培本方拆方调节哮喘大鼠内源性糖皮质激素作用途径的实验研究

1、培本方拆方调节哮喘大鼠内源性糖皮质激素作用途径的实验研究         08-05-15 16:57:00     作者：刘仁慧 郭忻    编辑：studa20【摘要】  目的研究培本方对哮喘大鼠内源性糖皮质激素（GC）各作用途径的调节作用。方法采用OVA（卵蛋白）致敏、激发复制大鼠慢性哮喘模型，以阿斯美胶囊为对照药，通过放免法检测血清CORT（皮质酮）、血浆ACTH（促肾上腺皮质激素）和下丘脑CRH（促肾上腺皮质激素释放

2、激素）的含量及免疫组化法检测肺组织GCR（糖皮质激素受体）的表达，探讨培本方及其拆方对大鼠哮喘模型的部分作用机制。结果模型对照组较正常对照组CORT及ACTH含量均显著降低、GCR蛋白表达亦明显降低、CRH含量无明显改变；培本方全方组及拆方组改善CORT，ACTH，GCR的影响作用更为显著。结论 调节内源性GC的作用途径可能是培本方抗哮喘作用的机制之一。 【关键词】  培本方 拆方 内源性糖皮质激素 哮喘 大鼠AbstractObjectiveTo study the adjustment of Peibenfang on the functional route of endoge

3、nous GC in asthma rats. MethodsAsthma rats model was established by OVA through sensitizing and challenging. Asimei Capsule was used as positive control medicine. By investigating CORT in blood serum, ACTH in blood plasma, CRH in hypothalamus and GCR in the lung issue, the effects of Peibenfang on a

4、sthma were observed.ResultsThe levels of CORT, ACTH and GCR in model group were lower than those in normal group; in Peibenfang group and Peibenfang compatibility group(part), these indexes increased remarkably. ConclusionOne of the mechanisms of Peibenfang against asthma is to adjust the functional

5、 route of endogenous GC in asthma.Key wordsPeibenfang;   Compatibility;   Endogenous GC;   Asthma ;   Rats    哮喘反复发作可导致内源性GC浓度下降，体内低浓度的GC会加重哮喘的炎症反应，形成恶性循环，同时不足的应激激素反应将增加过敏性哮喘的易感性，也许这是哮喘长期反复发作的机理之一。培本方是由著名老中医徐辉光教授积30余年临床之经验，根据中医“久病成虚”“缓则治本”的理论，独树

6、一帜创立的以平补气血阴阳药物为主组成的复方，作为支气管哮喘患者缓解期用药，在临床上取得了较好的疗效。本实验旨在探讨培本方通过调节内源性GC的作用途径用于哮喘防治的机制。1  材料和方法1.1  动物雄性健康SD大鼠，清洁级，60只，体重（130±10）g，由中国科学院上海实验动物中心提供。动物批号：SCXK（沪）2003-0002。1.2  药品、试剂及仪器大鼠CORT试剂盒，美国DSL；ACTH放免试剂盒，北京北方生物技术研究所；神经肽-CRH放免药盒，第二军医大学神经生物学教研室；GCR一抗（R），美国Santa Cruz；免疫组化EnVision

7、试剂盒（即用型），丹麦Dako公司；卵蛋白OVA，美国sigma公司；402A超声雾化器，江苏鱼跃医疗设备有限公司。实验所需中药材由上海康桥中药饮片有限公司提供。阿斯美胶囊，日本三共株式会社。1.3  动物模型复制SD大鼠60只，随机分成6组，即正常对照组、模型对照组、培本方全方组、培本方拆方组（由全方中补益气血的药物黄芪、当归组成）、培本方拆方组（由全方中补益阴阳的药物淫羊藿、女贞子组成）、阿斯美组，每组10只。    于实验第0，7天，除正常对照组给予1%氢氧化铝佐剂，各组动物均以新鲜配制的致敏液（1 mg/ml OVA，溶于1%氢氧化铝佐剂内）作皮

8、下注射，每鼠在两侧后足跖、腹股沟、腰、背、颈部共取10点，每点注射0.05 ml，同时腹腔注射0.5 ml，共计1 ml。于实验第14天开始，将大鼠置于自制雾化箱（40 cm×30 cm×20 cm）内，用超声雾化器以雾化量0.8 ml/min雾化1%OVA生理盐水溶液15 min，1次/d，以激发哮喘。正常对照组雾化以生理盐水。 连续激发3周后，停止激发6 d，然后激发1次，24 h后处死。1.4   给药方法于实验第14天开始灌胃给药，1次/d，直至处死前1日。培本方全方组、培本方拆方组、培本方拆方组、阿斯美组，分别按1 ml/100 g体重灌胃给予

9、相应的水煎液，给药量分别为23.2，8.2，9.5，25.11 mg·kg-1·d-1。正常对照组和模型对照组：按1 ml/100 g体重灌胃给予生理盐水。1.5  标本制备及检测血液：25%乌拉坦4 ml/kg腹腔注射，腹主动脉取血， 2 ml注入事先加入30 l EDTA-二钠和40 l抑肽酶的离心管内，立即颠倒混合，4静置，离心取血浆；其余血液室温静置后离心，取血清。    肺组织：迅速开胸，取出肺组织，适量剪取左肺上部，浸泡于10%中性甲醛缓冲液中固定，脱水石蜡包埋，制成4 m厚的切片。    下

10、丘脑：断头，迅速摘取下丘脑，称重后置入液氮内，后转入-70冰箱内冻存。    血清CORT，血浆ACTH和下丘脑CRH均采用放射免疫分析法检测，实验过程参照试剂盒说明书进行。    肺组织GCR表达按丹麦 Dako公司免疫组化试剂盒Envision系统操作说明进行，每组随机选取6张切片，用高清晰度图文分析系统分析GCR阳性细胞的平均总面积（average general area）和平均光密度（average OD）值，每张切片取2个视野，计算平均值。1.6   统计学分析数据采用±s表示，组间比较采用方差齐性检验及单因素方差分析，相关分析采用线性回归法，所有资料的统计分析均采用SPSS 11.0 for Windows软件包完成。2  结果2.1  各组大鼠血清CORT，血浆ACTH和下丘脑CRH水平的比较结果见表1。表1  培本方拆方对大鼠血清CORT（略）    结果显示，与正常对照组比较，模型对照组血清CORT和血浆ACTH含量显著降低（P<0.01或P<0.05），下丘脑CRH含量无明显改变；