Chap4 药物的含量测定方法

1、药物的含量测定药物的含量测定是指测定药物中所含的主成分的量，是指测定药物中所含的主成分的量，目的目的:判断药物的优劣。判断药物的优劣。定定义义第四章第四章 药物的含量测定方法药物的含量测定方法 化学分析法 重量分析容量分析含量测含量测定定仪器分析法仪器分析法效价测定效价测定（生物学法）（生物学法）可见紫外分光高效液相色谱法气相色谱法药物的含量测定药物的含量测定容量分容量分析法析法三种三种分析分析方法方法光谱分光谱分析法析法色谱分色谱分析法析法特点特点操作简单、结果准操作简单、结果准确，耐用性高，但确，耐用性高，但专属性差专属性差特点特点特点特点简便快速、灵敏度简便快速、灵敏度高，有一定的准确高

2、，有一定的准确度，但专属性稍差度，但专属性稍差灵敏度与专属性都高，灵敏度与专属性都高，有一定的准确度，但结有一定的准确度，但结果需要对照品果需要对照品适用于准确适用于准确度与精确度度与精确度要求较高的要求较高的样品测定样品测定适用于灵敏度适用于灵敏度要求较高，样要求较高，样本量较大的分本量较大的分析项目析项目适用于专适用于专属性和灵属性和灵敏度要求敏度要求较高的复较高的复杂样品杂样品第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点容量分析法容量分析法定定义义将已知浓度的滴定液，由滴定管滴加到被将已知浓度的滴定液，由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物测药物的溶液中，

3、直至滴定液与被测药物反应完全，然后根据滴定液消耗的浓度和反应完全，然后根据滴定液消耗的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系式计算出被消耗的体积，按化学计量关系式计算出被测药物的含量。被测药物的含量。亦称亦称滴定法滴定法特点特点1.方法简便易行：仪器价廉易得，操作简便快速方法简便易行：仪器价廉易得，操作简便快速2.方法耐用性高：影响测定的试验条件与环境因素少方法耐用性高：影响测定的试验条件与环境因素少3.测定结果准确：误差低于测定结果准确：误差低于0.2%4.方法专属性差：对相近杂质干扰缺少选择，适用方法专属性差：对相近杂质干扰缺少选择，适用于主成分含量较高的样品于主成分含量较高的样品(如原料药如

4、原料药)分析分析第一节第一节 定量分析方法定量分析方法容量分析法有容量分析法有关计算关计算例例:用碘量法测定维生素用碘量法测定维生素C的含量的含量时，时，中国药典中国药典规定：每规定：每1ml碘碘滴定液（滴定液（0.05mol/L）相当于）相当于8.806mg的维生素的维生素C（C2H8O6）T(T(滴定度滴定度):1ml):1ml滴定液滴定液(m mol/L)(m mol/L)相当于被测药物的毫克数相当于被测药物的毫克数dDcCbBaA被测药物被测药物 滴定液滴定液Mbam)ml/mg(T药物分药物分子量子量滴定液滴定液浓度浓度滴定度的滴定度的计算计算示例一 计算VitC的滴定度T碘量法测定

5、VitC含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/LHI2OHCIOHC6662686Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0511176.13=8.806(mg/ml)m=0.05mol/L11M=176.13示例二 异烟肼的滴定度溴酸钾法测定异烟肼含量M(C6H7N3O)=137.14，C溴酸钾溴酸钾=0.01667mol/LOH3KBr2N3NOHC3KBrO2ONHC3222563376Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0166732137.14=3.429(mg/ml)ab取用取用倍数倍数浓度校浓度校正因数正因数滴定滴定度度消耗消耗体积体积例例

6、:VitC的含量测定的含量测定:精密称取本品精密称取本品0.1332g,置锥形置锥形瓶中瓶中,加稀醋酸与新沸过的冷蒸馏水的混合液加稀醋酸与新沸过的冷蒸馏水的混合液(1:10)110ml, 加淀粉批示液加淀粉批示液1ml,用碘滴定液用碘滴定液(0.05014mol/L)滴定至蓝色滴定至蓝色,用去用去15.02ml,每每1ml的的碘液碘液(0.05mol/L)相当于相当于8.806mg C6H8O6，计算本计算本品是否符合药典规定的含量限度。药典规定含品是否符合药典规定的含量限度。药典规定含C6H8O6 不得低于不得低于99.0%。浓度校浓度校正因数正因数滴定滴定度度消耗消耗体积体积F=实际实际C

7、规定规定C计算步骤计算步骤=99.57%= 1又例 非那西丁含量测定 精密称取本品精密称取本品0.3630g加稀盐酸回流加稀盐酸回流1小时后，放冷，小时后，放冷，用亚硝酸钠滴定液用亚硝酸钠滴定液（0.1010mol/L）滴定，用去滴定，用去20.00ml。每。每1ml1ml亚硝酸钠液亚硝酸钠液（0.1mol/L）相当于相当于17.92mg的的C10H13O2N，请计算非那西丁的含量。，请计算非那西丁的含量。%72.9910010003630.01 .01010.000.2092.17%非那西丁需做空白试验的计算公式例例:萘普生的含量测定：精密称取本品萘普生的含量测定：精密称取本品0.4960g

8、，加甲醇，加甲醇45ml溶解后，再加水溶解后，再加水15ml与酚酞指示剂与酚酞指示剂3滴，用滴，用NaOH滴定液（滴定液（0.1078mol/L）滴定，同时用空白试验校正，求）滴定，同时用空白试验校正，求萘普生百分含量。萘普生百分含量。中国药典中国药典规定每规定每1ml NaOH滴定滴定液（液（0.1mol/L）相当于）相当于23.03mgC14H14O3。按干燥品计算，。按干燥品计算，含含C14H14O3不得少于不得少于98.5%。滴结果如下：。滴结果如下：V=19.85ml，V0=0.10ml，干燥失重，干燥失重=0.40%。光谱分析法光谱分析法药典药典收载收载紫外可见紫外可见分光度法分光

9、度法原子吸收分原子吸收分光光度法光光度法红外分光红外分光度法度法荧光分析荧光分析法法火焰光度火焰光度法法二、光谱分析法二、光谱分析法紫外可紫外可见分光见分光度法度法基于物质对紫外区基于物质对紫外区(200400nm)和可见光和可见光区区(400760nm)的单色的单色光辐射建立起来的光谱光辐射建立起来的光谱分析法分析法朗伯朗伯-比尔定律比尔定律基基础础EclTA1lg%11)100/(cmEAmlgc紫外可见紫外可见分光度法分光度法方法特方法特点与适点与适用范围用范围1.简便易行：本法使用的仪器价格比较低廉，操简便易行：本法使用的仪器价格比较低廉，操作简单，易于普及作简单，易于普及2.灵敏度高

10、：适用于低浓度试样分析灵敏度高：适用于低浓度试样分析3.准确度较高：本法误差在准确度较高：本法误差在2%5%之间，适用之间，适用于对测定结果的准确度要求较高的样品于对测定结果的准确度要求较高的样品4.专属性较差：本法通常不受一般杂质的干扰，专属性较差：本法通常不受一般杂质的干扰，但对结构相近的有关物质缺乏选择性。但对结构相近的有关物质缺乏选择性。本法比较少应用于本法比较少应用于原料药的含量测定，原料药的含量测定，可用于制剂的含量可用于制剂的含量测定，更多的应用测定，更多的应用于生物制剂的定量于生物制剂的定量检查检查本法紫外区须选用本法紫外区须选用石英比色皿，比色石英比色皿，比色皿一般为皿一般为

11、1cm，吸，吸光度在光度在0.30.7之之间为宜，选用最大间为宜，选用最大吸收光波长。吸收光波长。紫外可见分光度紫外可见分光度法含量测定方法法含量测定方法3种种方方法法对照品对照品比较法比较法吸收系吸收系数法数法计算光计算光度法度法(少用少用)紫外可见分光度紫外可见分光度法含量测定方法法含量测定方法1.对照品对照品比较法比较法分别配制供试品溶液和对照品溶液分别配制供试品溶液和对照品溶液, 所用溶剂量两者相所用溶剂量两者相同同,在规定的波长下测定吸光度在规定的波长下测定吸光度.按下式计算结果按下式计算结果;,;对应吸光度对照品溶液浓度供试品溶液浓度RxRxRRxxAACCACAC紫外可见分光度紫

12、外可见分光度法含量测定方法法含量测定方法2.吸收吸收系数法系数法吸收系数法吸收系数法:引入吸光系数引入吸光系数的含量计算方法的含量计算方法100EAC%1cm1xx含量含量% = 1%1cmE1%1cmE（ ）供供（ ）标标药典药典记载记载例例 已知已知VitB12在在361nm处的百分吸收系数为处的百分吸收系数为207，现测得其水溶液的吸收度为，现测得其水溶液的吸收度为0.414，吸收，吸收池厚度为池厚度为1cm，求其浓度。，求其浓度。解：解：C=A L1%1cmE= = 0.00200( ) 0.4142071g/100ml单位单位?例例精密称取精密称取VitB12供试品供试品25.0mg

13、，加水溶解并稀释，加水溶解并稀释制成制成1000mL，于，于1cm厚的吸收池中，在厚的吸收池中，在361nm处测处测得吸收度为得吸收度为0.507，已知其百分吸收系数为，已知其百分吸收系数为207，求其，求其百分含量。百分含量。解：解：C= m/V = 2510-3/1000（g/ml）= （g/100ml） 2.510- 3 1%1cmE( ) 供供= A / CLVitB12% = 1%1cmE1%1cmE（ ）供供（ ）标标= 202.8/207 = 97.97%= 0.507 / (2.510-31) 用用A算出（算出（ ）供供 ，再用其与已知（，再用其与已知（ ）标标 比值比值 1%

14、1cmE1%1cmE= 202.8例例用用UV法测定对乙酰氨基酚的含量：精密称取本品法测定对乙酰氨基酚的含量：精密称取本品0.0410g，置，置250ml量瓶中，加量瓶中，加0.4%NaOH溶液溶液50ml,溶解后溶解后,加水于刻度加水于刻度,摇匀。精密量取摇匀。精密量取5ml,置置100ml量瓶量瓶中中, 加加0.4%NaOH溶液溶液10ml,溶解后溶解后,加水至刻度加水至刻度,摇匀。摇匀。在在257nm处测得吸收度为处测得吸收度为0.580，按其百分吸收系数，按其百分吸收系数715计算，求其百分含量。计算，求其百分含量。解：解：C= m/V = （g/100ml） 8.210- 4 1%1

15、cmE( ) 供供= A / CLVitB12% = 1%1cmE1%1cmE（ ）供供（ ）标标= 707.3/715 = 98.93%= 0.580 / 8.210-4= 707.3特点： 灵敏度高，可达10-1010-12g/ml 要求低浓度下测定 须做空白测定 荧光弱的药物可衍生化后测定( (二二) )荧光分析法荧光分析法rbrrxbxxCRRRRC( (三三) )色谱分析法色谱分析法1.HPLC1.1 内标法 RRssC/AC/Af 校正因子As：内标物质峰面积或者峰高AR: 对照品的峰面积或者峰高Cs: 内标物质浓度CR：对照品浓度两步两步: (1)测测f; (2)测含量测含量(1

16、)测测f (用标准品与内标物用标准品与内标物)SSxxC/AAf)C(含量As：内标物质峰面积或者峰高Ax: 供试品的峰面积或者峰高Cs: 内标物质浓度f：校正因子(2)测含量测含量(用样品与内标物用样品与内标物)示例一 炔诺酮的含量测定 照高效液相色谱法照高效液相色谱法( (附录附录DD测定测定) )色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用用十八烷基硅烷键十八烷基硅烷键合硅胶合硅胶为填充剂；以甲醇为填充剂；以甲醇- -水水(65:35)(65:35)为流动相，为流动相，检测波长为检测波长为244nm244nm。理论塔板数理论塔板数按炔诺酮峰计算按炔诺酮峰计算不低于不低于15001

17、500，炔诺酮峰与内标物质峰的，炔诺酮峰与内标物质峰的分离度分离度及及主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度均应符主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度均应符合要求。合要求。内标溶液的制备内标溶液的制备 取黄体酮约取黄体酮约25mg25mg，精密称定，精密称定，置置25ml25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。测定法测定法 取本品约取本品约25mg25mg，精密称定，置，精密称定，置25ml25ml量瓶中，量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液液2ml2ml与内标溶液与内标溶液3ml3ml，置，置10ml10

18、ml量瓶中，加甲醇稀量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取释至刻度，摇匀，取2020l l注入液相色谱仪，记录注入液相色谱仪，记录色谱仪，记录色谱图；另取炔诺酮对照品适量，色谱仪，记录色谱图；另取炔诺酮对照品适量，精密称定，同法测定。按内标法以峰面积计算，精密称定，同法测定。按内标法以峰面积计算，即得。即得。对照品对照品样品测得量WA/A/ArrssA例例HPLC法测定磺胺嘧啶的含量法测定磺胺嘧啶的含量对照品对照品+内标溶液配制：精密称取对照品内标溶液配制：精密称取对照品50.0mg，置，置50ml量瓶量瓶中，加甲醇稀释至刻度中，加甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取摇匀。精密量取5ml,置置25ml量

19、瓶中量瓶中, 精密精密加内标溶液加内标溶液(0.20mg/ml)5ml,加流动相至刻度加流动相至刻度,摇匀。摇匀。供试品供试品+内标溶液配制：精密称取本品内标溶液配制：精密称取本品50.5mg，照上法配制。，照上法配制。取上述两种溶液各取上述两种溶液各10l进样，测得对照品和内标峰分别为进样，测得对照品和内标峰分别为1350和和1040，供试品峰和内标峰分别为，供试品峰和内标峰分别为1313和和1013。求。求SD的含量。的含量。解：由于对照品和供试品稀释倍数相同，所以直接按质量代解：由于对照品和供试品稀释倍数相同，所以直接按质量代替浓度计算替浓度计算As/CsAr/mr=f=As/CsAx/

20、mx1040/0.201350/50.0=f=1013/0.201313/mx解之解之,得得:mx=49.924(mg)SD%=49.924/50.5=98.86%2.外标法外标法含量(Cx)=CRAxARRRssC/AC/Af 校正因子SSxxC/AAf)C(含量(二二) GC内标法内标法不经有机破坏经有机破坏直接测定配位滴定法氧化还原滴定法水解后测定酸水解碱水解经还原分解后测定湿法破坏凯氏定氮法干法破坏高温灼烧法氧瓶燃烧法( (一一) )、直接测定法、直接测定法 葡萄糖酸钙葡萄糖酸钙 EDTAEDTA配位滴定配位滴定 富马酸亚铁富马酸亚铁 邻二氮菲邻二氮菲- -硫酸铈滴定硫酸铈滴定 葡萄酸

21、锑钠葡萄酸锑钠 间接碘量法间接碘量法( (二二) )、经水解后测定法、经水解后测定法适用范围：金属原子不直接于碳原子相连或某些C-M键结合不牢固的有机金属药物。1 1、碱水解法、碱水解法344332334)(NONHAgSCNSCNNHAgNO NaNOAgClAgNONaCl O2HHCOONa3NaClCO)(CHNaOHOHCHCCCl3223 回回流流三氯叔丁醇银量法返滴定2 2、酸水解法、酸水解法适用范围：含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物。十一烯酸氯化锌十一烯酸锌稀盐酸EDTA配位滴定( (三三) )、经还原分解后测定法、经还原分解后测定法适用范围：碘原子直接与芳环连接的

22、含碘有机化合物。COOHIIINHCOCH3CH3COHN+11NaOH+COOHNH2H2N+ +2CH3COONa+3Na2ZnO2+NaI+AgNO3AgI3Zn3NaOH3H2O+ NaNO3回流泛影酸泛影酸3NaI3NaI三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 含氮、硫、硫柳汞、氯化钠的生物制品、含氮有机合成药物测定的前处理和生物制品中金属元素测定时生物基质的去除。u H2SO4-HNO3u H2SO4-HClO4u H2SO4-H2SO4u HNO3-KMnO4分解剂/消化剂辅助分解剂凯氏定氮法测定含有氨基和酰胺结测定含有氨基和酰胺结构的药物结构构的药物结构( (一一)

23、)湿法破坏湿法破坏原 理 将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有机结构被中有机结构被“消化消化”成成COCO2 2和和H H2 2O O，有机结合的氮转，有机结合的氮转化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，经碱化经碱化后后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。n 常量法含氮量 2530mgn 半微量法含氮量 1.02.0mg凯氏烧瓶K2SO4( (提高消解温度提高

24、消解温度) )CuSO4( (加快消解速度加快消解速度) )硫酸硫酸碱液碱液硼酸硼酸( (吸收液吸收液) )甲基红甲基红- -溴甲酚绿指示剂溴甲酚绿指示剂硫酸滴定空白校正先用强先用强酸水解酸水解再用含碱硫代硫再用含碱硫代硫酸钠中和酸钠中和最后用碱释放出氨最后用碱释放出氨气气 ，并蒸馏出之，并蒸馏出之( (二二) )干法破坏干法破坏1.高温灼烧法高温灼烧法用于含卤素、含磷药物和药物中砷盐的检查。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。2.氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法 系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结

25、构部分彻底闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为分解为COCO2 2和和H H2 2O O，待测元素根据电负性的不同转化为不，待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性质和存在方式选择方法进行分析。其性质和存在方式选择方法进行分析。燃烧时待测物转化成不同价态燃烧时待测物转化成不同价态的无机物以供测定的无机物以供测定 滤纸包滤纸包装样品装样品药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则药物稳定性试验指导原则缓释、控释制剂指导原则微囊、微球与脂质体制剂指导原则细菌内毒素检查法应用指导原则目的： 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求效能指标： 评价分析方法的尺度评价分析方法的尺度 效能指标包括: 精密度精密度, , 准确度准确度, , 检测限检测限, ,定量限定量限, ,选择性选择性, , 线性与线性与范围范围, , 耐用性耐用性一、准确度（一、准确度（accuracy） 系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。( (一一) )含量测定方法含量测定方法%100(%)%100(%)加入量本底量测得量回收率加入量测得量回收率回收率(Recovery)回收试验加样回收试验33，至少9个测定结果二、精密度二、精密度