水解度指标测定

1、精品文档水解度的测定方法一：(苛三酮比色法)(1)标准曲线制定：1、20四/ml甘氨酸：2mg甘氨酸定容到100ml容量瓶中。2、苛三酮显示剂：水合苛三酮0.5g,果糖0.3g,磷酸氢二钠11.2g,磷酸二氢钾6g,定容到100mL稍热溶解，避过低温保存1周。3、40%乙醇标准曲线制作试管012345678待测样品标?mml0.000.71.00.5蒸储水ml2.001.901.801.701.601.501.401.301.001.5苛三酮显示1111111111齐1Jml40%乙醇ml5摇匀，沸水浴5515min5,用冷水迅速冷却至室温555555日安(

2、酸g0246810121420?OD(570nm)因甘氨酸的分子量为：75.07,换算成-NH工的pmH数的AC关系:可编辑水解度计算公式：DH=Jt】OO%力wr水好液-也线即_则/则）_原料蛋白质中游离一NH_5.95N（mglmL）%（|加/8）xlOO%所以米樵蛋白的小二73477N-水解液蛋白含量（凯氏定氮）F-米糠蛋白换算系数5.95方法二：采用甲醛滴定法。水解度（）=（水解后生成的氨基氮的量/样品中总氮含量）x100%（1）粗蛋白含量的测定：采用凯氏定氮法。（2）氨基氮的测定氨基酸含有氨基和竣基，具有两性，加入甲醛与氨基酸中的氨基作用，可消除其碱性，使竣基显示出酸性，用氢氧化钠标

3、准溶液滴定，即可对氨基酸进行定量。1、酚吹指示剂：0.5g酚吹溶于100ml50%的乙醇中2、中性甲醛溶液：甲醛溶液（3637%,分析纯）50ml,加入0.5%的酚猷指示剂约3ml,滴加0.1mol/LNaOH,使溶液显微粉色，储存于棕色瓶中，临用前配制。具体方法如下：分别吸取2mL不同水解度的水解液于烧杯中加蒸储水5mL,向烧杯中加入5滴酚吹指示剂，混合后加中性甲醛溶液2.0ml再混合，用0.1mol/LNaOH滴定显微粉色。同时取同浓度但未水解的蛋白液2mL做空白实验。-5,、V-VnxNx14.008氨基胤含量（nig/niL）=10式中：V样品耗用氢氧化钠标准溶液毫升数；V0空白耗用氢

4、氧化钠标准溶液毫升数；N氢氧化钠标准溶液摩尔浓度；14.0081mL浓度为1.000mol/L氢氧化钠标准溶液相当于氮的质量（mg）。方法三：226水解度的测定采用pHS悟t滴定法网到1根倨多肽在不同pH的条件卜,解离状态不匹当pH值恒定时酶水解蛋白后形成的H由接基,自由氨基或冢基酸残基数】不等;当在碱性条件下水解时，器放的氨基酸使溶液pH值明显卜曲用桶碱液将其滴定回起始pH值,可以知道蛋白质的肽健断裂的情况，根据消耗的减量计算水解度DH值.水解度=（水解的肽键数/总肽键数）kIW%计算公式，DH二修聃囚由尼/（trMpH应）x100%2-2公式中:片询三：滴定消耗的碱体积（niL）Ng亚：滴

5、定消耗的碱当星浪段（inol/L）Mp：参加蛋白水解的蛋白总量（g）H如：每克蛋白中肽健的克当量数（92nnnol；g）cl；3H基酸的平均解离度（50C时，pK=7J10.09）卡1萨吗（+0阻M）pK=7.8+24OO*(298-T)/298TT-2n3.15-lI：反应环境的温度(nC)pH:反应起pH值2.33水解度（DH）的测定蛋白质的水解程度常以雄臼质中的肽健被断裂的白分率来表示.常见的水解度泅定和监控的方法卜:要fTpH-鼾at法X加一N箱en.】编6）、=硝基笨玻酸法、甲醛滴定法、=31乙酸沉淀法等.由于pH-期t法具仃操作简单，连域测定的优.点,并且当pH大于6时，水解过程中

6、加入喊的用断裂的肚键的腔鼠仃定量的关系a因此，本研究采用该法来检测大蛋门的水解魔u/?/（%）=X100包#式中h单位质及贵白质中被水解的肽键的gCniniolg1）：H消耗的碱液体根，mL;一一碱液的浓度.inol/L：1/ct校1E系数（碱性蛋白的1触=】OIL也底物中蚩白质的含审:，象h底物中,更I!:中的收证总政.mniM/!，大米黄已取a40，（Hamada.?000）氮溶指数测定（TCA-NSI）可以通过检测其氮溶解指数来初步判定小肽或寡肽含量。NSI（%）=（N1/N0）*100N0=总氮N1=可溶性氮（用三氯乙酸一何溶性氮测定法）三氯乙酸（TCA）是一种蛋白质沉淀剂，它可以沉淀蛋白质和较长的肽段。可以被三氯乙酸沉淀的肽段所含的最少氨基酸残基数与底物的种类有关，就特定的底物而言，三氯乙酸氮溶解指数可以定性反映蛋白质的分解情况，溶解指数越高，表明较短肽段含量越高。三氯乙酸氮溶指数（TCANSI）测定方法：将20ml10%三氯乙酸（T