微生物检测生化试验

1、微生物检测生化试验分析中心微生物常见生化试验生化试验三糖铁（TSI）琼脂糖（醇、苷）发酵试验氨基酸脱羧酶试验MR-VP试验吲哚试验硝酸盐还原试验 各种细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力不同，其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来区别和鉴定细菌的种类。利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生物化学试验或称生化反应。 生化试验营养物质分解糖的类型硫化氢指示剂酸碱指示剂还原剂三糖铁TSI细菌只分解葡萄糖产酸pH下降斜面和底层全部变黄TSI细菌只分解葡萄糖产酸pH下降斜面和底层全部变黄TSI细菌只分解葡萄糖产酸pH下降斜面和底层全部变黄葡萄糖量少产酸量少暴露于空气中分

2、解细菌分解蛋白胨生成碱性物质中和酸pH上升斜面变红底层缺氧酸不分解保持黄色CO2OH-TSI细菌只分解葡萄糖产酸pH下降斜面和底层全部变黄葡萄糖量少产酸量少暴露于空气中分解细菌分解蛋白胨生成碱性物质中和酸pH上升斜面变红底层缺氧酸不分解保持黄色细菌产生H2S与铁盐作用生成黑色硫化铁TSI细菌只分解葡萄糖产酸pH下降斜面和底层全部变黄葡萄糖量少产酸量少暴露于空气中分解细菌分解蛋白胨生成碱性物质中和酸pH上升斜面变红底层缺氧酸不分解保持黄色细菌产生H2S与铁盐作用生成黑色硫化铁TSI细菌能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖产酸pH下降斜面和底层全部变黄但产酸量大扩散到表面斜面、底层均为黄色产气的菌有气泡TSI

3、细菌能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖产酸pH下降斜面和底层全部变黄但产酸量大扩散到表面斜面、底层均为黄色产气的菌有气泡产气量大的会有断层TSI细菌能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖产酸pH下降斜面和底层全部变黄但产酸量大扩散到表面斜面、底层均为黄色产气的菌有气泡产气量大的会有断层TSI细菌能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖产酸pH下降斜面和底层全部变黄但产酸量大扩散到表面斜面、底层均为黄色产气的菌有气泡产气量大的会有断层TSI分解糖的类型产气产H2S气体糖（醇、苷）发酵不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物亦可不同。一般在基础培养

4、基中加入0.5-1.0特定糖（醇、苷）类及酸碱指示剂（溴麝香草酚蓝）。通过观察细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解的能力来鉴定细菌的种类。所以糖（醇、苷）发酵是鉴定细菌生化反应试验中最主要的试验。 液体半固体接种培养液体半固体观察结果有的细菌可将七叶苷分解成七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁的二价铁离子反应，生成黑色的化合物，使培养基呈黑色。七叶苷水解试验氨基酸脱羧酶试验细菌利用培养基中的葡萄糖为氨基酸脱羧制造酸性环境。脱羧酶是一种诱导酶，在没有相应氨基酸的培养基中细菌不产生该酶。细菌产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳，由于胺的生成使培养基变为碱性。在这个过程中溴甲酚紫作为酸碱指示剂颜色

5、先由紫色变为黄色，又在脱羧后变回紫色，而不含氨基酸脱羧酶的保持黄色。 阳性：试验管-紫色，对照管-黄色阴性：试验管-黄色，对照管-黄色MR-VP试验MR（甲基红）试验：检测细菌发酵葡萄糖产酸的能力。葡萄糖丙酮酸甲酸、乙酸、乳酸pH下降低于4.4甲基红为红色葡萄糖丙酮酸脱羧成醇pH维持在6.2甲基红为黄色阴性 阳性V-P试验：检测细菌利用葡萄糖产生乙酰甲基甲醇的能力。葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇脱羧碱性条件（乙液）氧气二乙酰+蛋白胨中的胍基红色络合物加速反应-萘酚（甲液）阴性 阳性吲哚试验某些细菌能产生色氨酸酶，分解培养基中色氨酸，产生吲哚（靛基质），于吲哚试剂中的对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰红色物质。阴性 阳性硝酸盐还原试验某些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原成亚硝酸盐、氨或氮气。A液（对氨基苯磺酸冰醋酸溶液）B液（-萘胺乙醇溶液）硝酸盐亚硝酸盐A液冰醋酸亚硝酸A液对氨基苯磺酸重氮基苯磺酸B液-萘胺N-萘胺偶苯磺酸（红色） 阳性 阴性 空白如果欲检查培养基中硝酸盐是否被分解，可取锌粉少许加入培养基内