硝酸甘油注射液含量检验方法验证定量限

1、验证方案 编号：Z-V-AQ004-03 硝酸甘油注射液含量检验方法验证方案目 录1、起草、审核与批准22、目的23、范围24、职责25、概述36、执行标准和规范37、验证前的支持性确认38、验证内容59、数据分析910、偏差911、确认结果评定与结论912、再验证周期91、起草、审核与批准：所属部门职务签名日期起草 年 月 日审核 年 月 日审核 年 月 日批准 年 月 日2、目的： 硝酸甘油注射液在产品生产过程中，需用高效液相色谱法测定其含量，为确定其对含量测定检验方法的适用性，特制定本验证方案。3、范围：本方案适用于硝酸甘油注射液含量检验方法的验证。4、 职责：组 长姓 名职务/职称部

2、门职 责QC主管质量检验室1.负责组织起草确认方案。2.负责协调、组织确认工作。成 员经理质量管理部1.负责确认方案的审核和监督。2.负责确认方案的审核与批准。主管质量管理部1.负责确认方案、报告的审核。2.负责起草确认合格证书。主管设备工程部1.负责仪器仪表均已校准合格，且在有效期内。2.执行安装、运行和性能确认。确认专员质量管理部1. 负责相关确认项目的测试。2. 保证测试数据的真实性。确认专员质量管理部1.负责相关确认项目的测试。2.保证测试数据的真实性。5、概述： 高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)系采用高压输液泵将

3、流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入注内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。硝酸甘油注射液的质量标准中规定，在产品生产过程半成品和成品检验，需用高效液相色谱法测定其含量。6、执行标准与规范：本方案以LC-20A高效液相色谱仪标准操作规程 、PC-2001高效液相色谱仪标准操作规程、硝酸甘油注射液质量标准为依据，制定了硝酸甘油注射液验证方案。7、验证前的支持性确认： 仪器确认前应确认与本次确认

4、相关联的完成情况。7.1 文件的检查确认：序号文件名称文件编号检查结果1硝酸甘油注射液含量检验方法验证方案Z-V-AQ004-03合格 不合格2硝酸甘油注射液检验标准操作规程SOP-3505合格 不合格3LC-20A型高效液相色谱仪标准操作规程SOPQ6115合格 不合格4PC-2001型高效液相色谱仪标准操作规程SOPQ6041 合格 不合格5高效液相色谱仪日常清洁维护与保养标准操作规程SOPQ6044 合格 不合格6玻璃仪器清洗与贮存标准操作规程SOP-Q0064合格 不合格7电子天平标准操作规程SOP-Q6017合格 不合格8电子天平日常清洁维护与保养标准操作规程SOP-Q6018 合格

5、 不合格检查人/日期： 复核人/日期：7.2 仪器仪表的检查确认：7.2.1 仪器仪表量程、规格必须符合测试及设计规范要求。7.2.2 仪器仪表使用前必须经具有相应资质机构校验，且在有效期内。7.3 公用工程系统的检查确认：系统名称文件编号检查人检查结果合格 不合格合格 不合格合格 不合格7.4 相关人员的培训：7.4.1 文件培训 文件培训表序号文件名称文件编码检查结果1硝酸甘油注射液含量检验方法验证方案Z-V-AQ004-03是 否2硝酸甘油注射液检验标准操作规程SOP-3505是 否3LC-20A型高效液相色谱仪标准操作规程SOPQ6115是 否4PC-2001型高效液相色谱仪标准操作规

6、程SOPQ6041 是 否5高效液相色谱仪日常清洁维护与保养标准操作规程SOPQ6044 是 否6玻璃仪器清洗与贮存标准操作规程SOP-Q0064是 否7电子天平标准操作规程SOP-Q6017是 否8电子天平日常清洁维护与保养标准操作规程SOP-Q6018 是 否偏差说明/结论：检查人日期复核人日期 7.4.2 人员培训 人员培训表序号姓名是否培训健康状况1是 否是 否2是 否是 否3是 否是 否4是 否是 否偏差说明/结论： 检查人 日期 复核人 日期8、验证内容：8.1 硝酸甘油注射液含量测定方法8.1.1 仪器与用具：电子天平、高效液相色谱仪、容量瓶、移液管。8.1.2 试剂与试液： 乙

7、腈-水（50：50）、硝酸甘油对照品。 条件：照高效液相色谱法测定。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（5050）为流动相；检测波长为215nm。 取硝酸甘油对照品约1.25g，置25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，即得（每1ml中约含0.5mg的溶液）。置水浴中加热10分钟，放冷，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至中性，取20µl，注入液相色谱仪中，记录色谱图，在相对保留时间约0.4处应出现两个降解产物峰（1,2-二硝酸甘油和1,3-二硝酸甘油峰），两峰之间的分离度应大于1.0。理论板数按硝酸甘油峰计算不低于200

8、0。 样品溶液制备：精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中约含硝酸甘油0.1mg的溶液）。 对照溶液制备：取硝酸甘油对照品约0.5g，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 测定方法：精密量取样品溶液与对照溶液各20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。计算公式： 含量（） 式中： Ax -表示供试品溶液所得色谱图中主成分的峰面积； AR -表示对照品溶液的峰面积； CR -表示对照品的浓度。 判定标准：本品含硝酸甘油（C3H5N3O9）应为标示量的90.0110.0。 8.2 重复性试验： 8.2.1 取同一批硝酸甘

9、油注射液样品，按硝酸甘油注射液含量测定方法同一人共制备6份供试液测定，所得结果的相对标准偏差2.0。 重复性试验记录名称 硝酸甘油注射液批号：仪器型号： 对照品批号来源含量： 配制日期 年 月 日 有效期至 年 月 日 系统性试验分离度：理论板数：对照品称样量对1： 对2： 样品取样量样品1: 150ml样品2: 150ml对照1峰面积平均值：对照2峰面积 平均值： 样品序号 1 23456 峰面积 含量% RSD% （应2.0%） 结论 检验人 日期 复核人 日期8.3 中间精密度试验8.3.1 同一批硝酸甘油注射液，由2个不同的人在不同时间不同仪器分别测定2次的结果，所得结果的相对标准偏差

10、2.0。 表1 中间精密度试验记录 名称 硝酸甘油注射液批号：仪器型号： 对照品批号来源含量： 配制日期 年 月 日 有效期至 年 月 日 系统性试验分离度：理论板数：对照品称样量对1： 对2： 样品取样量样品1: 150ml样品2: 150ml对照1峰面积平均值：对照2峰面积 平均值： 样品序号1-11-2平均值含量1含量2 峰面积 样品序号2-12-2平均值含量1含量2 峰面积 平均含量 RSD% （应2.0%） 检验人 日期 复核人 日期表2 中间精密度试验记录 名称 硝酸甘油注射液批号：仪器型号： 对照品批号来源含量： 配制日期 年 月 日 有效期至 年 月 日 系统性试验分离度：理论

11、板数：对照品称样量对1： 对2： 样品取样量样品1: 150ml样品2: 150ml对照1峰面积平均值：对照2峰面积 平均值： 样品序号1-11-2平均值含量1含量2 峰面积 样品序号2-12-2平均值含量1含量2 峰面积 平均含量 RSD% （应2.0%） 检验人 日期 复核人 日期 名 称 硝酸甘油注射液 批号 含量测定结果 结果 RSD% （应2.0%）结论检验人日期复核人日期 表3 中间精密度验证结果（两人）8.4. 定量限确认8.4.1. 定义定量限是指样品中被测物质能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。8.4.2. 方法色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键

12、合硅胶为填充剂；以乙腈-水（5050）为流动相；检测波长为215nm。 取硝酸甘油对照品约1.25g，置25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，即得（每1ml中约含0.5mg的溶液）。置水浴中加热10分钟，放冷，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至中性，取20µl，注入液相色谱仪中，记录色谱图，在相对保留时间约0.4处应出现两个降解产物峰（1，2-二硝酸甘油和1，3-二硝酸甘油峰），两峰之间的分离度应大于1.0。理论板数按硝酸甘油峰计算不低于2000。 对照品溶液制备：取硝酸甘油对照品约0.5g，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 供试品溶液

13、制备：精密量取硝酸甘油对照品 g，置 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中约含硝酸甘油0.1mg的溶液）。 测定法：精密量取上述两种溶液各20µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。计算公式： 含量（）式中： Ax -表示供试品溶液所得色谱图中主成分的峰面积； AR -表示对照品溶液的峰面积； CR -表示对照品的浓度。8.4.3. 可接受标准以 S / N 10 时的相应浓度作为本品含量检测的定量限。8.4.4. 定量限确认记录见附表5。附表5 定量限确认记录色谱条件使用仪器对照品批号来源色谱柱型号品牌流动相试剂名称批 号生产厂家检测波长

14、流 速柱 温进样量初始浓度（mg/ml）信噪比(X)稀释浓度(mg/ml)（初始浓度*X/10）信噪比稀释浓度(mg/ml)（初始浓度*X/10）标准要求以信噪比S / N 10 时的相应浓度作为本品含量检测的定量限。结 论确认人日 期复核人日 期 9、数据分析： 通过对硝酸甘油注射液含量检验方法学试验，重复性相对标准偏差2.0；中间精密度相对标准偏差（RSD）2.0；以上试验均应符合验证合格标准。 10、偏差：10.1 在确认过程中有无偏差，如有偏差应找出原因，并通知被检测部门进行调查处理。10.2 偏差调查记录应由质量管理部存档。11、验证结果评定与结论：质量管理部负责收集各项确认、试验结果记录，根据确认、试验结果起草验证报告，报验证委员会。验证委员会负责对结果进行综合评审，作出确认结论，发放证书，确认硝酸甘油注射液含量检验方法的各项结果达到合格标准。并对确认结果进行评审，内容包括： 确认结果评审表评审项目评审结果试验是否有遗漏？是 否 N/A实施过程中对验证方案有无修改？ 是 否 N/A修改原因、依据以及是否经过批准？是 否 N/A记录是否完整？是 否 N/A试验结果是否符合标