流感病毒疫苗佐剂研究现状.docx

1、流感病毒疫苗佐剂研究现状王旻钮I,李佳峰，张家铭金红，（1.中国医科大学临床医学七年制，辽宁沈阳110001；2.中国医科大学基础医学院病原生物学教研室,辽宁沈阳110001）摘要流行性感冒是一类由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。其发病率高、传染性强，因此作为最佳预防手段的流感疫苗关注度日益提升。而佐剂的使用可提升流感疫苗的效果并减少相应抗原的使用量，因此成为研究热点。就应用于流感疫苗中佐剂的研究现状做一综述。关键词佐剂；流感疫苗；安全性；有效性中图分类号Q939.93；R373文献标识玛A文章编号1005-7021（2013）06-0084-04doi：10.3969/j.issn.1005

2、-7021.2013.06.016CurrentSituationofAdjuvantAppliedinInfluenzaVaccinesWANGMin-yu*,LIJia-feng,ZHANGJia-ming1,JINHong2(1.J-YeariProgramofClin.Med.,2.Teach.&Res.Div.ofPaihog.Riol.,Coll.ofBasicMed.,ChinaMed.Univ.,Shenyang1100()1)AbstractInfluenzaisakindofacuterespiratorytractinfectiousdiseasescausedbyinf

3、luenzavirus.Ithashighmorbidityaswellasinfectivity.Thus,asthemosteffectivepreventionandtreatmentmethod,influenzavaccinecatchesmoreandmoreconcernment.Theuseofadjuvantcanpromotetheeffectofinfluenzavaccineaswellasreducetheamountofrelevantantigen.Therefore,adjuvanthasbecomeahotspotinresearchfield.Thecurr

4、entsituationofadjuvantappliedininfluenzavaccinewassummarizedinthispaper.Keywordsadjuvant；influenzavaccine；security;validity基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金（20102104110018）作者简介:王旻饪女，中国医科大学96期七年制在波。E-mail：wangminyu33O4通讯作者。女，教授，博士生导师。研究方向为流感病毒防御机制及方法研究。E-mail：jinhong诲收稿日期：2013田6-28；修回日期：20134）7-09流行性感冒（Influenza,

5、简称流感）是一类由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其发病率高，传染性强，在其大爆发的年份仅儿童感染率就高达23%48%。流感疫苗被认为是降低流感发病率及死亡率最有效的方法。因流感疫苗需求量大，流感病毒变异性高，所以研制抗原节约性、高效性、交叉免疫性三者并重的流感疫苗十分必要。研究中发现,使用佐剂可降低流感疫苗病毒抗原的使用量并增强机体对此种病毒的免疫应答反应，另有部分佐剂可提升机体对流感病毒其他亚型的免疫应答佐剂因其对流感疫苗的强大辅助作用成为众多机构的研究热点。近年来，新型佐剂层出不穷,本文将对流感疫苗中使用的佐剂研究现状做一综述。1流感疫苗佐剂11铝佐剂铝佐剂是目前使用最广泛的疫苗佐剂。1

6、926年免疫佐剂概念刚提出之时铝佐剂已被应用于白喉外毒素疫苗中0】，具有联合其他佐剂增强免疫应答的特性,利用此特性研制出许多新型佐剂如，明矶、CpGODN、昆虫细胞中表达的rHA三者制成的混合剂【。GongM等【在研究中发现，三者混合剂的佐剂活性远高于同样实验条件下明矶的佐剂活性。研究中实验人员以10只小鼠为一组，用低剂量rHA（0.625必/只），低剂量rHA与明矶、低剂量rHA与CpG-ODN、或低剂量rHA、明矶和CpG-ODN合剂给受试小鼠注射2次，并于2周后给上述处理过的小鼠每只注射lAo的A/H1N1流感病毒。结果表明,70%80%仅注射明矶与低剂量rHA合剂的小鼠死亡,注射含三者

7、混合佐剂的小鼠虽然体重有所下降但均存活。同时,rHA、明矶和CpG-ODN合剂可针对不同亚型的A/H5N1禽流感病毒产生中和抗体，因而延缓了小鼠死亡时间，可控制大流行的趋势，为有针对性疫苗的研制争取了时间。如果此特性可运用到人流感疫苗制备中则能减少流感疫苗研究时间68周，达到减少流感大流行的目的m】。此外，三者同时使用有显著免疫增强作用，并可大幅度节约抗原。微中和试验表明，0.625jigrHA、明矶及CpG-ODN的合剂可诱导的抗体数量是2.5jig裂解病毒的46倍。由此可见,rHA、明矶和CpG-ODN合剂具有良好的佐剂活性，且可使小鼠对不同亚型的A/H5NI禽流感病毒产生抗体，如可将上述

8、优点运用于人流感疫苗制备中将有利于流感的预防和治疗。1.2O/W乳剂有佐剂活性的0/W乳剂主要是鲨烯类O/W乳剂。应用于流感疫苗中的佐剂主要有3种：MF59、AS03、SP01。AS03是一种来源于维生素E的O/W乳剂，与MF59相似，但含AS03流感疫苗对机体的保护性、安全性及使用范围均逊于含MF59流感疫苗。MF59由可降解油类及鲨烯组成闷，其现已广泛应用于各类的流感疫苗中。SP01由鲨稀、聚氧乙烯篦麻油等组成。在实验中证明对小鼠模型有效，具有MF59及AS03不具备的优点。由于流感病毒经由黏膜表面感染，所以防止黏膜表面感染十分必要，但多数佐剂无法辅助流感疫苗达到此目的,SP01佐剂的出现

9、使这一问题得到很好的解决句。荧光标记法表明，通过滴鼻法注入含SP01流感疫苗后,SP01佐剂可延长抗原与宿主反应时间至48h及以上。在分析鼻部黏膜处抗原平均扩散速率时发现，使用SP01为佐剂的流感疫苗平均扩散速率为3.34cps,而未加入SP01的同种疫苗平均扩散速率为0.997cps。上述结果证明SP01可辅助流感疫苗有效防止黏膜感染。在选择疫苗注射方法时发现，通过滴鼻注入含SP01的流感疫苗效果最佳，其不仅可诱导良好的黏膜免疫，同时也可诱导出足够的血清抗体。如果可大规模应用于人流感病毒疫苗制备中，不仅可提高疫苗的免疫效果,也可减轻皮下注射为患者带来的痛苦，并降低针头等医用设备污染其他病原的

10、危险性，可见SP01佐剂有良好的应用前景C13生物源性佐剂近年来，新型生物源性佐剂层出不穷。如，多糖类的Advax(,5)、APS和sEPS混合剂,醇类的壳糖醇”、多烯紫杉醇赋，脂类的阳离子脂质体K及其与DNA混合物(JVRS-IOOV20】，枯草杆菌杀伤性抱子】及干扰素与人参二醇皂试合剂和病毒颗粒刃。上述佐剂虽然来源及理化性质不同，但含上述物质的疫苗在实验动物中安全性、有效性俱佳l，5-201o其中病毒颗粒佐剂受到更多的关注和应用。病毒颗粒佐剂是许多工业化国家尤其是欧洲唯-批准使用的佐剂。病毒颗粒佐剂由磷脂组成,该磷脂可自发形成与流感病毒NA和HA相锚定的囊泡，从而发挥作用。但病毒颗粒佐剂疫

11、苗(Virosonie-adjuvantedvaccine,VAV)效果有时不稳定，偶尔出现对乙型流感病毒的预防效果弱于甲型流感病毒的情况。至今为止唯一的临床跟踪调查表明，VAV比普通的三价流感灭活疫苗(Trivalentinactivatedinfluenza,TIV)有更好的免疫原性，且可用于慢性病患者中。如HIV患者，虽然H1V病毒可大幅降低自身的免疫系统功能，但在使用VAV后并未在血清中发现HIV-1RNA量及其病毒前体DNA量的提升，说明该疫苗并未增加HIV复制，也未激活T细胞，为艾滋病患者流感的预防带来了希望。在对VAV功效的进一步研究中发现,VAV可减轻上呼吸道感染等症状旦对儿童

12、流感的预防有一定功效。VAV的全球性评估表明，VAV与TIV相比，有相似或更好的安全性及免疫原性此外，由于其本身含卵蛋白极少,鸡蛋过敏者同样可以使用加入该种佐剂制得的疫苗。由此可见,VAV现在虽然应用范围不广、临床试验不完备，但其有诸多优点，如若进一步推广定会有很大的应用空间和发展价值。2流感疫苗佐剂的安全问题2.1短期可愈性不良反应虽然佐剂得到了很大发展，但安全问题依然阻碍其广泛应用)。在众多安全问题中，注射含佐剂流感疫苗后出现的短期可愈性不良反应最为常见，如，红斑、硬结等。现今使用最广泛的铝佐剂和MF59也无法避免地引起部分人群的短期可愈性不良反应。铝佐剂虽然是唯一得到FDA认证的佐剂，但

13、在注射含有该佐剂的流感疫苗后部分人群于注射部位出现严重的局部反应。如，红斑、硬结、肉芽肿性炎症等。以MF59为佐剂使用最为广泛的是Fluad流感疫苗。在临床实验中发现,相对于未加入佐剂的疫苗，Fluad流感疫苗更易出现短期可愈性局部不良反应。但受试者注射Fluad流感疫苗后极少出现严重不良反应)。新型佐剂在临床试验中同样出现过类似情况，如WEC25】。WEC是来源于无毒成分的0/W乳剂。在对199名志愿者参与的临床一期实验结果进行分析时发现，以滴鼻方式注入含WSEC流感疫苗引起的不良反应持续时间约为1d,其中轻度不良反应占64%,中度不良反应占31%,重度不良反应占5%。通过统计学方法分析确定

14、W805EC要不良反应为暂时性咽喉疼痛。虽然上述不良反应持续时间不长且可自愈，但给注射者带来了不适并影响了佐剂的发展和应用C2.2严重难愈性不良反应注射含佐剂流感疫苗后，部分实验动物中出现了严重难愈性不良反应,包括死亡，如皂素类佐剂ISC0MoISCOM主要有2种，分别是ISCOM和ISC0MATR1Xtmo此类佐剂以胆固醇、磷脂酰胆诚、皂素等为有效成分。在以小鼠为动物模型研究以1SCOM或ISCOMATRIX为佐剂流感疫苗的安全性及有效性的过程中发现，注射此种流感疫苗后受试小鼠常常死亡。就此问题进-步研究时，对ISCOM中皂素来源的主要成分Qui】A进行了分析。QuilA由QHA、QHB和Q

15、HC三者组成。试验表明，QHC有很大毒性,是造成受试小鼠死亡的主要原因。深入研究发现JSCON。与结合蛋白CTA1-DD混合物可有效降低受试小鼠死亡率,ISCOM致死性问题因此得到解决街。但注射含佐剂流感疫苗后引起的严重难愈性不良反应的问题并未全部解决。如，注射含生物源性佐剂E.coilLT的流感疫苗后出现的面部神经麻痹等因而注射含佐剂流感疫苗后引起的严重难愈性不良反应仍是阻碍佐剂临床应用的严峻问题，亟待解决。2.3自身免疫性疾病已有学者怀疑佐剂应用于流感疫苗中会引起自身免疫性疾病。IsaiA等习对欧洲药监局2009年10月1日至2010年12月31日获得的数据进行了分析欧洲药监局数据表明，上

16、述时间内注射2009A/H1N1流感疫苗的人群中有50221例出现不良反应，其中314例注射该疫苗后出现自身免疫病。通过数据分析发现,276例注射含佐剂流感疫苗后出现自身免疫病，占总数87.9%0对自身免疫病类型及患病人数统计中发现,125例为格林-巴利综合症(Guillain-BarreSyndrome,GBS),28例为自发性血小板减少性紫瘢(idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP),10例为急性传染性脑脊髓膜炎(acutedisseminatedencephalomyelitis,ADEM)o但运用统计学方法分析结果后发现,使用不含佐剂流感疫苗后出现自

17、身免疫病的概率为0.37%，而使用含有佐剂流感疫苗后出现自身免疫病的概率为0.26%，说明使用流感疫苗后出现的自身免疫病与佐剂的使用无关。但IsaiA等W使用的数据存在局限性。第一，数据不够精确有重复统计的可能，造成注射流感疫苗后出现自身免疫病的例数过少;第二，数据缺乏国家与国家，地区与地区之间的比较。所以，含佐剂流感疫苗的使用是否与自身免疫病有关仍需进一步验证3展望综上所述，佐剂的应用可降低流感疫苗抗原的使用量并增强机体对抗原的免疫应答、部分佐剂更可提升疫苗与流感病毒其他亚型的交叉免疫反应。已有部分佐剂应用于临床实际工作中，如铝佐剂。但佐剂的安全问题及大量未清的机制仍限制其大规模使用。如何完

18、善佐剂的机制，攻克其安全问题成为研究热点。众多机构仍在努力探索以求更大程度地发挥佐剂的功效达到防治流感的目的。参考文献：1EspositoS,PrincipiN.DifferentinfluenzavaccineformulationsandadjuvantsforchildhoodinfluenzavaccinalionJ.Vaccine,2011,29(43):7535-754!.2BcmstcinDI,EdwardsKM,DekkerCL,etal.EflectsofadjuvantsonthesafetyandimmunogenicityofanavianinfluenzaH5N1va

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