简明生化分析临床知识

1、简明生化分析临床知识目录11.常用临床生化项目的分类：21.1.按化学性质分类：21.1.1.酶类：21.1.2.底物/代谢产物类：21.1.3.无机离子类：21.1.4.特种蛋白类：21.2.按临床应用分类22.常用临床生化项目的主要测定原理和临床意义：23.试剂：73.1.临床生化检测试剂的发展历史73.2.双试剂的优点74.全自动生化分析仪采取二步法测定的意义84.1.双试剂与单试剂的区别84.2.测定时采用一步法还是两步法94.2.1.试剂本身的干扰94.2.2.样品干扰91. 常用临床生化项目的分类：1.1. 按化学性质分类：1.1.1. 酶类：包括ALT（谷丙转氨酶），AST（谷草

2、转氨酶），ALP（碱性磷酸酶），ACP（酸性磷酸酶），r-GT（谷氨酰转移酶），-HBDH（羟丁酸酶），LDH（乳酸脱氢酶），CK（肌酸激酶），CK-MB（肌酸激酶同功酶）,-AMY（淀粉酶），MSO（），ADA（），ChE（胆碱脂酶）等。1.1.2. 底物/代谢产物类：包括TG（甘油三脂），TC（总胆固醇），HDL-C（高密度脂蛋白胆固醇），LDL-C（低密度脂蛋白胆固醇），UA（尿酸），UREA（尿素氮），Cr（肌酐），Glu（葡萄糖），TP（总蛋白），Alb（白蛋白），T-Bil（总胆红素），D-Bil（直接胆红素），TBA（总胆汁酸），NH4+（血氨）,CO2（二氧化碳）等。1.1.3

3、. 无机离子类：包括Ca（钙），P（磷），Mg（镁），Cl（氯）等。1.1.4. 特种蛋白类： (1)脂蛋白类：包括apoA1（载脂蛋白A1），apoB（载脂蛋白B），Lp(a) （脂蛋白a）等。(2)补体类：包括C3，C4，PFB(B因子)等。(3)免疫球蛋白类：包括IgG，IgA，IgM，Kappa链，Lambda链等。(4)急性时相反应蛋白：包括CRP (C反应蛋白)，AAG (a1酸性糖蛋白)，CER(铜蓝蛋白)等。(5)其它：包括AAT (a1抗胰蛋白酶)，AMG (a2巨球蛋白)，TRF(转铁蛋白)，HPT(触珠蛋白)，AT-III(抗凝血酶III)，PAB(前白蛋白)，B2M(2

4、微球蛋白)，MA(微白蛋白)，A1M(a1微球蛋白)，ASO(抗链球菌溶血素O)等。1.2. 按临床应用分类无机离子：包括Ca，P，Mg，Cl等。肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil，D-Bil，TBA，TP，Alb等。肾功能：UA，UREA，Cr等。心肌酶谱：CK，CK-MB，LDH，-HBDH，AST，MSO等。糖尿病：GLU等。前列腺疾病：ACP，p-ACP等。胰腺炎：-AMY。血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp(a)。痛风：UA中毒：ChE免疫性疾病：C3，C4，PFB(B因子)， IgG，IgA，IgM，Kappa链，La

5、mbda链。急性炎症反应：CRP (C反应蛋白)，AAG (a1酸性糖蛋白)，CER(铜蓝蛋白)，ASO(抗链球菌溶血素O)。2. 常用临床生化项目的主要测定原理和临床意义：项目测定原理临床意义ALTNADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降速率与ALT活性成正比(动力学法)。ALT主要存在于肝细胞中，心肌细胞次之，活性升高表示有肝细胞损伤，也可见于心肌及骨骼肌损伤。ASTNADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降速率与AST活性成正比(动力学法)。AST主要存在于心肌细胞中，肝细胞次之，活性升高表示有心肌损伤，也可见于肝细胞及骨骼肌损伤。ALP对硝基苯酚的生成，引起405nm吸光

6、度的上升，上升速率与ALP活性成正比(动力学法)。ALP主要存在于骨、肝、肾和肠，活性升高见于肝胆及骨骼疾病等。r-GT5-氨基-2-硝基苯甲酸盐的生成，引起405nm吸光度的上升，上升速率与r-GT活性成正比(动力学法)。活性升高与肝胆疾病、心肌梗塞、脑损伤、慢性酒精中毒、苯妥英钠治疗有关。-HBDHNADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降速率与-HBDH活性成正比(动力学法)。活性升高与急性心肌梗塞有关。LDHNADH的生成，引起340nm吸光度的上升，上升速率与LDH活性成正比(动力学法)。活性升高与心肌梗塞有关,也可见于肝脏疾病、未治愈的恶性贫血、巨幼红细胞贫血、肾脏疾病、恶性

7、肿瘤等。CKNADPH的生成，引起340nm吸光度的上升，上升速率与CK活性成正比(动力学法)。活性升高与心肌梗塞有关,也可见于肌营养不良、甲状腺机能减退、肺梗塞、急性脑血管疾病等。CK-MB先用CK-M的抗体抑制CK-M的活性，其余同CK的测定活性升高主要见于心肌梗塞。-AMY1用生色基团对-硝基酚修饰-麦芽七糖苷(PNP-G7)作为底物，经-淀粉酶水解成小分子的寡糖苷，再经辅助酶-葡萄糖苷酶进一步水解释放出生色基团PNP，导致405nm吸光度增加，增加速率与-AMY活性成正比， ROCHE公司等采用此法。2用生色基团对-硝基酚修饰麦芽五糖苷(PNP-G5)作为底物，其余同1。日本第一化学采

8、用此法，IFCC推荐。3采用2-氯-4-硝基苯酚-麦芽三糖(CNP-G3)做底物，不需要用辅助酶，直接由淀粉水解产生CNP，导致405nm吸光度增加，增加速率与-AMY活性成正比，科华采用此法。活性升高见于急性胰腺炎、胰腺管道阻塞、流行性腮腺炎、细菌性腮腺炎等。TG醌亚胺的生成，导致550nm吸光度的增加，增加的程度与TG的含量成正比(终点法)。升高见于肾病综合症、动脉粥样硬化、甲减、糖尿病、肝病等，降低见于营养不良、脂蛋白缺乏、甲亢、恶液质等。TC醌亚胺的生成，导致550nm吸光度的增加，增加的程度与TC的含量成正比(终点法)。升高见于动脉粥样硬化、肾病、糖尿病、粘液水肿等，降低见于甲亢、贫

9、血、吸收障碍、恶液质等。HDL-C沉淀法：先用磷钨酸钠-镁沉淀LDL-C和VLDL-C，再按TC方法测定。均相法：先用多聚阴离子化合物选择性遮蔽LDL-C和VLDL-C，再按TC方法测定。含量越低，发生冠心病的危险越大。LDL-C沉淀法：先用PVS沉淀LDL-C，再按TC方法测定，TC值减去该测定值即为LDL-C。均相法：先用多聚阴离子化合物选择性遮蔽HDL-C和VLDL-C，再按TC方法测定。含量越高，发生冠心病的危险越大。UA醌亚胺的生成，导致550nm吸光度的增加，增加的程度与UA的含量成正比(终点法)。升高与痛风、白血病、妊毒血症、肾病有关。UREA二乙酰肟法：二乙酰肟与强酸作用生成二

10、乙酰，二乙酰与UREA在酸性条件下，缩合成红色的二嗪衍生物，导致520nm吸光度的增加，增加的程度与UAEA的含量成正比(终点法)。紫外-谷氨酸脱氢酶法：NADH的减少，引起340nm吸光度的下降，单位时间内下降程度与UREA浓度成正比(固定时间法、两点速率法)。升高主要见于肾脏疾病，也可见于脱水、糖尿病昏迷、肾上腺危相、胃肠道出血、循环虚脱，下降见于严重的肝脏疾病。Cr碱性苦味酸法：肌酐-苦味酸复合物的生成，导致510nm吸光度的增加，单位时间内增加量与Cr浓度成正比(固定时间法、两点速率法)。肌氨酸氧化酶法：醌亚胺的生成，导致550nm吸光度的增加，增加的程度与Cr的含量成正比(终点法)。

11、升高见于肾功能的损伤。Glu氧化酶法：醌亚胺的生成，导致500nm吸光度的增加，增加的程度与Glu的含量成正比(终点法)。己糖激酶法：NADH的生成，引起340nm吸光度的增加，增加程度与Glu浓度成正比(终点法)。升高主要见于糖尿病，也可见于甲亢、垂体或肾上腺机能亢进；降低主要见于胰岛素过量、甲减、垂体机能减退、肾上腺机能减退、葡萄糖吸收障碍。TP紫红色络合物的生成，导致540nm吸光度的增加，增加的程度与TP的含量成正比(终点法)。升高见于各种原因失水、一种或多种球蛋白分泌增多；降低见于营养不良。Alb白蛋白溴甲酚绿复合物的生成，导致630nm吸光度的增加，增加的程度与Alb的含量成正比(

12、终点法)。升高见于各种原因失水；降低见于肝脏疾病、肾病综合症、营养不良、蛋白丢失。T-Bil重氮偶合法、比色法、终点法。冻干单剂型偶氮胆红素的生成，导致545nm吸光度的增加，增加的程度与T-Bil的含量成正比(终点法)。胆红素         钒酸盐     > 胆绿素pH3.0表面活性剂钒酸盐氧化法，比色法，终点法，液体双剂型胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与总胆红素含量成正比。升高见于各类肝脏疾病，也可见于溶血性疾病。D-Bil重氮偶合

13、法、比色法、终点法，冻干单剂型偶氮胆红素的生成，导致545nm吸光度的增加，增加的程度与D-Bil的含量成正比(终点法)。胆红素         钒酸盐     > 胆绿素pH3.0表面活性剂钒酸盐氧化法，比色法，终点法，液体双剂型胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与直接胆红素浓度成正比。升高见于各类肝脏疾病和胆导阻塞。NH4+NADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降程度与NH4+浓度成正比(终点法)。升高见于肝昏迷、肝性脑病。CO2N

14、ADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降程度与CO2浓度成正比(终点法)。异常见于酸碱平衡失调。iP 络合物的生成，引起340nm吸光度的上升，上升程度与iP浓度成正比(终点法)。升高见于慢性肾炎、甲状旁腺功能减退、VitD过多；降低见于佝偻病、骨软化等。Ca邻-甲酚肽络合酮(CPC)法有色络合物的生成，引起575nm吸光度的上升，上升程度与Ca浓度成正比(终点法)，长征公司采用此法。甲基麝香草酚兰(MTB)法有色络合物的生成，引起612nm吸光度的上升，上升程度与Ca浓度成正比(终点法)，科华公司采用此法。升高见于甲状旁腺功能亢进、肿瘤骨转移、VitD过多；降低见于甲状旁腺功能减退、佝

15、偻病、肾病等。Mg有色络合物的生成，引起582nm吸光度的上升，上升程度与Mg浓度成正比(终点法)。升高见于尿毒症；降低见于吸收障碍、糖尿病性昏迷、急慢性酒精中毒、慢性肾病等。Cl红色络合物的生成，引起480nm吸光度的上升，上升程度与Cl浓度成正比(终点法)。升高见于柯兴综合症、酸中毒、尿毒症等；降低见于阿狄森氏病、碱中毒、腹泻、尿崩等。ApoA1/ apoB抗原抗体复合物的形成，导致340nm透射浊度的增加，增加的程度与apoA1/apoB的浓度成正比(终点法)。ApoA1降低和apoB升高见于未控制的糖尿病、肾病综合症、肝功能低下；ApoA1和apoB均降低见于长期血液透析；ApoA1与

16、 apoB的比值可预测心血管疾病危险性的预测，比值高，危险性低。Lp(a)抗原抗体复合物的形成，导致340nm透射浊度的增加，增加的程度与Lp(a)的浓度成正比(终点法)。高浓度的Lp(a)是动脉粥样硬化的独立危险因子。3. 试剂：3.1. 临床生化检测试剂的发展历史第一阶段：各医院实验室通常自行配制简单试剂，能开展的生化检测的方法及检测项目十分有限，无统一标准，准确性极差第二阶段：使用时要用多种试剂配制在一起，稳定性很差，多数在冰箱内只能保存数天，并且操作繁琐费时，容易加错试剂第三阶段：冻干试剂、干粉试剂。冻干试剂是先将各种化学试剂溶解混合后，分装成不同试剂的瓶内，再经冻干处理。冻干试剂中残

17、留的含水量不易精确控制，造成瓶间差较大。干粉试剂是用将各种干燥的化学试剂直接混合加工而成，各瓶内试剂中所含水量均一。冻干和干粉试剂在用前要复溶，复溶时对水质及其加入量要求很高，复溶后保存期短，稳定性差，常常造成浪费，同时不能抗干扰。第四阶段：液体双生化试剂。准确、稳定性好；抗干扰能力强，无需复溶，使用方便，不易浪费，使用前无需准备，可直接上机使用，并适用于手工法。3.2. 双试剂的优点双试剂是指将反应体系的全部试剂分成两大组分，即第一试剂先与被检样本中的干扰物质反应，使其被扣除，然后加入第二试剂，样本中的被检物质与反应体系中的试剂起反应，再进行测定。3.2.1. 抗干扰反应能力强在临床生化测定

18、过程中，血标本本身成分十分复杂，除了含有待测物质外，还含有各种酶、有机物、无机盐等物质，这些物质都会干扰或参与测试反应，引起非特异性干扰反应。为了克服这种干扰反应，将试剂盒分为两组，在测定过程中，试剂1与标本中的干扰物反应，使其消耗，再用试剂2启动真正的测试反应进行测定。3.2.2. 增强了工作试剂的稳定性许多酶法测定试剂盒为冷冻干燥试剂，在4保存一般稳定期在1年以上。但复溶后的工作试剂的稳定性差，如ALT测定工作试剂4只能保存一周，AST测定工作试剂4只可保存四天，而液体双试剂则使稳定性大大延长，如ALT、AST测定的液体双试剂在4可稳定一年。液体酶法试剂从配制上解决了这一矛盾：a用户可根据

19、每次标本量按一定比例配制适量工作液，当天配制当天用完这样便可减少试剂损失b如果用户使用的自动生化分析仪有双试剂测定功能，那么，就不必把双试剂混合成工作试剂进行测定，试剂的有效期一年便是工作液的有效期。对于干粉、片剂型等需复溶的生化试剂，水质的好坏直接影响了复溶后工作液的稳定性和测定重复性。目前除了一些三级医院有自制的试剂级的蒸馏水外，其他医院很难获得符合试剂级要求的水，这就对干粉、片剂试剂的实际使用造成了一定的影响。目前临床化学检测有许多项目已经开始用酶法进行分析测定，而试剂中许多酶在水溶液中是比较“脆弱”的，许多杂质都会影响酶活力。如：a、 水中F-会引起某些酶失活b、 水中的重金属离子会影响酶活力c、 水中某些微生物会引起酶失活d、 有些杂质会直接影响测定结果，如水中的NH4会影响尿素氮的测定。3.2.3. 提高了测定结果的重复性试剂组分的高度均一性，提高了测定结果的重复性，避免了瓶间差，试剂中每一组分均一性是影响测定重复性的一个重要因素。4. 全自动生化分析仪采取二步法测定的意义4.1. 双试剂与单