松材线虫病防治技术方案修订版

1、松材线虫病防治技术方案（修订版）此件为国家林业局关于印发松材线虫病防治技术方案（修订版）的通知（林造发201035号）的附件，请结合当地实际贯彻落实。为保护我国森林资源安全和造林绿化成果，促进经济和生态建设稳步发展，遏制松材线虫病严重发生和扩散蔓延的势头，提高防治成效，特制定本方案。一、疫情普查监测（一）疫情普查1普查范围本行政区辖内的所有松林。重点是与疫区毗邻地带、交通沿线、港口、风景区、松木制品生产和使用单位、建筑工地、仓库、驻军营房、城镇、木材集散地、移动通讯站、电视发射台、高压线塔、电缆线路、光缆线路及高压线路等地区附近的松林。2普查内容（1）疫情发生区查清发生分布范围、发生面积（以小

2、班面积为准，孤立松林以实际面积统计）和病死树数量，绘制发生分布图表（省级到县级、县级到小班），计算病死树株率和经济损失，掌握疫情发生情况，为制定年度防治计划提供依据。（2）非疫情发生区查清发现枯死松树分布地点、树种、面积、枯死株数、松褐天牛危害情况，绘制松树枯死情况分布图表（省级到县级、县级到小班）。3普查时间一般地区每年普查工作不得少于1次。在松褐天牛一年两代的地区普查时间为910月份；松褐天牛一年一代的地区普查时间为810月份。重点区域每年普查工作至少2次，除在秋季开展普查外，在春季还应开展疫情普查工作。松褐天牛一年两代的地区在45月份进行；松褐天牛一年一代的地区在34月份进行。4普查方法

3、（1）踏查。根据当地松林分布的特点，设计出便于观察全部林分的踏查路线；沿踏查路线用目测方法或借用望远镜查找有无当年枯死树，或针叶褪色，或针叶黄化，或针叶枯萎，或针叶呈红褐色等症状的松树，选择取样对象。（2）详查。根据踏查结果，对可疑发病林分进一步抽取一定数量的样品，进行分离鉴定，确定是否发生疫情。（二）疫情监测1定期巡查监测尚未发生松材线虫病地区，以县（市、区）为单位，组织专业技术人员每月对重点地区（见普查范围）的附近松林进行巡查，凡发现松树有感病症状，立即取样分离鉴定，确定是否有松材线虫。2定点监测在发生区边缘地带设置固定监测点，定期调查，发现松树枯死立即取样分离鉴定，确定是否有松材线虫。3

4、其他辅助监测技术（1）打孔流脂监测在松材线虫病发生区或其边缘，选择外观正常、针叶无明显变色的松树，用直径1厘米1.5厘米的打孔器或皮带铳子在松树主干上打一可见木质部的圆孔（孔位尽量选择垂直位置），观察打孔后松脂流出情况，初步判别健康树和疑似罹病树。春、夏、秋季，打孔后24小时即可进行观察，冬季打孔后48小时72小时进行观察，对流脂情况进行判别：一级流胶（健康树）：松脂从孔口流下，超过孔口边缘；二级流胶（疑似罹病树）：松脂沉积在孔口下缘；三级流胶（疑似罹病树）：松脂渗出到圆孔壁上，呈粒状；四级流胶（疑似罹病树）：孔壁上无松脂流出。对疑似罹病树进行取样分离镜检，确认是否有松材线虫。要注意松树树种之

5、间的流脂差异，马尾松要较黑松表现迟缓。（2）诱捕器监测于松褐天牛羽化期在林间设置诱捕器诱捕松褐天牛活体进行监测。每个诱捕器之间距离为100米，诱捕器下端距地面1.5米左右。将诱捕到的松褐天牛成虫活体剪碎后用贝尔曼漏斗法进行分离，再鉴定是否携带松材线虫。一旦发现松褐天牛携带松材线虫，则在诱捕点周围100米范围内对枯死松树和濒死松树进行取样分离鉴定，确定疫情发生地点。禁止在疫情发生林分边缘使用，防止疫情向外扩散蔓延。（3）线虫检测管监测在树干上用电钻（木工钻）钻一可见木质部的圆孔，插入线虫检测管。14天后拔出检测管，通过检视管壁凝结水内有无蠕动线虫，再鉴定是否为松材线虫。具体技术操作规程参见附录1

6、。（4）航空遥感监测对地面不易调查的高山密林地区，采用航空遥感技术进行监测，发现枯死树后，再根据全球定位系统指示位置开展实地调查。实施航空遥感监测，要运用差分方法对机上显示的地理位置进行校正。（三）取样1取样方法（1）取样部位一般情况下在树干下部（胸高处）、上部（主干与主侧枝交界处）、中部（上、下部之间）3个部位取样。如仅部分枝条表现症状的，要在树干上部和死亡的枝条上取样。如外部表现症状明显的可在胸高处取样。在春季松褐天牛化蛹期，可在蛹室周围取样。（2）取样时在取样部位剥净树皮，直接砍取100克200克木片；或剥净树皮，用手摇钻从木质部至髓心钻取100克200克木屑；或在取样部位分别截取2 厘

7、米厚的圆盘。（3）取样时应排除人畜破坏、森林火灾、其他病虫害等原因造成的枯死树。（4）取样时应考虑以下因素：松材线虫病发病高峰期一般在910月，从表现出针叶变黄、树脂分泌减少甚至停止至死亡约1个月至1个半月。在松林中一般是优势木先发病。由于不同地区种源的松材线虫的致病性、松树的抗性差异等原因，一些松树仅部分枝条表现感病外部症状。这种症状在混交林中表现尤其明显。抽取样品要及时并重点抽取尚未完全枯死或刚枯死的优势木（针叶呈黄绿或黄褐色，尚未完全枯萎，树皮尚未脱落，材质尚未腐朽）。（5）所取的样品要及时贴上标签（记录样品号、采集地点、树种、树龄、取样时间和取样人等）。2抽样数量以林业小班为单位，表现

8、典型症状的松树在10株以下时全部取样；10株以上时先抽取10株，再选取其余数量的1%5%。3样品的保存与处理取回的样品应及时分离鉴定，若需要保存可采取以下方法：将木片装入塑料袋内，扎紧袋口，在袋上扎几个小孔（也可直接保存木段、圆盘），放入4冰箱。若需长期保存，要经常在样品上喷水（一般在半个月至1个月内完成分离鉴定）。样品分离鉴定结束后应及时对样品进行销毁。注：松材线虫普查监测工作具体技术操作规程参见国家标准松材线虫普查监测技术规程（GB/T 234782009）。（四）分离鉴定1线虫分离将取回的样品在室内采用贝尔曼漏斗法或浅盘法进行线虫分离，分离时间一般需12小时以上。将分离液体收集到试管或烧

9、杯中，通过自然沉淀或离心后进行镜检。2线虫培养（1）疫木保温保湿培养：将样品锯成小段，置于烧杯中加少量清水，木段下端浸在水中，木段上端用湿纱布覆盖，在30条件下保温保湿培养3天，倒取杯中水液，可获得较多雌雄成虫；或将样品木段适当浸湿，放于塑料袋里，扎紧袋口，置于30培养箱中3天取出重新分离，可获得较多雌雄成虫。（2）单异活体培养：制备马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）平板。用盘多毛孢（Pestalotia spp.）或镰刀孢（Fusarium spp.）或灰葡萄孢（Botrytis cinerea）培养线虫。无菌条件下将多毛孢或镰刀孢或灰葡萄孢接种在PDA平板上，置于2528恒温培养45天，菌丝

10、长满平板时接种线虫。多毛孢或镰刀孢在30恒温条件下保湿培养线虫，接种20条幼虫，48小时即可分离鉴定，线虫量少时可相应延长培养时间。灰葡萄孢在25恒温培养线虫，培养时间要加长13天。3玻片的制作（1）临时水玻片的制作：在洁净的载玻片中央滴一水滴，水滴的量以加盖玻片后恰好充满盖玻片下的空间为好。用细针挑取，或用毛细滴管吸取线虫置于载玻片的水滴中，并使之沉底。将有线虫的载玻片在酒精灯的火焰上往返通过56秒，杀死线虫。用细针摆好水滴中的死线虫，然后用镊子夹盖玻片从一侧轻轻盖下。（2）半永久玻片的制作：将分离所得的线虫液，转移至离心管中，2000转/分离心3分钟。吸去上部清水并保留底部34毫升线虫液，

11、置于53热水中15 分钟杀死线虫，待冷却后，加入等体积的TAF液固定48小时以上。再用上述方法再离心，用微量移液器吸取离心管底部线虫液，滴加进装有2 毫升棉蓝乳酚油的钟面皿中，置恒温烘箱中45脱水24小时。在载玻片上加上封片蜡圈，用挑针加一小滴甘油于蜡圈中心位置。解剖镜下挑取脱水后的目标线虫于甘油中，使其沉底并位于甘油滴中心位置。在封片蜡圈上放置盖玻片，转移至控温电热平板上，保持75使蜡完全融化，取下并自然冷却后用透明指甲油加封一次。4鉴定（1）常规显微镜形态鉴定（仅适用于雌雄成虫，以雌成虫为主）：将制作好的玻片置于显微镜下观察其形态，判别是否为松材线虫。注：松材线虫分离、培养、镜检技术操作规

12、程参见国家标准松材线虫病检疫技术规程（GB/T 234762009）（2）分子检测（适用于各虫态）：松材线虫分子检测技术采用实时PCR检测技术，操作规程见附录2。所需仪器和试剂可与国家林业局危险性林业有害生物检验鉴定技术培训中心联系。二、疫情报告、公布与撤销（一）疫情确认1新发现疫情的省（区、市），疫情鉴定以国家林业局全国危险性林业有害生物检验鉴定技术培训中心或国家林业局林业有害生物检验鉴定中心鉴定结论为准，由国家林业局最后确认。2新发现疫情的县级行政区，疫情鉴定以省级以上森防机构或国家林业局认可的专家鉴定结论为准，由省级林业主管部门最后确认。（二）疫情报告1普查结果报告：春季普查报告应在5月

13、份、秋季普查报告应在11月份报告国家林业局；报告中应附年度松材线虫病监测普查统计表和年度松材线虫病发生情况统计表。2月报告：各省（区、市）森防机构定期以电子邮件和书面形式同时向国家林业局森防总站报送松材线虫病除治工作进展情况。实行定期除治（集中在秋季普查后至翌年松褐天牛羽化前开展疫木除治）的，每月报送一次；实行常年除治的，每季度报送一次。疫情监测情况每月报送一次。3新发疫情报告：在疫情监测中，一旦经技术鉴定证实新发现松材线虫病，当地林业主管部门应在一周内逐级将发生地点、发现日期、林分状况、发病面积、病死树数量等报告国家林业局和当地人民政府。（三）疫情公布国家林业局根据全国松材线虫病疫情调查结果

14、，每年正式以公告或新闻发布会等形式公布松材线虫病疫情信息。（四）疫情撤销1当疫情发生区通过有效手段根除疫情后，由国家林业局以公告或新闻发布会等形式宣布该地解除疫情。2撤消疫情应满足下列条件之一：通过有效手段根除后，分布区中没有松材线虫的寄主植物。通过有效手段根除后，连续3年疫情普查监测中没有发现松材线虫。三、防治措施（一）规划设计1各省（区、市）林业主管部门根据国家林业局的总体部署和本省（区、市）松材线虫病秋季普查结果，制定本省（区、市）松材线虫病防治方案。2各县级疫情发生区根据本省（区、市）松材线虫病防治预案，结合本地松材线虫病传播规律、发生区的地理位置、林分用途、发生面积、危害程度等因素，

15、以县级行政区为单位，进行防治作业设计。作业设计要划分不同治理类型，实行分类施策，分区治理。内容包括不同类型区的特点、范围、面积、治理对策和技术措施。面积、技术措施和工程量要落实到林业小班，并绘制施工作业图、表和文字说明。3防治作业区以实际发生林份边缘为基准，向外延伸一定范围作为缓冲区。缓冲区按发生区处理。（二）疫木除治1皆伐适用范围：需要尽快根除的疫点，如孤立疫点、新发生疫点、区域位置重要的疫点等。此外，在病死树率高并且松林无保存价值的地方（或松树数量不占主要比例的混交林）也可采用。作业要求：防治作业区以实际发生林份边缘为基准，向外至少延伸100米。在松褐天牛成虫羽化前由外向内皆伐所有松材线虫

16、的寄主植物，所有伐除的病死树、活树、直径超过1厘米的枝条均须作除害处理，并应在松褐天牛成虫羽化前完成；在操作允许的条件下，病死木伐桩高度不得超过5厘米。2疫木清理适用范围：自然保护区和重要风景林区及其他特殊用途松林等必须保留松树的林份、大面积松林且连片发生无法短期内彻底根除疫情的地方。作业要求：防治作业区以实际发生林份边缘为基准，向外至少延伸2000米。在松褐天牛成虫羽化前（松褐天牛一年一代的地区为10月至翌年4月；松褐天牛一年两代的地区为7至8月和11月至翌年3月）由外向内伐除包括病死松树、疑似感病木、衰弱木、受压木、风折木、旱死木、雪压木、当年枯死或已经萎蔫的侧枝以及各种人为乱砍滥伐的松树

17、枝、干及伐桩等，所有伐除的松木及直径超过1厘米的枝条均须作除害处理，并应在松褐天牛成虫羽化前完成；在操作允许的条件下，伐桩高度不得超过5厘米。注意事项：我国松材线虫病造成的松树枯死存在越年病枯死现象，因此在松褐天牛羽化前应对防治作业区出现的枯死松树再清理一次。注：松材线虫病疫木清理技术操作办法参见林业行业标准松材线虫病疫木清理技术规范（LY/T18652009）3疫点封锁适用范围：病害发生面积大，危害严重，实施皆伐或清除感病木难度大，且不会造成疫情自然扩散的地区可采用全面疫点封锁措施。作业要求：禁止砍伐疫点内所有寄主植物，包括枝条。4伐桩处理病死木砍伐后伐桩可选择如下方法之一进行除害处理：伐桩

18、全部连根挖出后集中除害处理。枯死松树的伐桩全部去皮后喷16%喹硫磷·丁硫克百威乳油1100倍液至伐桩湿透（或磷化铝12粒），再加套0.8毫米以上厚度的塑料农膜袋并在四周压土。也可使用国家林业局推荐的其他药剂。（三）松褐天牛防治1设置诱木防治适用范围：采用疫木清理措施的松林。作业要求：在发生区内选择衰弱或较小的松树作为诱木引诱松褐天牛集中在诱木上产卵，每10亩设置一株，并用GPS定位。于松褐天牛羽化初期，在诱木基部离地面3040厘米处的3个方向侧面，用刀砍34刀（小树可少些），用注射器把引诱剂注入刀口内。诱木引诱剂使用浓度为13（1份引诱剂原液用3倍清水稀释）。施药量（毫升）大致与诱木

19、树干基部直径（厘米）树相当。于每年秋季将诱木伐除并进行除害处理。或直接在林间放置新鲜松木段引诱松褐天牛集中在诱木上产卵，待产卵期后集中除害处理。注意事项：禁止在疫情发生林分边缘使用，防止疫情向外扩散蔓延，同时要加强诱木管理，严防诱木流失。2化学药剂防治适用范围：所有松材线虫病发生区。作业要求：防治作业区以实际发生林分边缘为基准，向外至少延伸2000米。使用噻虫啉（也可使用国家林业局推荐的其他药剂）在松褐天牛羽化初期和第一次药剂有效期末连续2次采取飞机，或地面喷药方进行松褐天牛防治。使用药剂和方法见附录3。或在松褐天牛幼龄幼虫期，对树干喷洒16喹硫磷·丁硫克百威乳油80倍液，从树桠到树

20、干基部，全株喷洒均匀。3天敌防治（1）利用管氏肿腿蜂或川硬皮肿腿蜂防治放蜂时间：一般在松褐天牛幼虫幼龄期，气温2528，相对湿度6070的晴天放蜂。放蜂方法：单株放蜂：在零星危害的林分，采取单株放蜂。放蜂时，在树干上斜插一根大头针，将蜂管棉塞打开后，蜂管倒插在大头针上，管底略高于管口，以防止雨水浸入。也可以把蜂管口倒插在树木枝桠上。中心点放蜂：在较大面积被害林分，采取中心点放蜂。每10亩林地布设一个放蜂点，每点放蜂1万头左右。放蜂时，根据平均每玻管含蜂量推算每个放蜂点放置蜂管数量，将蜂管棉塞打开后，蜂管平摊在靠近若干株松树的地表中央，让蜂自行在林间扩散寻找寄主。（2）利用诱木+花斑花绒寄甲卵块

21、或成虫防治在松褐天牛种群数量较低的松林，每亩林地设1株至2株诱木；当该诱木中的松褐天牛幼虫发育到2龄至3龄时，伐倒诱树，每株诱木释放花斑花绒寄甲卵1000粒或释放成虫20对。操作方法是：利用人工繁殖的花斑花绒寄甲卵堆，按卵堆的自然大小剪成每块含80粒至200粒卵的卵块，制成卵卡，将卵卡用订书机均匀钉到树干上。释放成虫于下午黄昏时候进行，直接将成虫释放到树干基部即可。（3）直接在松林中释放花斑花绒寄甲卵块或成虫防治在松褐天牛种群数量较低的林分，每亩松林选择松树枯死木或有松褐天牛危害的松树4株至5株，作为直接释放花斑花绒寄甲卵或成虫的受体，释放量为卵2000粒株或成虫10对株。在松褐天牛发生严重的

22、林分（在每亩松林地受害死树15株以上），按每亩释放花斑花绒寄甲卵2万粒或成虫150对的释放量释放。释放卵卡、成虫的时间和操作方法同上。（4）管氏肿腿蜂或川硬皮肿腿蜂+花斑花绒寄甲卵块或成虫防治在林分内受害木中松褐天牛幼虫12龄时释放管氏肿腿蜂或川硬皮肿腿蜂，在松褐天牛幼虫发育至2龄以上时释放花斑花绒寄甲，释放量和操作方法同上。（5）注意事项在释放花斑花绒寄甲的林分中，花斑花绒寄甲已寄生在死树中松褐天牛上，不要将诱木和枯死树清理出林地，可于松褐天牛羽化前砍伐集中起来，放在林中，用8目铁丝网笼罩住，待花绒寄甲羽化迁飞后将诱木集中并烧毁。（四）名松古树保护对有特殊意义的名松古树可在树干上打孔注药进行

23、保护，具体技术操作办法及使用药剂见附录4。注：松褐天牛防治具体技术措施参见林业行业标准松褐天牛防治技术规范（LY/T18662009）四、防治成效检查（一）疫木除治质量检查1调查时间：除治工作结束至松褐天牛羽化前。2评价指标：实施清理的林分无病死树；防治作业区伐桩高度低于5厘米，并进行处理；除治迹地不残留直径1厘米以上松树枝桠。3抽查比例：（1）县级疫情发生区：有基本根除任务的、或上年度新发生的、或疫情上升的、或县级自查达到基本根除目标的，应该全部检查。其余县级疫情发生区检查数量不少于1/3。（2）乡镇级疫点：重点抽查新发疫点、有根除任务及区域位置重要的疫点。抽查率应不少于1/2。（3）发生小

24、班：每个乡镇发病小班1个到3个的，全部检查；每个乡镇有4个以上发病小班的，随机抽取3个小班进行检查。（二）防治效果检查1调查时间：每年秋季。2评价指标：对照国家林业局下达的年度除治任务书要求的年度防治目标任务逐条检查，年度任务未提出要求的地方随机抽查。五、疫木除害处理和安全利用（一）除害处理方法根据当地的疫木数量、疫木处理能力等实际情况，在保证疫木不流失和处理质量的前提下，选择以下1种或1种以上的方法进行除害处理。所有处理必须在松褐天牛非羽化期内进行。1热处理：将疫木置于热风型干燥窑，或木材专用热风（蒸汽）烘干箱内，对其进行加热处理时，在木材中心温度达到65以上后，再持续处理4小时。具体方法见

25、附录5、6。2微波处理：将疫木制成板材或方料，利用特定的疫木微波除害处理设施设备，根据疫木的含水率、厚度和温度安排微波处理时间，直至达到处理要求。具体方法见附录7、8。3集中熏蒸处理：疫木熏蒸常用熏蒸剂有溴甲烷（CH3Br）、硫酰氟（SO2F2）、磷化铝（AlP）。在远离居民区、公共场所、人口稠密的地方，选取地势平坦、土壤紧密、向阳、通风良好、交通方便的地方作为熏蒸场所，对疫木进行熏蒸处理，直至达到处理要求。具体方法见附录9。4制板处理：在松褐天牛非羽化期，将疫木按照胶合板、刨花板、中密度纤维板生产工序，加工制作成胶合板、刨花板、中密度纤维板，并在加工制作过程中，将松材线虫及其媒介昆虫杀死，达

26、到除害处理的目的。疫木处理过程中枝桠和废料应在同期全部烧毁。5烧炭处理：将疫木置于炭窑中燃烧25小时后，封闭点火孔。6造纸处理：利用疫木进行造纸，在造纸生产的制浆工序中将媒介昆虫和松材线虫杀死，达到疫木除害处理的目的。7烧毁处理：选取远离居民区、建筑物且交通方便的地点进行烧毁。可使用易燃物引火焚烧疫木。8林间就地用作培育茯苓的材料：将感病松木伐倒后，截成长度为60厘米的木段，集中在林地内晾晒10天后，当木段含水量约在25%28%时，接茯苓菌种。接种后将木段放入80厘米×50厘米×35厘米规格的坑内，坑内及段木上撒杀虫剂，再掩土填埋、压实，覆土厚度高出木段15厘米。9林间就地

27、套袋熏蒸：将砍伐的树干及直径1厘米以上的树枝截成长度100厘米150厘米的木段，在林间空地装入0.8厘米以上厚度的塑料农膜袋里，投放56磷化铝药片进行熏蒸，用量每立方米体积20克，密封10 天15天。熏蒸袋上有警示标志(注明：处理单位、处理时间、药剂名称)。使用磷化铝熏蒸处理应在室外最低温度10以上时进行。（二）疫木安全利用疫木安全利用是指将疫木在指定的厂家通过热处理、微波处理后进行利用，或在指定的厂家将疫木制作胶合板、刨花板、中密度纤维板、造纸，或将疫木就地用作培育茯苓的材料。有条件的地方应开展疫木安全利用，以减少损失。六、检疫封锁措施（一）松材线虫病发生省份要按照森林法、植物检疫条例和国务

28、院办公厅关于进一步加强松材线虫病预防和除治工作的通知要求，划定松材线虫病疫区，并在疫区周围设定4公里隔离区。（二）严格按照国家林业局有关规定，做好对辖区内生产、使用、经营松木及其制品的单位和个人进行全面登记工作，建立国家、省、市、县四级生产使用经营松木单位和个人档案，并建立厂家报告制度。（三）要经常性地对辖区内松苗繁育基地、加工、使用、经营松木的单位进行检疫检查，严厉查处非法加工、利用、经营疫情发生区松材及其制品的行为。实施检疫检查的抽样比例，苗木按一批货物总件数的5%进行抽样、木材按总件数的10%进行抽样。所抽样品的取样分离鉴定方法按本文“疫情监测”中的“取样、分离”和“鉴定”栏规定进行。发

29、现带疫材料就地实施除害处理（处理方法参见本文“疫木除害处理”），切实防止松材线虫病传播。对有组织实施疫木安全利用的，有关森检部门要指定专人全过程监督。（四）以县级行政区为单位，需要调入松木包装材料的，调入单位或个人应向当地有关植物检疫机构申报，经审查后，视情况提出检疫管理意见，同时向调出方森防检疫机构提出检疫要求书。（五）发生区要在主要通道设立森林植物检疫检查站（或木材检查站），配备必要的专职或兼职检疫人员，对运出发生区的松木及制品进行检查，发现非法调运疫木及其制品必须就地进行除害处理。运输松材线虫病发生区松木包装材料车辆途经的有关植物检疫检查站要查验有关运输单证、标志等。如发现途经货物的松木

30、包装材料未达到标准要求的，应当依法予以扣留，并通知所在有关植物检疫机构处理。可采用的处理措施有：除害处理、改变用途、退运处理、销毁等。处理费用及其损失由责任人承担。七、预防措施（一）黄山、张家界等重点预防区要采取人工清除松林内衰弱松木、施放天敌等综合措施防治松褐天牛，降低疫情发生风险；要结合造林项目，有计划地对现有纯松林进行改造；对有特殊意义的松树，应采用保护剂进行重点保护。（二）其他未发现松材线虫病疫情的适生区要加强疫情监测普查，做到及时发现及时根除。对松褐天牛虫口密度较大的林分，要采取人工、化学等措施降低的虫口密度。要加强对纯松林的改造，增加阔叶林比例，提高林分的抗病能力。（三）加强复检工

31、作，松木包装材料调入地的有关植物检疫机构复检发现有松材线虫或松褐天牛活体存在的迹象，应采取紧急措施，如除害处理、焚烧或作人造板、造纸原料或拒绝入境等，并将有关情况及时通知调出地有关植物检疫机构。（四）由于全球气候变暖可能造成松材线虫病适生区北移，北京、天津、河北、山西、甘肃等省份要按照上述要求加强松材线虫病预防工作，防止疫情入侵。附录：1线虫检测管检测松材线虫技术2松材线虫实时PCR检测技术3噻虫啉防治松褐天牛成虫技术方法4名松古树打孔注药保护技术5松材线虫病疫木热处理技术（热风烘干箱处理）6松材线虫病疫木热处理技术（热风干燥窑处理）7松材线虫病疫木微波处理技术（辊轴式）8松材线虫病疫木微波处

32、理技术（隧道式）9松材线虫病疫木熏蒸处理技术附录1线虫检测管检测松材线虫技术1 适用范围松属Pinus植物的活体及木材、木制品等。2 分散型松材线虫取样2.1 引诱剂配制和引诱管制备 将蒎烯（Acros Organics，98%），蒎烯（Fluka Chemie AG，80%）和长叶烯（Acros Organics，99%），按照比例12.71.1 配制后用 40µl nhexane溶解 （Fisher Chemicals，99%）成浓度为7mg/40µl的引诱剂备用。 取样管由一个2ml离心管制成 （北京Zohonice 科技有限发展公司，北京），内装引诱剂载体橡胶头（通

33、州顺义塑料厂，北京），将0.8%琼脂凝固在载体上方周围。取样管封口储藏在4°C待用。在试验前，将40µl引诱剂滴入到橡胶头，待溶剂被挥发后，进行取样。2.2 取样方法 11月来年的4月，林间松木中松材线虫属于分散型松材线虫，并聚集在松墨天牛蛹室周围。取样时，用电钻垂直打入松墨天牛椭圆形取食孔（2cm深，1cm直径），并使之与天然蛹室相通，引诱管插入取样孔，224小时后拔出。 对非当年病害原木进行调查，如果找到椭圆形松墨天牛侵入孔，即电钻垂直打入取食孔（2cm深，1cm直径），并使之与天然蛹室相通，引诱管插入取样孔，224小时后拔出。3 繁殖型松材线虫取样3.1 引诱剂配制将

34、蒎烯（Acros Organics，98%），蒎烯（Fluka Chemie AG，80%）和长叶烯（Acros Organics，99%），按照比例10.10.01配制后用40µl nhexane溶解（Fisher Chemicals，99%）成浓度为130mg/40µl的引诱剂备用。 3.2 取样孔横截面部位选择取样孔选择在树体南面进行打孔，深度为23cm。3.3 取样高度选择 对于初步表现症状的松树：叶失绿80%，无刻槽，枝条有天牛取食痕迹，无腐生线虫，无小蠹、白蚁危害；取样部位选择树干上部分杈侧枝处，有天牛取食痕迹部位附近。 当症状表现为叶失绿99%，针叶红褐色，无

35、刻槽，无小蠹、白蚁危害：取样部位为树干2m附近。 当症状表现为下部针叶黄褐色，上部针叶红褐色。天牛刻槽多，有天牛蛀屑，有小蠹、白蚁等次生害虫危害：取样部位为树干11.5m处。 当症状表现为枯萎死亡，刻槽多，小蠹、白蚁等次生害虫危害严重，线虫量很少，选择树干基部1m处。4 镜检室内用水将引诱管中琼脂冲出，倒入3.5cm直径培养皿中，放置片刻，在显微镜下观察线虫形态，对松材线虫加以鉴定。根据种的特征、与近缘种的区别鉴定是否为松材线虫。附录2松材线虫实时PCR检测技术1 检测程序松材线虫分离基因组DNA提取实时PCR扩增数据分析结果判定。2 检测试剂2.1 DNA提取试剂：线虫裂解液2.2 实时PC

36、R扩增试剂：探针（TaqMan11）、引物对（F11/R11）、TaqMan Universal PCR Master Mix3 操作步骤3.1 线虫基因组DNA的提取 吸取23ul 线虫混合液于Eppendorf管中； 加入18 ul F11液； 加入2 ul预冷R11液体； 加入17 ul的双蒸水（C液）； 在PCR仪上，于6570条件下保温处理35分钟；在95条件下保温处理10分钟；3.1.6 12000rpm离心5min，上清液（X液）用于扩增。3.2 准备实时PCR扩增反应板在Eppendorf管中依次加入下列成分： PCR Master MIX （K液）5 ul；3.2.2 10

37、umol/L TaqMan 探针（L液）0.5 ul；3.2.3 10 umol/L正向引物与负向引物（M）共0.5 ul；3.2.4 上述步骤1所提取的DNA模版（X液）0.5 ul；3.2.5 灭菌双蒸水（C液）3.5 ul。3.3 创建反应板文件 点击file下拉菜单中的new（新建文件）。 在plate Nme 栏编辑文件名，如 20060916，单击Next。 选择要添加到反应板文件的探针。a.单击选择一个探针（本实验中，taqMan探针选fam，TaqManMgb探针选stdl）；b.单击add键。探针即被添加到反应板文件中；c.单击Next键。 为每反应孔指定探针和任务。a.单击

38、一个反应孔（对于重复，选择一组反应孔），以便选取它（们）。b.单击探针名，为反应孔选定探针。c.单击task（任务）栏的下边，以指定探针任务。d.单击ues（使用）。所选反应孔中显示探针任务和颜色。e.单击Finish（完成）。SDS软件即创建反应板文件。 输入样本名。a.单击View > well Inspector（反应孔设定）。b.单击一个反应孔或选中多个重复反应孔。c.输入样本名。d.重复a至c，直到所有反应孔均指定好样本名。e.关闭well Inspector。3.4 设计热循环条件反应程序50 2min，95 10min;35个循环程序为95 15s，60 35s。3.5 运

39、行反应板3.6 数据分析3.7 结果判读根据CT值或扩增信号均可以判读检测样品中是否含有松材线虫。 CT值：由下表可知，单条松材线虫扩增的CT值小于30，因此，在实际检测过程中，当检测样品的CT值小于35时，即可非常肯定地判断检测样品中含有松材线虫。但当检测样品的CT值大于35或无CT值时，即可判断检测样品中不含有松材线虫。Sample1条2条3条4条5条6条7条8条CT29.617829.064428.452728.293726.314925.214824.269624.2434实时PCR扩增图谱 扩增信号如上图，2号待测样本与4号阳性对照的扩增图谱有阳性扩增信号，则2号待测样本中含有松材线

40、虫，1号、3号待测样本与5号阴性对照没有阳性扩增荧光信号，则1号、3号待测样本中不含有松材线虫。4 松材线虫实时PCR检测仪器设备实时PCR基因扩增，离心机，冰箱，漩涡混合气，2.5ul、20 ul、200ul移液器。附录3噻虫啉防治松褐天牛成虫技术方法1 主要剂型我国林业目前主要使用剂型为2%噻虫啉微胶囊悬浮剂、1%噻虫啉微胶囊粉剂。2 使用方法2.1 2%噻虫啉微囊悬浮剂使用方法 飞机低容量喷雾防治防治适期：在松褐天牛羽化初期和第一次药剂有效期末（约隔30日）各喷一次。药剂：2%的噻虫啉微胶囊悬浮剂。方法：以18比例稀释后按500700ml/亩用量飞机低容量喷雾。 林间用机动喷雾机防治防治

41、适期：同上。药剂：2%的噻虫啉微胶囊悬浮剂。方法：将2%的噻虫啉微胶囊悬浮剂兑水稀释2000倍后以2000ml/亩用量，用机动喷雾机喷雾，将药液喷洒在枝干、树冠和其他天牛成虫喜出没之处，以树皮微湿为宜。注意事项：忌阴雨天喷雾，若施药6小时内遇雨，药效会大大降低。正常情况下，2%噻虫啉微囊悬浮剂降雨量较少地区的持效期可应达到60天以上，在连续小雨地区，其防效可达30天以上，但在施药后若遇暴雨天气与其他因素影响而造成药剂流失，应考虑补防。2%噻虫啉微囊悬浮剂还应达到以下技术指标：a.有效成分含量大于2%b.游离有效成分释放速度小于5%c.成囊率大于95%d.悬浮率大于75%e.热贮稳定性：合格f.

42、微囊平均粒度小于5um2.2 1%噻虫啉微囊粉剂使用方法 林间用机动喷粉机防治防治适期：同上。药剂：1%噻虫啉微胶囊颗粒剂。方法：以11.5比例将1%微胶囊粉剂与滑石粉或高岭土拌匀后，按500g/亩用量，用机动静电喷粉机进行林间喷粉。注意事项：在郁闭度较高的林区可适当加大药剂用量。喷粉时要注意风向，以顺风为宜。喷粉选择清晨林间露水较多时为最佳，以便药剂更好地黏附在树枝和树干上。 利用灭虫布撒器防治防治适期：同上。适用药剂：1%噻虫啉微胶囊粉剂。药剂用量及使用方法：按11.5比例加入滑石粉或高岭土拌匀后，制成椭圆型（长径180±5mm，宽径110±0.5mm）、重约1400g

43、的灭虫药包，使用便携式或车载式布撒器进行作业，每个药包防治面积为68亩。方法：检查灭虫弹标签是否与发射项目一致，核对无误后剪去标签；去掉灭虫弹尾部延期管的保护帽；将延期管头朝下，用送弹器将灭虫弹送入发射器底部；将发射药管装入尾栓高压室内，拧紧击发装置；拉起击针，将拉火绳置于发射器上，发射人员退至安全距离后进行发射即可。注意事项：灭虫药包及布撒器安全管理要严格按国家林业局关于印发<灭虫药包及布撒器安全管理暂行方案>的通知（林造发2006210号）执行。注：正常情况下，2%噻虫啉微囊悬浮剂降雨量较少地区的持效期可应达到60天以上；在连续小雨地区，其防效可达30天以上；但在施药后若遇暴雨

44、天气与其他因素影响而造成药剂流失，持续效果会明显下降，需要补防。1%噻虫啉微囊粉剂，还应达到以下技术指标a.有效成分含量大于1%b.微囊平均粒径小于10umc.水分含量小于2%d.游离有效成分释放速率小于5%e.热贮稳定性：合格f.流动性：合格3 其他如用其他剂型，可根据药剂使用说明书，参照上述方法使用。附录4名松古树打孔注药保护技术1 松材线虫免疫注射液1.1 使用时间：当年12月至次年3月10日前，最佳时期为当年12月至次年1月。1.2 使用方法：用打孔器杆与树干成45°夹角，夹角开口斜向上；移去或剪开注射瓶的瓶尖头部，头部插入注入孔，然后再注射瓶底开出气孔，即可输液；输液结束后

45、需封住伤口。1.3 剂量：见下表 不同胸径松树免疫注射用药量表胸径（cm）株/m3株/m310ml/瓶50ml/瓶0.5%1%2%0.5%1%2%<9500.021支1013250.041支1支1416100.12支1支2支172150.22支4支22302.50.41支2支3139112支4支1支2支40510.522支4支52690.2544支8支70750.255支9支>760.11010支20支2 3%甲维盐·阿维菌素注干液剂2.1 使用时间：当年12月至次年3月10日前，最佳时期为当年12月至次年1月。2.2 使用方法：在松树基部斜打一夹角45°、方向

46、斜向上、直径4mm、深5cm的小孔；用刀片斜切注药嘴，用大头针打透气盲孔，再将注药嘴插入打好的小孔中。2.3 剂量：2ml/cm胸径。（或：树木胸径15cm以下，每株注25ml一瓶；胸径2030cm，每株注50ml一瓶；胸径30cm以上，每株注50ml两瓶。）注意：注药嘴以切出注药孔即可，不宜切的过大；透气盲孔扎透即可；注药瓶内药液12天时间流完为宜；树皮较厚的松树，用刀刮一小块致韧皮部后再打孔。3 松线光3.1 使用时间：当年12月至次年3月10日前，最佳时期为当年12月至次年1月。3.2 使用方法：在树干距离地面1m左右处用穿孔器打一夹角45°、方向斜向上、直径约67mm，深约5

47、8cm的孔。拆掉容器的注入头部，注意不要漏药液，头部插入注入孔，轻击容器底部，然后用针头在底打通空气流通孔，注入药液。注入完毕后，拔出空容器，然后在注入孔内插入愈合剂或木塞子盖上。3.3 剂量： 20cm以下胸径的使用3支；胸径20cm以上，每增加5cm，增加使用1支。（每支60ml）注意：尽量在天气晴朗的白天进行；选择注孔位置，需避免死节、受伤部位及枝桠下部。4 1.2%阿维菌素微胶囊水悬浮剂4.1 使用时间：松褐天牛幼虫期。4.2 使用方法：按松树的胸径计算，胸径1015cm打一个孔，孔距地面30cm，孔径2.02.5cm，与树干呈30°向下倾斜，孔深1520cm。将药注入孔内并

48、用粘土将孔洞封死。4.3 剂量：马尾松胸径每厘米用药1ml，黑松胸径每厘米用药1.5ml。5 保树灵5.1 使用时间：松褐天牛幼虫期。5.2 使用方法：呈45°钻孔或刀劈，深56cm；旋下小盖，刺破封口，插上插头，旋紧后将插头紧插在口中。5.3 剂量：一般情况下，胸径810cm插一瓶；胸径大于10cm的插24瓶，尽量插主枝上部主干和一级主枝分叉下方，或每根主枝上一瓶。6 16%喹硫磷·丁硫克百威乳剂6.1 使用时间：松褐天牛羽化初期前3个月。6.2 使用方法：在树干基部（离地面0.5m处）的3个方向，用10mm钻头的打孔机，打向下与树干纵轴呈45°的斜孔，孔深8c

49、m10cm，打孔注入16%喹硫磷·丁硫克百威乳剂11药液，药剂用特制塑料瓶包装，30ml/瓶，将瓶口部分插入孔中注入药剂。完成注射后，拔出空瓶，用木塞封住药孔，注射孔用黏土封口，进行保护和治疗。6.3 剂量：每年注射一次，注射剂量见下表。树干打孔注射16喹硫磷·丁硫克百威乳剂用量参考胸围（cm）原药（ml）11药液（ml）304710204863204064783060799440809511060120111125100200126141120240142157140280158172160320173188180360188以上200400附录5松材线虫病疫木热处理技术

50、（热风烘干箱处理）1 适用条件适用于除害处理任何厚度的松材线虫病疫木。2 设施设备木材专用热风（蒸汽）烘干箱。其他设备：热风处理自动控制系统。3 准备工作制定热风处理方案；确定热风处理对象的类别、数量、厚度（直径）以及是否适合热处理等基本情况；确定热风处理的温度、时间；热风型烘干箱的清扫和密封性检查；热风处理设备的安放和性能的检测、调试；设置松材线虫病疫木处理点标志。4 处理步骤4.1 装箱将长松材堆放在材堆两侧，短枝应放在材堆中间，两层板材之间放置隔条；材堆的四周与墙壁之间留约15cm的空隙以便热气流通；在材堆的前方，即靠近箱门的一方下部放置同一批处理疫木中的3块箱中最厚的疫木（可确定木段中

51、有媒介昆虫和松材线虫），以备处理效果检查。4.2 设置木芯探头选取厚度最大的待处理疫木，在其中部凿孔后将木芯温度探头放入中部，并用玻璃胶封口后置于箱体中心、距底部30cm处。4.3 关闭箱门将箱门紧密，并检查箱门的密封性。4.4 加热处理准备完毕后，点火加温。在点火的同时，启动热处理自动控制系统，记录和控制处理过程。当木芯温度到达65以上时，持续处理时间4小时。4.5 结束操作在达到热处理温度和时间要求后停火，并打开箱门进行散热排烟。4.6 效果检查疫木热处理检查合格后即可出箱，若不合格应查找原因，重新处理。附录6松材线虫病疫木热处理技术（热风干燥窑处理）1 适用范围适用于除害处理厚度15cm

52、以下的松材线虫病疫木。2 热处理设备本处理方法是指使用PYGL热风型干燥窑（见下图）对松材线虫病疫木进行热处理。PYGL热风型干燥窑由窑体、通风装置、燃烧炉、换热器、喷蒸装置、进排气装置、窑门、检查门、温湿度测量装置和控制柜等组成。同时配备木材中心温度检测仪，且具备数据实时传输、计算机自动打印功能。101窑体；2材堆；3温湿度测量装置；4隔墙；5风机；6进排气装置；7燃烧炉；8加热管；9窑门；10控制柜。热风型干燥窑示意图3 时间要求3.1 厚度10cm以下松木材料，在木材温度6580条件下，热处理时间5小时以上。3.2 厚度10cm15cm松木材料，在木材温度6580条件下，热处理时间8小时

53、以上。4 准备工作4.1 进料前清扫干燥窑4.2 对干燥窑进行全面检查，主要检查墙壁是否有裂缝，密封是否良好；加热管道是否有裂缝、漏火、漏烟；湿球纱布必须保持干净，厚薄适中（34层为宜），每窑换一次；水杯应保持有水。4.3 检查控制柜。控制柜内装有电压表、电流表、温湿度自动测量记录装置（另附设）、风机总控装置等，一般安装于干燥窑后外墙的左侧，以便在烧窑时随时观察。在点火前，对整个控制装置进行调试，重点检查温湿度测量装置、风机及进排气装置是否安装正常。5 松木包装材料装窑5.1 将松木材料上的刨花、木屑清扫干净。5.2 堆放松木材料。装窑时长松材堆放在材堆两侧，短松材放在材堆中间。两层板材之间放

54、置隔条，隔条横断面规格为25×25mm，其长度为材堆宽度；上下层隔条位置要对齐，材堆两侧的隔条应于松材端头平齐；隔条在材堆中的间距为400500mm。材堆顶部对准隔条位置应放置重物，或顶部堆放质量较次的松材。材堆的四周与墙壁之间要留有20cm的空隙，材堆的高度通常为干燥窑内层的高度。5.3 设置木芯探头。在堆放松木材料过程中将温度自动记录仪木芯探头置入凿有探头大小孔洞的松木方块中（规格为10×10×25cm），并固定好，以与松材紧密接触为宜。随后将木芯探头放于窑体中心、距底部上方30cm处。5.4 清扫干燥窑。将脱落在干燥窑底面的树皮及杂物清扫干净，运至窑外。5.5 关闭窑门。关闭窑门，并检查窑门是否密封。6 烧窑6.1 点火。准备完毕后，点火烧窑。6.2 启动控制系统。在点火烧窑的同时，打开控制柜电源开关及温湿度自动记录仪开关。打开风机风向按钮转向正风向，将一号风机打开，间隔45分钟后打开二号风机。风机运行4小时后，将风机风向旋钮关闭，间隔48分钟后，再打开风机风向旋钮转向反风向，随后打开一号风机，间隔35分钟后打开二号风机。热处理过程中每隔1小时观察一次窑内温度和湿度，并根据除害处理所需要的温湿度，控制炉内火的大小。温、湿度应符合基准要求，低于基准，说明空气较湿，应打开或适当开大进、排气门；高于基准，说明空气干燥，应先关闭进、