织发育成完整个体才能体现细胞的全能性。种子的胚是

10、植物的幼体,由种子长成植株是发育过程。题型一题型二题型三题型二 植物细胞表现全能性的条件【例题2】 植物细胞表现出全能性的必要条件是()A.给予适宜的营养和外界条件B.导入其他植物细胞的基因C.脱离母体后的具有完整细胞核的细胞或组织,给予适宜的营养和外界条件D.将成熟筛管细胞的细胞核移植到去核卵细胞中解析:在生物体内,细胞没有表现出全能性, 而是分化成为不同的组织、器官,这是基因在特定的时间和空间条件下选择性表达的结果。植物细胞脱离母体后,在一定的营养物质、激素和其他适宜的外界条件的作用下,就可以表现出全能性。答案:C题型一题型二题型三题型三 植物组织培养的过程及影响因素【例题3】 下图是基因型为AaBb的菊花茎尖离体培养示意图,据图回答下列问题。(1)图中A和B分别表示和。菊花茎尖能发育成植物体的根本原因是。 (2)菊花茎尖经组织培养形成试管苗的过程中,应大量供给的元素是。试管苗形成过程中要给予一定光照,其原因是 。 题型一题型二题型三(3)脱分化是指 。脱分化和再分化这两个过程的进行除必要的温度、光照和氧气等外界条件外,还要保证,否则植物组织培养就不能成功。 (4)这样培养成的试管苗的基因型是。 解析:(1)离体的植物组织或细胞,在培养一段时间以后,会通过脱分化形成愈伤组织。脱分化产生的愈伤组织继续培养,又可以重新分化成根或芽等器官,这个过程

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