中药川芎中川芎嗪提取工艺优化的探索

1、中药川芎中川芎嗪提取工艺优化的探索                             作者：马琳 王秀杰，张坚，赵启铎，陈志娟 【摘要】  目的考查川芎药材有效成分川芎嗪提取的影响因素，优化提取工艺。方法采用正交实验对川芎最佳提取工艺进行考察，以HPLC条件为 Kromacil C18（150

2、 mm×4.6 mm，5m）色谱柱为分析柱，以甲醇-1%醋酸水溶液（2575）为流动相，流速1.0 ml·min-1，检测波长280 nm，柱温为室温作为优化分析手段。结果川芎的最佳提取工艺：80%乙醇（含5%乙酸）12倍量，超声提取2次，45 min/次。盐酸川芎嗪在2.0260.6 g/ ml范围内呈良好的线性关系，回归方程为Y=20 205X-11 452，r=1.00平均回收率为 101.70，RSD=2.79%。结论该实验对川芎药材中的有效成分川芎嗪的提取效率高，检测快速准确。在此HPLC条件下川芎嗪和其它成分之间能得到很好的分离。 【关键词】  川芎

3、川芎嗪 高效液相色谱Abstract：ObjectiveTo take the factors which influence Rhizoma huanxiong's extraction into account and optimize the extractive craft.MethodsTo adopt crosscut experiment and explore the best extractive craft. The experiment was based on HPLC whose condition contained Kromacil C18（150mm&#

4、215;4.6mm，5m），the flow phase which methanol to acetic acid was 25 to 75,velocity of flow with 1.0ml per min,checking wavelengh with 280nm and the temperature with room temperature. ResultsRhizoma Chuanxiong's best extractive craft were as follows: ethanol 80%（include 5% acetic acid） and 12 times

5、' quantity. Extraction method was ultrasonic wave with 2 times and 45min per time. Tetramethylpyrazine had good linearity relationship at the range of 2.0260.6g/ ml. Regression equation was Y=20 205X-11 452, r=1.00. Average reclaim rate was 101.70，RSD=2.79%. ConclusionThe method is convenient an

6、d great efficient. Under this condition of chromatogram tetramethylpyrazine can be obtained satisfying separation.Key wordsRhizoma Chuanxiong；  Tetramethylpyrazine ；  HPLC中药川芎(Rhizoma Chuanxiong)为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎。具有活血、行气及止痛的功效。临床上广泛用于头痛、胸肋疼痛、经闭腹痛、冠心病、跌打损伤等。其有效成分是生物碱类

7、以及酚酸类。本实验有关14，对川芎中生物碱类有效成分川芎嗪（tetramethylpyrazine）的最佳提取工艺进行研究，寻找提取效率高、快速准确的提取方法并使其在HPLC检测条件下，有效成分川芎嗪和其它成分之间能得到很好的分离。1  器材1.1  仪器岛津LC-6A高效液相色谱系统包括LC-6A恒流泵、SPD-6AV紫外检测器、Anastar色谱工作站Kromacil C18色谱柱（150mm×4.6mm，5m），天津市色谱技术公司；超声波提取器（KQ2200）；天平（Mettler Toledo）。1     

8、0;   1.2  材料川芎药材购于河北安国药材市场，经鉴定为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎；盐酸川芎嗪标准品购于药品生物制品检定所（批号110817-200305）；甲醇（色谱纯）；重蒸水。2  方法2.1  色谱条件以Kromacil C18（150 mm×4.6 mm，5 m）色谱柱为分析柱，以甲醇-1%醋酸水溶液（2575）为流动相，流速1.0 ml·min-1，检测波长280 nm，柱温为室温，进样量20 l。2.2  标准品的制备精密称定川芎嗪1

9、0.1 mg，置于25 ml的棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。制备成川芎嗪标准品的浓度为404 g/ ml。2.3  线性关系考察精密吸取川芎嗪标准品溶液0.05，0.1，0.2，0.3，0.5，1，1.5 ml，分别置于10 ml棕色瓶中，用甲醇稀释至刻度。制成不同浓度的标准液。在上述“2.1”项色谱条件下，进样20 l ，进行检测。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标得到线性回归方程为： Y=20 205X-11 452 ，r=1.00。盐酸川芎嗪在2.0260.6 g/ ml浓度范围内呈良好的线性关系.2.4  提取溶剂量、时间、次数和溶剂浓度的考察取川芎粉末5 g，超声提

10、取。对溶剂量(8，10，12倍)、时间（15，30，45 min）、次数(1，2，3)和溶剂浓度(50%，80%，95%)考察。平行实验两次。提取液过滤，蒸干，甲醇定容至50 ml，0.45m微孔滤膜过滤。HPLC检测，川芎嗪的含量。3  结果3.1  精密度实验取同一标准品溶液在上述HPLC条件下连续进样5次，测得峰面积，计算RSD=0.40%。3.2  系统适应性在上述HPLC条件下,川芎嗪和样品中和其它峰分离良好。结果见图12。3.3  溶剂浓度、倍数、时间、次数考察结果见表12。表1  川芎嗪提取工艺统计结果（略）表2  方差

11、分析（略）经方差分析得：A，B，C，D有显著差异，结果选择A2B2C3D3。即12倍80%乙醇（含5%乙酸）超声提取2次，45 min/次。3.4  重现性实验称取川芎粉末5 g，按照最佳提取工艺进行提取，在上述高效液相条件下进样，测定。RSD=1.43%。3.5  加样回收率实验称取已知含量的川芎药材粉末5g按上述色谱条件进行测定。结果见表3。表3  川芎嗪加样回收率（略）3.6  稳定性实验称取川芎粉末药材5.0 g，按最佳提取工艺提取。在上述HPLC条件下于0，1，2，12，24 h进样，RSD=2.29%。由此表明川芎有效成分川芎嗪在24 h以内是稳定的。4  结论综合上述实验结果可得出，川芎药材粉在12倍80%乙醇（含5%乙酸），超声提取2次，45 min/次，提取效率最高。在川芎嗪的提取时，不加乙酸放置3 d后检测不到川芎嗪的峰。考虑在酸性环境下提取比较合适，因此在提取溶剂中均加有5%的乙酸。在检测川芎有效成分时曾试用C18（250 mm×4.6 mm，5m）的柱子，但是保留时间过长，而且峰是严重的拖尾峰，所以改用C18（150 mm×4.6 mm，5m）的柱子。【】  1葛莉，王小荣. 川芎中有效成分的不同提取