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1、实验二 甲醛滴定法测定氨基氮1、 实验目的 初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。2、 实验原理 氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡： NH3是弱酸，完全解离时PH为1112或更高，若用碱滴定NH3所释放的H来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示滴定终点。常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使NH3释放H，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH=9.0左右）。因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。 如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品为多种氨基酸的混合物(如蛋白质水解液

2、)，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加，滴定值也增加，当滴定值不再增加时，表明已完全水解。3、 器材及试剂 1实验器材 25 ml锥形瓶；3 ml微量滴定管；吸管；研钵。2实验试剂 （1）300 ml 0.05 mol/L标准甘氨酸溶液 准确称取375 mg 甘氨酸，溶解后定容至100 ml。（2）500 ml 0.02 mol/L标准氢氧化钠溶液（3）20 ml酚酞指示剂 0.5%酚酞的50%乙醇溶液。（4）400 ml中性甲醛溶液 在50 ml 3637%分析纯甲醛溶液中加入1 ml 0.5%酚酞乙醇水溶液，用0.02 mol/

3、L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。4、 实验方法 1、取3个25 ml的锥形瓶，编号。向1、2号瓶内各加入0.05 mol/L标准甘氨酸溶液2ml和水5ml，混匀。向3号瓶内加入7 ml水。然后向三个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2 ml甲醛溶液再混匀，分别用0.02 mol/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。 重复以上实验两次，记录每次每瓶消耗的标准氢氧化钠溶液的毫升数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。2、取未知浓度的甘氨酸溶液2 ml，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每毫升甘氨酸溶液中含有氨基氮的毫克数。五、结果处理1. 回收率计算：甘氨酸氨基氮回收率实际测得量×100%加入理论量公式中实际测得量为滴定1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数的平均值与第3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14.008。2. 氨基氮计算：氨基氮（mg/mL）=（V未V对）×NNaOH×14.0082公式中V未为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的

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