杨浦五角场新王牌补习班微生物的实验室培养一

1、微生物的培养与应用第1课时 微生物的实验室培养(一)目标导读1.阅读教材掌握培养基的作用、分类及营养成分。 2.阅读教材区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法。重难点击1.了解培养基的基本知识。2.学会无菌操作的基本知识。一培养基微生物的培养离不开培养基，不同的微生物需要的培养基也有所不同。1.概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。2.分类3.成分(1)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入特殊的营养物质(生长因子)。(2)结合教材判断下面培养基的各种成分能提供的营养物质类别。成分FeSO4蔗糖(NH4)2SO4维生素氨基酸提供的营养无机盐碳源氮

2、源生长因子小贴士碳源的种类是判断微生物同化作用类型的依据，能利用无机碳源的微生物是自养型，只能利用有机碳源的微生物是异养型。4.其他条件对于不同微生物，培养基中除含有主要营养物质外，还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质及氧气的要求。微生物乳酸杆菌霉菌细菌厌氧微生物特殊条件添加维生素pH调至酸性pH调至中性或微碱性无氧归纳提炼培养基中的主要成分营养物质定义作用主要来源碳源无机碳源能提供所需碳元素的无机物构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有机碳源还是异养微生物的能源物质CO2、NaHCO3等有机碳源能提供所需碳元素的有机物糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源无机氮源能提供所需氮元素的无机物将无

3、机氮合成含氮的代谢产物N2、NH3、铵盐、硝酸盐等有机氮源能提供所需氮元素的有机物合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物尿素、牛肉膏、蛋白胨等特殊营养物质生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂无机化合物1.下列说法正确的是()A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B.培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C.除水以外的无机物只能提供无机盐D.无机氮源不可能提供能

4、量问题导析(1)液体培养基和固体培养基只是根据培养基的物理性质来分的，培养基还可以根据化学成分，用途等来划分。(2)除水以外的无机物可以提供碳源、氮源和无机盐。(3)NH3可以为进行化能合成作用的硝化细菌提供能量。解析根据培养基的物理性质，可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基，在液体培养基中加入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固体培养基；除水以外的无机物如NH4HCO3，既可以是碳源，也可以是氮源，不仅仅提供无机盐；无机氮源有时也能提供能量，如NH3可以为硝化细菌提供能量。2.不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是()A

5、.氮源物质为该微生物提供必要的氮素B.碳源物质也是该微生物的能源物质C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D.水是该微生物的营养要素之一问题导析(1)微生物的培养需要的营养物质一般包括水、无机盐、碳源、氮源。(2)CO2只能作为碳源，不能提供能量。解析对于CO2来说，它为无机物，只能做为碳源而不能作为能源物质。二无菌技术要防止外来的杂菌污染培养物，离不开无菌技术，要防止培养物污染人体和环境，也离不开无菌技术。1.目的：防止外来杂菌的污染。2.方法：消毒和灭菌。项目消毒灭菌概念使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，

6、包括芽孢和孢子常用方法煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌适用对象操作空间、操作者、一些液体接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等3.主要应用(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。小贴士(1)某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽孢。每个细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压的能

7、力。芽孢的休眠能力十分惊人，可保持几年到几十年的生活力。(2)孢子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小，通常是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能直接发育成新个体。4.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。归纳提炼 常用的消毒、灭菌手段项目方法条件作用对象消毒煮沸消毒法100 ，煮沸56 min杀死微生物细胞和一部分芽孢巴氏消毒法7075 ，煮30 min或80 ，煮15 min不耐高温的液体化学药剂消毒法70%的酒精对双手消毒50%的石炭酸、来苏水对空气消毒一定浓度的乳酸、食醋通过

8、熏蒸对空气进行消毒紫外线法紫外线照射30 min物体表面或空气中的微生物灭菌灼烧灭菌在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧对接种环、接种针或其他金属工具灭菌，也可以对试管口、瓶口灭菌干热灭菌在干热灭菌箱内，160170 条件下，加热12 h耐高温且需保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等高压蒸汽灭菌在高压蒸汽灭菌锅内，121 ，100 kPa，灭菌1530 min培养基等紫外线灭菌30 W照射30 min小型接种室、接种箱等1.防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是()A.实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒B.接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯

9、火焰的内焰部位灼烧灭菌C.在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染D.使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境问题导析操作空间需要消毒，灼烧灭菌需要用酒精灯外焰灼烧。解析对接种环等金属用具进行灼烧灭菌，应放在酒精灯火焰的充分燃烧层，即外焰处灼烧灭菌。2.巴氏消毒法常用于酒、奶等食品的消毒，该消毒法就是将液体加热到7075 、保持30 min，或加热到80 、保持15 min，能杀死一般杂菌和病原菌。与灭菌的要求相比，巴氏消毒法()A.不能杀灭芽孢等耐高温的细菌B.能杀灭芽孢等休眠状态的细菌C.能杀灭各种细菌，包括芽孢D.能杀灭各种真菌，包括孢子问题

10、导析消毒与灭菌的区别：条件：消毒用温和的物理或化学方法，灭菌用强烈的理化因素；杀死微生物：消毒杀死部分微生物，不包括芽孢和孢子，灭菌杀死所有微生物，包括芽孢和孢子。解析由于酒、奶等食品中的某些成分在高温下易被破坏，不宜采取高温灭菌法，虽然巴氏消毒法不能杀灭芽孢等耐高温细菌，但由于奶、酒等的污染并不严重，巴氏消毒法还是能达到消毒要求的。1.不同培养基的具体配方不同，但一般都含()A.碳源、磷酸盐和维生素 B.氮源和维生素C.水、碳源、氮源和无机盐 D.碳元素、氧元素、氢元素、氮元素2.能作为自养微生物的碳源的是()A.糖类 B.石油 C.二氧化碳 D.花生粉饼解析自养微生物能利用无机碳源。3.在

11、微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时又能抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做()A.鉴别培养基 B.加富培养基 C.选择培养基 D.基础培养基解析选择培养基可选择目标微生物，同时抑制或杀死其他微生物。4.不同的微生物对营养物质的需要各不相同，但一般都需要水、碳源、氮源和无机盐。下列有关微生物所需营养物质的描述，正确的是()A.氮源物质只能为该微生物提供必要的氮元素B.有些碳源也可以给微生物的生长提供能源C.无机盐是微生物不可缺少的营养物质，所以无机盐越多越好D.固体培养基中不含水分解析含氮的有机物既可给微生物提供氮元素，也可给微生物提供能源。含碳的有机物既可给微生物提供碳元素，也

12、可给微生物提供能源。微生物生长需要无机盐，但不是越多越好，过多会导致培养基渗透压过高，使微生物因失水过多而不能生存。固体培养基中也含有水分，因为含有凝固剂琼脂，所以呈固态。5.下列实验材料和用具，适合使用消毒方法的是 ，适合使用灭菌方法的是 。培养基外植体操作者双手锥形瓶接种环牛奶工作台培养皿基础过关知识点一培养基1.下列说法正确的是()A.为微生物的生长繁殖提供营养基质的是固体培养基B.培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的菌落解析培养基是微生物生长繁殖的营养基质，根据培养基的物理性质不同，可将培养

13、基分成固体培养基、液体培养基和半固体培养基；液体培养基不加凝固剂。2.下列关于微生物培养基的营养构成，说法正确的是()A.同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B.凡是碳源都能提供能量C.除水以外的无机物仅提供无机盐 D.无机氮源也可能提供能量解析对一些微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。CO2和N2是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。3.自养微生物与异养微生物的培养基的主要差别是()A.碳源 B.氮源 C.无机盐 D.生长因子解析自养微生物能够利用二氧化碳

14、和水合成有机物，不利用现成的含碳有机物；而异养微生物只能利用现成的含碳有机物，所以它们的主要区别是碳源不同。4.牛肉膏蛋白胨培养基中加入了琼脂这一理想的凝固剂，下列说法不正确的是()A.不被所培养的微生物分解利用，对所培养的微生物无毒害作用B.在微生物生长温度范围内保持固体状态C.琼脂凝固点低，利于微生物的生长D.琼脂在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强解析在液体培养基中加入凝固剂如琼脂后，制成琼脂固体培养基，它是实验室中最常用的培养基之一。固体培养基中可形成肉眼可见的单个细胞繁殖而来的子细胞群体，即菌落，用于微生物的分离、计数和菌种鉴定等。琼脂作为一种理想的凝固剂，是由其性质决定的，琼

15、脂不会被微生物利用且对微生物无毒害作用，在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强。琼脂在98 以上可溶解于水，在45 以下凝固，所以在微生物生长温度范围内保持固体状态。知识点二无菌技术5.以下部位不含有微生物的是()A.洗干净的脸上 B.洗完澡后的皮肤C.刷完牙后的口腔 D.灼烧之后的接种环解析用清水洗脸、洗澡、刷牙只是起清洁作用，达不到灭菌效果，只有灼烧过的接种环才是真正无菌的。6.在微生物的实验室培养中，下列各项操作不需要在无菌条件下进行的是()A.配制培养基 B.倒平板C.接种 D.培养解析配制培养基时不需要无菌操作，因为配制好的培养基需要进行高压蒸汽灭菌。7.关于灭菌和消毒的不正确理

16、解是()A.灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B.消毒和灭菌的实质是相同的C.接种环用灼烧灭菌法D.常用的灭菌方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法解析灭菌与消毒是两个概念。灭菌的原理是蛋白质凝固变性，含水分较多者，其凝固所需温度较低。灭菌时要根据不同的材料选用不同的灭菌方法，如接种环用灼烧灭菌法，培养基用高压蒸汽灭菌法，还有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法等。消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。8.细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀死哪些部位的杂菌()A.接种环、手、

17、培养基 B.高压锅、手、接种环C.培养基、手、接种环 D.接种环、手、高压锅解析高压蒸汽灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌；用酒精擦拭双手是消毒的一种方法；火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环的灭菌。能力提升9.下列选项中，不是使用选择培养基培养微生物的目的的是()A.除去其他微生物B.使需要的微生物大量繁殖C.通过表现特殊性状，与其他微生物相区别D.可以增加要培养的微生物的浓度10.除了高温加热以外，其他灭菌方法还有()A.紫外线照射 B.真空包装 C.用保鲜膜密闭 D.添加防腐剂解析灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。本

18、题中真空包装、添加防腐剂、用保鲜膜密闭都起到了抑菌作用，紫外线照射使细菌的蛋白质变性，核酸受破坏，是灭菌方法。11.下列关于四种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的描述，其中正确的一组是()项目硝化细菌乳酸菌酵母菌衣藻能源氧化NH3分解乳酸固定N2利用光能碳源CO2糖类糖类CO2氮源NH3N2N2NO代谢类型自养需氧型异养需氧型异养需氧型自养需氧型A.硝化细菌、乳酸菌 B.乳酸菌、酵母菌C.酵母菌、衣藻 D.硝化细菌、衣藻解析本题考查的知识有：各种微生物的代谢类型，微生物所需的能源、碳源和氮源的不同。解答此题时应明确：硝化细菌、乳酸菌属于细菌，酵母菌属于真菌，衣藻属于真核生物。微生物所需的能源、

19、碳源、氮源因其同化作用类型的不同而不同。12.金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，下述实验结束后的做法错误的是()A.对接种环进行灼烧处理B.带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉C.带菌培养基必须经加热后才能倒掉D.接种后双手必须用肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭解析金黄色葡萄球菌有很强的致病力，所以在操作时一定要做到安全防范，接种后双手用肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭，以起到杀菌的作用；对接种环进行灼烧也可以杀灭细菌，防止污染环境；高压蒸汽灭菌也可杀死培养基中的金黄色葡萄球菌；如果只对带菌培养基进行加热，杀不尽其中的致病菌，因为此菌的耐高温能力很强，最终会污染环境。13.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。(1)培养细菌用的培养基与培养皿；(2)玻棒、试管、烧瓶和吸管；(3)实验操作者的双手。如果需要，请选择合适的方法：(1) ；(2) ；(3) 。答案(1)需要灭菌；用高压蒸汽灭菌锅灭菌(2)需要灭菌；干热灭菌箱灭菌(3)需要消毒；用75%酒精擦拭双手14.为了检测饮用水中是否含有某种细菌，配制的培养基的配方如下：蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水10 g5 g5 g2