2015年微生物检验初级师讲义

1、临床医学检验辅导微生物检验第十四章 肠杆菌科及检验 考点概述概念；命名与分类原则；共同特点；自然与内的分布；微生物学检查方法；临床意义。埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、生物学性状；微生物学检验；临床意义。菌属及其他肠杆菌科细菌。【内容讲解】一、概述（共性）肠杆菌科是由多个菌属组成，G-杆菌，生物学性状相似。大多数肠道杆菌属于正常菌群。当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时成为条件致病菌而引起疾病。 部分为致病性细菌。（一）分类肠杆菌科细菌的种类繁多。主要根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。根据系统细菌学手册（1984 年）将肠杆菌科的细菌分为 20 个属即埃希菌属、

2、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、菌属、肠杆菌属、菌属等。菌属、哈夫菌属、菌属、菌属、变形杆菌属、菌属、（二）生物学特性1.形态与染色G-，杆菌，大小为（1.06.0）m×（0.31.0）m。多数有周鞭毛（除志贺菌属、膜。2.培养需氧或兼性厌氧；营养要求不高；菌属、菌和 EIEC），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚普皿和麦培养基：中等大小、表面光滑的菌落；液体培养基：混浊生长。3. 生化反应发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形杆菌）。触酶阳性；氧化酶硝酸盐。4. 抗原构造；硝酸盐还原为亚表面抗原（如 Vi 抗原、K 抗原）：包绕在 O 抗原外的不耐

3、热的多糖抗原，可阻断 O 抗原与相应抗体之间的反应，加热处理能破坏其阻断作用。5. 变异菌落 SR 变异鞭毛 HO 变异耐药性变异生化反应性质的改变6. 抵抗力不强。加热 60，30 分钟即被杀死。不耐干燥，对一般化学剂敏感。对低温有耐受力，能耐胆盐。第1页临床医学检验辅导微生物检验7.肠杆菌科的初步分类（三）致病性1.致病性肠道杆菌：以肠内泻及肠热症等。为主，腹泻为共显症状，引起急慢性肠道、旅游者腹2.条件致病菌：为医院主要病原菌，出现移位。大肠埃希菌、变形杆菌及菌等条件致病菌可引起泌尿生殖道、伤口等部位的（四）微生物检验1.分离培养。2.鉴定（1）初步鉴定：确定肠杆菌科的细菌，应采用葡萄糖

4、氧化-发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌加以鉴别；肠杆菌科细菌的分群，多采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，将肠杆菌科的细菌分为三个类群；选择生化反应进行属种鉴别。KIA 和 MIU 将细菌初步（2）最后鉴定：。根据生化反应的结果初步、种，再用诊断血清做凝集反应才能作出最后。二、埃希菌属5 个种：大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、临床最常见的是大肠埃希菌。（一）生物学性状1.形态与染色菌、菌和伤口埃希菌。G-，短杆菌，（1.03.0）m× （0.40.7）m。多数有周鞭毛，有菌毛，有荚膜或微荚膜。2.培养特性兼性厌氧菌；营养要求不高。普通营养肉汤：浑浊生长。第2页临床医学检验辅导微生物检验

5、普通营养琼脂：圆形，凸起，边缘整齐，灰白色的 S 型菌落，直径 23mm。血琼脂平板：少数菌株产生-溶血环。伊红亚甲蓝琼脂：菌落呈蓝紫色并有金属光泽（发酵乳糖）。麦和 SS 琼脂：粉红色菌落。3. 生化反应发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气，分解蔗糖因菌株而异，尿素酶试验吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMViC 试验）为+ + - -。克氏双糖铁琼脂（KIA）：斜面和底层均产酸产气，H2S（-）。动力-吲哚-尿素（MIU）培养基为+ + -。4. 抗原结构。菌体抗原（O）、表面抗原（K）和鞭毛抗原（H）三种现已知有 171 种O 抗原，100 种 K 抗原和 56 种H 抗原。一个

6、菌株的抗原类型由特殊的 O、K 和 H 抗原的代码表示，其血清型别的方式是按 O：K：H 排列，例如 O111：K58：H2。（二）致病性致病物质：主要是侵袭力、内毒素、肠毒素等。所致疾病：1. 肠道外2. 肠道以泌尿系统常见，还有菌血症，胆囊炎，腹腔脓肿。（致病性大肠埃希菌）肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）：引起霍乱样肠毒素腹泻（水泻）。肠致病型大肠埃希菌（EPEC）：主要引起婴儿腹泻。肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）：可侵入结肠黏膜上皮，引起痢疾样腹泻（脓血便）。肠型大肠埃希菌（EHEC）：又称产志贺样毒素（VT）大肠埃希菌（SLTEC 或 UTEC），其中 O157：H7 可引起性大肠炎和溶

7、血性尿毒综合征（HUS）。临床特征为严重的腹痛、痉挛，反复性腹泻，伴发热、呕吐等。严重者可发展为急性肾衰竭。肠黏附型大肠埃希菌（EAggEC）：新近能引起腹泻。3.CDC 将大肠埃希菌 O157：H7 列为常规检测项目在许多地区，O157；H7 占肠道分离病原菌的第二或第三位，是从血便中分离到的最常见的病原菌。6、7、8 三O157：H7的发生率最高。O157 是 4 岁以下儿童急性肾衰的主要病原菌。（三）微生物检验1.标本肠道可粪便；肠道外可根据临床情况中段尿液、血液、脓汁、胆汁、脑脊液、痰、液等。第3页临床医学检验辅导微生物检验2.检验方法及鉴定最后鉴定：补充系列生化试验致病性大肠埃希菌无

8、动力的不发酵乳糖株，应与志贺菌相鉴别鉴别试验：醋酸钠、葡萄糖铵、粘质酸盐产酸试验。大肠埃希菌均为阳性，而志贺菌均为血清学试验。三、志贺菌属人类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称痢疾杆菌。根据生化反应与血清学试验该属细菌分为痢疾、和宋内志贺菌四群。我国以和宋内志贺菌引起的菌痢最为常见。（一）生物学特性1.形态与染色G-，短小杆菌，（23）m×（0.50.7）m，无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛。2.培养特性需氧或兼性厌氧；液体培养基：呈混浊生长；普通琼脂平板和 SS 培养基：中等大小、半透明的光滑型菌落（宋内志贺菌可形成扁平、粗糙的菌落）。3.生化反应氧化酶试验，动力，不产生赖氨酸脱羧酶；K

9、IA：K/A，H2S（-）； IMViC：-、+、-、 -。志贺菌属的细菌分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖（宋内志贺菌可迟缓分解乳糖），吲哚试验，H2S，MR 试验阳性，VP 试验，不产生赖氨酸脱羧酶，不能利用柠檬酸盐，氧化酶试验，动力。4.抗原结构只有O 抗原而无鞭毛抗原，个别菌型及新分离菌株有 K 抗原。O 抗原分群特异性抗原和型特异性抗原两类。根据抗原构造可将志贺菌分为四个血清0血清型（包括亚型）。K 抗原存在时能阻断 O 抗第4页临床医学检验辅导微生物检验原与相应抗血清的凝集作用。加热 100、60 分钟可消除 K 抗原对 O 抗原的阻断作用，在一定条件下可产生 S-R 变异及耐药性变

10、异。（二）临床意义致病物质：侵袭力：菌毛粘附于肠粘膜上皮细胞，诱导细胞内吞。内毒素：破坏肠粘膜；肠壁通透性；肠壁植物神经腹痛，腹泻，里急后重，粘液脓血便。外毒素（志贺毒素，ST）：肠毒素活性；细胞毒活性；神经毒性。所致疾病：细菌性痢疾，简称菌痢。1.急性菌痢。2.性菌痢。3.慢性菌痢。传染源为和带菌者，经粪口。（三）微生物检验1. 标本尽可能在发病早期及治疗前2. 检验方法及鉴定新鲜粪便，选择脓血便或便，必要时可用肛拭子。鉴别：第5页临床医学检验辅导微生物检验（四）防治原则人工主动免疫用于预防目前尚不理想。预防的主要措施是防止进食被污染的食品、饮料及水，及早发现及早积极治疗携带者。治疗细菌性痢

11、疾一般首选氟喹诺酮类抗生素。（五）临床意义致病因素为侵袭力、内毒素及外毒素（志贺菌 A 群型和型产生志贺毒素，具有细胞毒、肠毒素、神经毒）。可引起人类细菌性痢疾，其中可分急性、慢性两种，小儿易引起急性性痢疾。慢性菌痢可人-人，污染水和可引起暴发流行。四、沙门菌属（一）生物学性状1. 形态与染色G-，直杆菌，（0.71.5）m×（2.05.0）m，无芽胞，无荚膜，周鞭毛（除鸡沙门菌），多数有菌毛。2. 培养特性营养要求不高；液体培养基：均匀混浊生长；SS 琼脂和麦成黑色中心菌落。3.生化反应琼脂培养基：约 24mm 的透明或半透明菌落，对胆盐耐受。产 H2S 者在 SS 琼脂上形不能发

12、酵乳糖（除亚利桑那菌），不产生靛基质，不分解尿素，甲基红反应阳性，V-P 试验数菌株产生 H2S，发酵葡萄糖产酸产气（伤寒沙门菌产酸不产气）。4.抗原结构。大多O 抗原：有 58 种，以数字依次标记。H 抗原：H 抗原是定型的依据。H 抗原有两相，第一为共同抗原，用 1、2、3表示。表面抗原：已证实沙门菌属有 Vi、M 和 5 抗原三种。5.变异性SR 变异HO 变异特异性抗原，用 a、b、c表示；第二相相位变异：具有双相 H 抗原（第H 抗原的单相菌，称相位变异。VW 变异：失去全部 Vi 抗原的变异。特异相，第非特异相）的沙门菌变成只有其中某一相第6页动力乳糖靛基质赖氨酸酸、醋酸盐、枸橼酸

13、盐志贺菌-+大肠埃希菌+-动力氧化酶试验志贺菌-类志贺邻单胞菌+动力硫化氢A-F O 诊断血清志贺菌-伤寒沙门菌+临床医学检验辅导微生物检验（二）致病性致病因素：侵袭力、内毒素和肠毒素。所致疾病：1.肠热症 即伤寒与副伤寒病。由伤寒与副伤寒沙门菌所引起的慢性发热症状。为法定传染病之一。2.3. 慢性肠炎4. 败血症5.沙门菌的局部如颈部、腰部等。（三）微生物检验1.标本根据不同疾病采取不同的标本进行分离与培养。肠热症的第一、二周采血液，第二、三周采粪便与尿液。整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高。与粪便。第7页临床医学检验辅导微生物检验2.检查方法及鉴定最后鉴定：沙门菌血清学鉴定主要借助于沙门菌

14、O 抗原多价血清与 O、H、Vi 抗原的单价因子血清。（三）微生物检验2.检查方法及鉴定血清学诊断肥达试验用已知的伤寒沙门菌 O、H 抗原，副伤寒甲、乙 H 抗原稀释后与被检血清作定量凝集试验，以检测患者血清中抗体的含量，来（四）防治原则机体是否受沙门菌而导致肠热症并判别沙门菌的种类。预防沙门菌属细菌主要措施：加强饮食卫生，防止污染食品及水源经口苗。临床治疗：，携带者的积极治疗，皮下注射死菌苗或口服减毒活菌可选择的抗生素有氯霉素、氟喹诺酮类、氨苄西林、复方磺胺甲恶唑、三代头孢等。五、变形杆菌属、菌属及菌属这三个属的细菌为肠道寄居的正常菌群，在一定条件下能引起各种致病菌。（一）生物学特性1. 形

15、态与染色G-，杆菌，两端钝圆，有明显的多形性，呈球状或丝状；周身鞭毛（ 培养条件下不形成鞭毛），无芽胞，无荚膜。2. 培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高，生长温度 1043。，也是医源染的重要条件菌属的部分菌株在 30以上营养琼脂和血琼脂平板：普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌株呈迁徙扩散生长现象。产黏变形杆菌具有产生状薄膜层的能力及溶血性质。菌和菌无迁徙生长现象。含有胆盐的培养基：菌落呈扁平、圆形、半透明。含有铅离子的培养基：产硫化氢菌株菌落中心呈黑色。SS 培养基：与沙门菌、志贺菌相似的菌落特征。液体培养基：迅速生长，早期培养物呈混浊，有部分沉淀。3.生化反应 三属菌共同特点是氧化酶属

16、间鉴别：，苯丙氨酸脱氨酶阳性的革兰杆菌。第8页临床医学检验辅导微生物检验变形杆菌属的种鉴别：菌属的种鉴别：（二）致病性1.变形杆菌属普通变形杆菌和奇异变形杆菌引起、创伤、烧伤的。普通变形杆菌还可引起多种及；奇异变形杆菌还可引起婴幼儿肠炎。产黏变形杆菌尚无引起人类的。外-斐（Weil-Felix）反应：普通变形杆菌 OX19、OX2、OXk 的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原，是用以诊断某些立克次体病的依据。2.3.菌属 本属菌可引起烧伤、创伤与。菌属 本属细菌为医源染的重要病原菌之一。（三）微生物检验1.标本尿液、脓汁、伤口物及婴儿粪便等。2.检验方法及鉴定（1） 直接涂片（2） 分离培养：接

17、种于血琼脂平板和麦琼脂平板上。或伊红亚甲蓝（EMB）琼脂平板；或 SS 琼脂和麦或 EMB变形杆菌属在血琼脂上呈迁徙生长，在肠道菌选择培养基上形成不发酵乳糖菌落，在 SS 琼脂上有黑色中心的菌落。（3）鉴定六、菌属菌属包括 11 个种；菌、假结核其中菌和小肠结肠炎菌与人类致病有关。（一）菌（二）小肠结肠炎（三）假结核菌菌第9页产碱菌斯氏菌雷氏菌脲酶-/+蕈糖-+-侧金盏花醇+-+普通变形杆菌奇异变形杆菌产黏变形杆菌靛基质+-麦芽糖+-+鸟氨酸脱羧酶-+-变形杆菌属菌属菌属迁徙生长+-硫化氢产生+-液化明胶+-脂酶+-鸟氨酸脱羧酶-+枸橼酸盐利用-+-临床医学检验辅导微生物检验（一）俗称菌杆菌，

18、是烈性传染病的病原菌。是自然疫源性传染病，通过直接接触染疫动物或节肢动物叮咬而1.生物学特性（1）形态与染色：。G-，杆菌，短而粗，两端钝圆，两极浓染，（1.02.0）m×（0.50.7）m。有荚膜，无鞭毛，无芽胞。（2）培养特性：需氧和兼性厌氧。最适生长温度是 2830，培养基最适 pH 为 6.97.1。培养 1618h，用显微镜观察可见一层形状不一，浅灰色小菌落，这是落特征（鉴定意义）。菌培养初期的菌培养 2448h 后可形成直径 0.10.2mm，圆形，中心突出，透明的浅灰色小菌落。液体培养基：形成絮状沉淀和菌膜。底部絮状沉淀堆积呈“钟乳石”状。（3）生化反应： KIA：K（

19、A）/A，H2S（-） MIU：-、-、-2.微生物检验标本：主要血液、痰和淋巴结穿刺液。检验方法及鉴定：注：菌为甲类病原菌，传染性极强，故应严格遵守检验操作规程，要求有设施，防鼠、防蚤和严密的个人防护措施；用过的实验器材及物品随时处理。直接涂片检查；分离培养；鉴定；最后鉴定（噬菌体裂解试验；动物试验；免疫学方法）。（二）小肠结肠炎1.生物学性状（1）形态与染色菌菌体大小为（1.02.0）m×（0.51.0）m，25培养时形成周鞭毛，呈翻滚旋转状运动，37培养无动力，无芽胞，无荚膜的革兰（2）培养特性球杆菌。需氧或兼性厌氧，440均能生长，最适生长温度为 2028。血琼脂平板上，形成

20、直径为 12mm，圆形光滑，凸起的菌落。麦培养基上生长，形成不发酵乳糖的无色、透明或半透明、扁平、较小的菌落。SS 琼脂板上生长不良。液体培养基中呈混浊生长，液体表面可形成白色菌膜或有沉淀生成。（3）生化反应：葡萄糖和蔗糖产酸不产气，绝大多数菌株不发酵乳糖，硫化氢，脲酶阳性，靛基质不定。VP 试验25阳性，372.致病性，鸟氨酸脱羧酶阳性。（1）致病因素：侵袭力和肠毒素。（2）所致疾畜共患病，动物后多无症状，通过消化道引起人类肠道性疾病。小肠结肠炎、末端回肠炎、胃肠炎、阑尾炎和肠系膜淋巴结炎。除肠道外尚可发生败血症，结节性红斑及关节炎等。3.微生物检验（1）标本：标本来自被检者粪便、血液、尿液

21、、或脏器组织等。（2）检验方法及鉴定：1）分离培养：粪便标本可直接接种于麦、NyE（选择性琼脂）或 SS 琼脂。第10页临床医学检验辅导微生物检验2）鉴定：30以下动力（+） 脲酶（+）菌（三）假结核啮齿动物家畜和禽类致病，并通过污染淋巴结炎。导致人类。人类少见，偶见肠道及肠系膜菌体呈球形或短，两端浓染。25培养有周鞭毛，有动力，37培养无动力。兼性厌氧，最适生长温度 30，pH6.08.0。菌落：圆形，中心凸起，呈颗粒状，灰黄色，半透明的菌落。 血琼脂平板上不溶血，SS 琼脂上不生长，能在含胆盐培养基或麦培养基上生长。在液体培养基中呈均匀浑浊生长者为光滑型菌株，沉淀生长为粗糙型菌株。七、肠杆

22、菌科的其他菌属在临床标本中具有较高的分离率，大多属于条件致病菌。枸橼酸杆菌属菌属肠杆菌属菌属枸橼酸杆菌属包括地枸橼酸杆菌、异型枸橼酸杆菌和无丙二酸盐枸橼酸杆菌三个种，属正常菌群成员。1.生物学性状（1） 形态与染色：G-，直杆状，无荚膜，无芽胞，具有周鞭毛。（2） 培养特性：需氧或兼性厌氧，营养要求不高。在血液琼脂上的菌落不溶血，在肠道选择培养基上发酵乳糖，在液体培养基中呈混浊生长。（3） 生化反应：2.致病性本菌为条件致病菌，一些慢性疾病如白血病、自身免疫性疾病或医疗插管术后的泌、呼吸道中检出，可引起败血症、脑膜炎、骨髓炎、中耳炎和心内膜炎等。3.微生物检验（1）标本：根据病情可取尿液、痰、

23、血液或脓汁等。（2）检验方法及鉴定1）属的鉴定：2）种的鉴别：根据产生靛基质、硫化氢、丙二酸盐与否鉴别。（二）菌属本属细菌共有 7 个种，引起的医院日见增多，其中以菌最为多见。产酸（催娩）第11页-半乳糖苷酶赖氨酸脱羧酶枸橼酸盐利用枸橼酸杆菌属+-+沙门菌属-+菌属-+-靛基质硫化氢丙二酸盐地枸橼酸杆菌-/+-异型枸橼酸杆菌+-+无丙二酸盐枸橼酸杆菌+-临床医学检验辅导微生物检验伯菌次之。1.生物学特性（1）形态与染色：G-，卵圆形或球杆状，排列，菌体外有明显荚膜，无鞭毛，无芽胞。（2） 培养特性：需氧或兼性厌氧，营养要求不高。在血琼脂上形成圆形，凸起，灰白色，不溶血的粘液性菌落。有时菌落呈现

24、呈长丝状。在肠道菌选择培养基中为乳糖发酵型菌落。在液体培养基中呈混浊生长，可形成菌膜与黏性沉淀物。（3） 生化反应：型，用接种环挑取时触酶阳性、脲酶阳性、氧化酶、鸟氨酸脱羧酶。其中动力和鸟氨酸脱羧酶2.致病性是本菌的最大特点。菌亚种引起婴儿肠炎、脑膜炎、腹膜炎、外伤、败血症和成人医源性尿道。 臭鼻鼻硬节催娩菌引起臭鼻症。菌引起鼻腔、咽喉和其他呼吸道的硬节病。菌可引起呼吸道和泌、创伤与败血症等。（三）肠杆菌属1.生物学特性（1） 形态与染色：G-，短而粗的杆菌，有周鞭毛，部分菌株有荚膜，无芽胞。（2） 培养特性：需氧或兼性厌氧，最适温度为 30，营养要求不高。在普通琼脂上形成大而湿润的黏液状菌落

25、；在血琼脂板上不溶血；肠道菌选择培养基上多数形成乳糖发酵菌落；在液体培养基中呈均匀混浊，表面有薄膜，有黏稠性沉淀物。（3） 生化反应：IMViC：-、-、+、+ 2.致病性阴沟、产气、日等肠杆菌常导致条件致病，引起呼吸道、泌尿生殖道，亦可引起菌血症，引起新生儿脑膜炎。（四）菌属临床标本中以粘质1.生物学特性（1）形态与染色：菌最常见。G-，细小杆菌，有周鞭毛，有些菌种有微荚膜，无芽胞。粘质菌是最小的细菌。（2）培养特性：兼性厌氧，营养要求不高，在普通营养琼脂上生长良好，呈白色、红色或粉红色菌落。各种菌株可以产生两种色素：灵菌红素（非水溶性）和吡羧酸（水溶性）。（3）生化反应：本属的关键生化反应是 DNA 酶阳性、葡萄糖酸盐阳性。2.致病性粘质液化菌可导致呼吸道与泌。菌存在于植物和啮齿类动物的消化道中，是人的条件致病菌，主要引起呼吸道。【例题】ESBLs 的主要产生菌株，同时也是人类泌尿系A.大肠埃希菌的主要病原菌是B.菌C.阴沟肠杆菌第12页临床医学检验辅导微生物检验D.铜绿假单胞菌E.伤寒沙门菌【正确】A【