红色三叶草提取物的控油效果及测试方法研究.docx

1、红色三叶草提取物的控油效果及测试方法研究冒诗楠'，程党党'，莫隽颖2,王飞飞2（1.上海际研生物医药开发有限公司，上海201702；2.云南贝泰妮生物科技集团股份有限公司，云南昆明650106）摘要：探讨提取自红色三叶草中活性物的控油功效。通过自我评估和油脂测试筛选受试人员，最终选取7名受试者进行为期4周的半脸测试。采集使用前后的皮肤油脂、水分数据及面部粪咋咻、原咋哧图像，进行统计分析。结果表明，使用4周后，受试者皮肤油脂分泌显著下降，面部粪叶咻和原口卜噂的个数及面积也明显减少，同时皮肤表面含水量数值有所增加，说明该活性物质具有良好的控油效果和调节水汕平衡的作用。关键词：控油：

2、油性肌肤；油脂测试；水分测试：VisiaCR中图分类号：TQ658文献标识码：A文章编号：1006-7264（2021）11-030-04DOI：10.3969/j.issn.1006-7264.2021.11.007收稿日期:2021-08-09作者简介：日诗楠（1992-）.女.江苏人.硕上研究生。打究表明，油性肌肤见于男性及部分油脂旺盛的女打升性面部，致使该类人群备受困扰。人类皮脂腺I中的氨肽购N（APN）能够影响细胞的基本代谢反应和细胞分化过程回，AnjaThielitz等利用皮脂腺细胞SZ95验证了抑制APN的活性能够影响细胞分化，最终抑制皮脂分泌过多向。类黄酮广泛存在于自然界植物中

3、，主要包括黄酮、异黄酮、黄酮醇等，Parellada等研先发现其能够抑制皮脂腺细胞中APN的活性。红色三叶草，又称为红车轴草，经研究发现含有蛋白质、氨基酸、糖类和维生素、黄阳类物质等，其中黄酮类物质包括异黄酮、黄酮醇、黄酮。因此，红色三叶草提取物有望成为新一代的控油活性物。为研究红色三叶草中活性提取物的控油效果，对受试者进行为期4周的双盲半脸测试，测量使用前后面部皮肤表面油脂、皮肤含水量以及皮肤口卜1琳图像，结合受试者自我评价进行控油功效分析，期望能够为控油功效测试提供新的思路。1实验部分1.1产品与仪器对照组产品：内部自制乳液，除基础配方框架外，未添加任何功效成分。测试组产品：在对照组乳液基

4、础匕添加控油活性成分,添加比例为2%。该活性成分提取于红色三叶草花部，主要作用为促进角化细胞新生、抑制皮脂腺细胞皮脂生成和促进皮肤紧致。所有受试者早晚各使用1次，用量参照各自FI常护肤产品用量。根据要求，产品将统一进行白包处理，不添加任何明显标识，以排除测试者的主观意识干扰。测试过程中配合使用无任何功效成分的洁而乳及柔肤水（市售，批号为181005S1J和181123S1J）°CutometerMPA580、皮肤油脂测试探头SebumeterSM8I5、皮肤水分测试探头ComeometerCM825»Courage+Khazaka.德国：VisiaCR,Canfield,美

5、国，Image-Pro图像分析软件，MediaCybcmciicso1.2受试者选择入选标准：2035周岁，自我评估为油性肌肤，且油脂分泌量符合要求。测试阶段，无任何皮肤疾病或皮肤敏感现象、未服用任何能够影响实验的药物；测试前1个月内未使用任何控油类产品（防晒类、彩妆类除外）、未参加任何同类型测试。能严格避守试验方法的要求，签署知情同意Ih剔除标准：测试过程中出现不良反应或未遵守试验要求者。油脂分泌量认定：规定入选范围为：皮肤油脂测试显示前额汕脂量>200,两颊油脂量N150。最终筛选受试者人数为7人，其中男性为5人，女性2人。1.3实验方法测试基于面部控油测试前、后的对比实验，采用双盲

6、对比测试。受试者使用产品4周，每日早晚使用，期间仅配合使用无功效成分的洁面及柔肤水。因面部肌肤中，前额、鼻子、腮部油脂较多，本次测试选取受试者前额、两颊部位作为测试区域。受试者第0、1、2、4周进行回访。回访须在同时段进行，且回访前1日及测试当日忌剧烈运动、熬夜、食用油炸等高热量食物。回访当日，清晨按要求使用产品后，不得使用任何物品或身体部位触碰面部肌肤。测试当日，提前进入恒温恒湿环境中（温度（22±1）'C,相对湿度55%±5%,静坐30min左右，通过皮肤油脂测试探头ScbumctcrSM815测试受试者皮肤表面油脂分泌变化清况；通过皮肤水分测试探头Corneo

7、meterCM825测黄皮肤水分数值：通过Visia-CR采集面部照片，得到受试者面部叶哧图像，运用IPP软件进行分析处理。1.4分析方法皮肤油脂和皮肤含水量变化率按公式（1）计算：7测试值一丁测试值变化率碱试音XI00%其中，几和7；分别为首次使用前和使用第n周的测试数据平均值。受试者自我评价：使用4周后，受试者对该控油乳液使用前后的面部油脂分泌情况进行打分。分值为17分，分值越大，说明面部油脂分泌较少。数据分析采用Excel表格进行平均值、标准偏差验证：采用SPSS22.0对所得数据进行检验分析。当PV0.05时，认为测试结果存在显著性差异。2结果与讨论2.1皮肤表面油脂及含水量变化油脂测

8、试采用世界公认的Sebumeter方法。该测试探头基于光度计原理，采用特定的消光胶带吸收面部肌肤上油脂从而使胶带呈现半透明状，此时胶带的透光量增大，通过光学转换能够得出油脂含量数值图I为受试者使用控油乳液4周内的皮肤表面油脂变化情况。由于测试在夏季进行，气候炎热，故对照组在测试期间皮肤油脂分泌略有增加。而测试组由于活性物的调节作能够显著降低皮肤油脂分泌。ATIAT2AT4对照组测试组图1皮肤表而油脂变化图（PV0.05）Fig.lVariationofsk.ngrease5.000.00-5.00-10.00-15.00-20.00皮肤水分测试探头采用电容法原理，能够快速方便的删试皮肤表皮含水

9、量。通常来设，数值越大，皮肤含水量越副。图2为测试4周后的皮肤水分变化图。从图中数值来看，测试组皮肤含水量较对照组有明显升高，这说明该活性物不仅具有明显的控油效果，还能提高皮肤表层含水量。但因为P>0.05,统计学上无显著性差异，此结果不排除存在实验误差的可能性。对瞭组测试组图2皮肤水分变化图（P>0.05）F:g.2Variationofskinmoisture22座疮丙酸杆曲抑制实验2.2.1抑菌MIC实验选取并复苏与瘗疮相关的病原菌瘗疮丙酸杆菌（ATCC11827）,通过计数、稀释等操作，配制特定浓度的通悬液（Aeo=O.25左右），配制完成后的菌悬液置于4C环境下贮存备用。

10、在厌氧条件下，将红色三叶草提取物通过倍半稀样方法加入1%PBS溶液配制成特定浓度（1%、2%、4%、8%、16%）的测试样，试管中加入2n】L测试样及2mL脑心浸液培养基（BHI）,并加入（）.2mL菌悬液，确保每一管中瘗疮内酸杆菌的浓度在IXKXKrCFU/mLo设立阳性及阴性对照组，在37C条件下培养96h,通过浊度对比，在加入为澄清条件下的测试液最低浓度即为红色三叶草提取物的抑菌MICo通过浊度对比可以清楚的看到，在加入测试液最高浓度为16%以及最低浓度为1%时，试管仍是浑浊状态。由此可知，在配方添加量2%时，红色三叶草提取物不具备抑制座疮丙酸杆菌生长的能力。2.2.2产品抑菌实验在厌氧

11、条件下，设立2组测试料体：对照组（自制乳液）、测试组（自制乳液+2%红色三叶草提取物）。取对照组、测试组各50g,加入0.5mL菌悬液，混合均匀，并保证每组测试料体中瘗疮丙酸杆菌的浓度在IX6XICTCFU/mL,混合培养96h后，保证瘗疮丙酸杆菌全部复苏传代完成。上述两组测试料体各取0.1g,均匀涂布于BHI固体培养基上，观察2组料体中瘗疮丙酸杆曲的生长情况。从图3能够清晰的看到测试组并没有因为额外加入2%的红色三叶草提取物而导致菌落数有数量级的差别。由此可以证明，添加有2%红色三叶草提取物的测试样品不具备抑制瘗疮丙酸杆菌生长的能力。图3菌落生长对比图I'g3Comparativec

12、hartofbacterialcoonies23皮肤叶I琳前后变化油性肌肤因为皮脂分泌较多，毛囊口附近往往伴随较多的细菌，如瘗疮丙酸杆菌。瘗疮丙酸杆菌为厌氧菌，可以产生内源性叶R林（主要为粪蜂噂III）聚集于细胞膜内。粪n卜咻原经过脱梭脱氢等一系列人体细胞内的化学反应，最终生成原口卜I琳IX叫窄带蓝光是波长在407420nm可见光，能够满足内源性仆。林所敏感的415nm波长光谱，可用于检测面部粪叶【琳III和原口卜噂IX的前后变化状态"虬使用窄带蓝光拍摄面部叶咻图像，口卜噂在窄带蓝光作用下呈现近圆的白点，在未服用或使用影响皮肤n卜嗽分泌的药物或化妆品的前提下，考察其分布状态可以侧而反

13、应皮肤的油脂分泌情况。运用口卜咻个数来反馈面部皮肤油脂粒的数量，而叶噂面积则能够侧面反应皮肤油脂分泌的多少，在无其他影响因素的情况下，2个指标都能够体现皮肤油脂分泌的情况。图4、图5分别为受试者面部测试区域的粪卜噂Ill和原仆噂IX的前后变化图。从图中可以看出，对照组的2种叶咻在测试周期内均无明显变化，而测试组2种叶噂的个数和面积随着时间的推移有较为明显的降低，且具有显著差异性。结合瘗疮丙酸杆菌的抑制实验结果，可以认为，添加了红色三叶草提取物的乳液能够降低油脂分泌，从而达到控油效果。£-.亦海。卷£一»三品尾£-.亦海。卷£一»三品尾

14、对照组测试组320.00-20.00-40.0020.000.00-20.00-10.00M2图4皮肤粪叶啾的个数面积变化图（PC0.05）F:g.4Variationincountandareaofsk：ncoproporphyr.n图5l'&5对照组测试组皮肤原叶嗽的个数面枳变化图（PV0.05）Variationincountandareaofsk:nprotoporphyrin*花M荆氧右香告剥X一谁尾安蚯玉妪还S香-1=.irxl是S2.4受试者自我评价分析测试前和测试4周后，受试者对自身面部肌肤出油状况进行自我评价，总分17分，规定分值越大面部出油越少，4分为“既不

15、油腻也不干燥”。与对照组相比，测试组皮肤出油状况有明显改善。其中85.71%的受试者认为测试组样品有较为显著的控油效果（改善率为自我评价5分的受试者占全部受试者的百分比）。3结论通过采集皮肤表面油脂、粪叫噂和原口卜噂的前后改变数值，结合瘗疮丙酸杆菌抑制实验有效验证了红色三叶草提取物中的活性物质具有较为显著的控油效果，且能有效降低皮肤口卜R林的含量。而皮肤水分数值的变化说明，该活性物还能够增加皮肤含水量，发挥调节水油平衡的作用。但因其不具有显著性差异，在之后的工作中，还应开展进一步的研究和探讨。因为人员安排等限制，本次试验仅从3个维度对测试产品的控油效果进行r分析。而相关研究表明，皮肤油脂含量与

16、pH值成反比关系，当皮肤油脂含量升高时，皮肤pH值会降低仇。所以，在接卜来的研究中，可赠加皮肤pH的测试维度，从而更为全面的评价产品的控汕功效。参考文献：111CATHERINN,VALERIEH.DevelopmentandhomeostasisofthesebaceousglandJ.SeminarsinCellandDevelopmentalBiology,2012,23(8):928-936.2 MERCURIOMG,GOGSTETTERDS.Androgenphysiologyandthecutaneouspiloscbaceousunit|JJ.JournalofGenderSpe

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18、mtnunolocalizalionof5alpha-reductaseisozymesinacnelesionsandnormalskinJ.ArchDermalol,2000.136(9):1125-1129.6 曾虹燕，周朴华，候团章.红车轴草有效成分的研究进展J.中草药,2001,32:189-190.7 白晓云，马抢风,鲍晶琳，等.市售男士控油洁面泥使用效果和功效研究J.中国美容医学,2014,23(6):465-469.8 赵小敏，瞿欣.一种稻米提取物的皮肤保湿和抗老化功能研究J.中国美容医学,2015,24(4):35-38.9 穆艳蕾，杨卷娅，王文岭，等.蓝光治疗痊疮120例临

19、床疗效观察J.中国美容医学.2007(1):80-82.10 朱文元.逐疮M.南京:东南大学出版社.2004:278-279.11 KIMMK,CHOISY.BYUNHJ.etal.Comparisonofsebuinsecretion,skintype,pHinhunianswithandwitlioutacneJ.ArchDermatolRes,2006,298(3):113-119.12 GFATTERR,HACKIP,BRAUNF.EffectsofsoapanddetergentsonskinsurfacepH.stratumcorneumhydrationandiatcontentininfanlsJ|.Dermatology,1997,195(3):258-262.EvaluationofthesebumcontroleffectofredcloverextractMAOShi-nan1,CHENGDang-dangMOJun-yingjWANGFei-fei2(I.ShanghaiJiyanBio-pharmaceuticalCo.,Ltd.,Shangh