基因工程试题(8)

1、基因工程试题一、选择题（每题 1 分，共 15 分）1、下列有关基因的叙述，错误的是【 A 】A蛋白质是基因表达的唯一产物B 基因是 DNA 链上具有编码功能的片段C 基因也可以是 RNAD 基因突变不一定导致其表达产物改变结构2、基因工程的单元操作顺序是【A 增，转，检，切，接C 接，转，增，检，切3、生物工程的上游技术是【A 基因工程及分离工程C 基因工程及酶工程B 】B 切，接，转，增，检D 切，接，增，转，检A 】B 基因工程及发酵工程D基因工程及细胞工程4、下列各组专业术语中，含义最为接近的是【 C 】A 终止子与终止密码子B 基因表达与基因转译C DNA 退火与 DNA 复性 D

2、重组子与转化子5、 根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成【B 】A 2 大类 B 3 大类 C 4 大类 D 5 大类6、T4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其 底物的关键基团是【 D 】A 2' -OH 和 5'- PB 2' -OH和 3' -PC 3' -OH 和 2'- PD 5' -OH 和 3' -P7、下列有关连接反应的叙述，错误的是【 A 】A连接反应的最佳温度为37 CB 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%C 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1m

3、MD 连接酶通常应过量 2-5 倍8、原生质体转化方法不大适用于【 A 】A 大肠杆菌 B 枯草杆菌 C 酵母菌 D 链霉菌9、下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是【 A 】A Cosmid > 入-DNA> PlasmidB 入-DNA > Cosmid > PlasmidC Plasmid > X -DNA > Cosmid D Cosmid > Plasmid > X -DNA10、若某质粒带有 lacZ 标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培 养基中加入【 D 】A半乳糖 B异丙基巯基-B -半乳糖苷（IPTG ）C蔗糖 D 5

4、-溴4氯-3-吲哚基-B -D-半乳糖苷 X-gal ）11、下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的 是【 C 】A 大肠杆菌繁殖迅速BC 链霉菌遗传稳定D枯草杆菌分泌机制健全酵母菌表达产物具有真核性12、分子杂交的化学原理是形成 【 D 】A 共价键 B 离子键 C 疏水键D 氢键13、某一重组 DNA （ kb ）的载体部分有两个 SmaI 酶切位点。用 SmaID 至少 2 个酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合， 该重组分子插入片段上的 SmaI 酶切位点共有【 D 】A 4 个 B 3 个 C 2 个14、下列设计的探针中，最佳的是

5、 【 D 】A ACATTAAATTATTB GGGCAC ACCTTGATAAGGTD CGGACTTGACCATC15、cDNA法获得目的基因的优点是【A】A 成功率高 B 不含内含子 C 操作简便 D 表达产物可以分泌二、名词解释（每题 2分，共 20 分）1、Southern blotting : Southern 印迹： Southern 发明的一种影印转移物质的方 法。2、Cosmid vector: 黏粒载体：含有 cos 位点的质粒载体。3、cDNAibrary:cDNA 文库：是指某生物某一发育时期所转录形成的 cDNA片段 与某种载体连接而成的克隆的集合。4、 RACE是一

6、种通过PCRS行cDNA末端快速克隆的技术， 是以mRNA为模板反转录成 cDNA 第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到 3，或5，端之间未知序列的方法。5、Probe: 探针：指被标记物质标记了的核酸。6 RT-PCR逆转录PCR先用逆转录酶作用于 mRNA以寡聚dT为引物合成cDNA 第一链，然后用已知一对引物，扩增嵌合分子，这种方法称为逆转录PCR。7、 Insert inactivation:插入失活，基因工程载体上的某些选择标记基因常常 含某种或某几种限制性内切酶的单一酶切位点， 在该位点用相应的限制性内切酶 处理，并将外源DNA片段插入该位点，则插入的外源DNA片段将破坏原有基

7、因的 读码框，往往导致原有的选择标记基因无法翻译表达， 或即使翻译表达， 形成的 也是丧失了原有生物活性的蛋白质，这一现象称为插入失活。 。8、S-D Sequenee: S-D序列：在大肠杆菌 mRNA勺核糖体结合位点上，含有一个 转译起始密码子及同 16S 核糖体 RNA 3，末端碱基互补的序列，该序列最初由 Shine、Dalgarno发现，故后来命名为Shine Dalgarno序列，简称S-D序列。9、Shuttle plasmid vector: 穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同 复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。10、MCS指载体上人

8、工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片 段。三、简答题（每题 5 分，共 25分）1、理想质粒载体的必备条件答： 具有较小的分子质量和较高的拷贝数具有若干限制性核酸内切酶的单一酶切位点。具有两种以上的选择标记基因。缺失mob基因。插入外源基因的重组质粒较易导入宿主细胞并自制和表达。2、核酸操作的基本技术有哪些答：核酸提取与纯化 核酸的检测与保存 核酸的凝胶电泳 核酸分子杂交3、影响核酸保存的关键因素是什么怎样保存核酸制品答： 关键因素 ： 保存液的酸碱度 保存温度保存方法： 一般保存可用浓盐液，NaCL柠檬酸缓冲液或L醋酸缓冲液。对DNA来 说，在pH411的范围分子的碱

9、基较稳定，超出此范围 DNA易变性或降解，低 温、稀碱下保存DNA及低温下保存RNA匀较稳定。固态核酸通常在0C以上低 温干燥保存即可。4、合成cDNA第二链的主要策略有哪些答：自身引导合成法 置换合成法 PCR合成法 快速扩增cDNA末端法 双链cDNA末端的处理 cDNA与载体的连接5、基因工程诞生的理论基础是什么答：是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。理论上的三大发现： 证实了 DNA是遗传物质 揭示了 DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理 遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定技术上的三大发明： 限制核酸内切酶的发现与 DNA切割 DNA连接酶的发现与DNA片

10、段的连接 基因工程载体的研究与应用四、问答题（每题 10分，共 40分）1 PCR 技术主要应用在哪些领域答：核酸基础研究 序列分析 检测基因表达 从cDNA文库中放大特定序列 研究已知片段邻近基因或未知 DNA片段 进化分析 医学应用 分析生物学证据 性别控制 转基因检测。2 细菌的限制与修饰系统有什么意义大肠杆菌 K12 限制与修饰系统 的遗传分析揭示的 4 种表型是什么答： 宿主控制的限制与修饰现象广泛存在于原核细菌中，它有两方面的作用， 一是保护自身DNA不受限制；二是破坏入侵外源DNA使之降解。细菌正是利用限 制与修饰系统来区分自身 DNA与外源DNA的。外源DNA可以通过多种方式进

11、入某 一生物体内，但是它必须被修饰成受体细胞的限制内切酶无法辩认的结构形式， 才能在寄主细胞内得以生存，否则会很快被破坏。因此，在基因工程中，常采用缺少限制作用的菌株作为受体，以保证基因操作的顺利完成大肠杆菌K12限制与修饰系统的遗传分析揭示，它有以下 4种表型：r k+mk+ 野生型r k-mk+ 限制缺陷型r k-mk- 限制和修饰缺陷型r k+mk- 修饰缺陷型3试述5 RACE技术原理和方法。答：PCF用于扩增代表mRNA专录物某一单位点与其3'或5'末端之间区域的部 分cDNA称为快速扩增cDNA末端技术（RACE。如果已知mRN的片段链内短序 列，据此或设计基因特异

12、引物，用原先存在的 poly（A） 尾（ 3'末端）或附加的 同聚尾（ 5'末端）互补的序列做末端引物，就可以获得从未知末端直到已知区 域的部分cDNA序列。为获得5'末端部分cDNA克隆需用基因特异引物，产物第 一链产物，可用末端脱氧核苷酸转移酶及 dATP加poly（A）尾。通过QT引物和反 专录使用的上游基因特异引物生成第二链 cDNA。4 大肠杆菌作为基因工程受体菌具有哪些特点真核基因在大肠杆菌 中表达存在哪些障碍 答：特点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学 等方面的背景知识清楚， 对其基因表达调控的分子机理也比较了解， 而且历经二

13、十年的基因工程实践， 大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系， 有多 种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。存在的障碍：第一，在大肠杆菌的 mRNA勺核糖体结合位点上，含有一个起始密码子及16S核糖体RNA 3末端碱基互补序列，即S-D序列，而真核上缺泛这个序列。 第二，许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的 折叠和组装， 而细菌中通常并没有这样的修饰机制， 从而可能导致真核基因在大 肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白。第三、外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别， 并被当做“异 已分子”降解掉。8、S-D序列：在大肠杆菌m

14、RNA勺核糖体结合位点上，含有一个转译起始 密码子及同 16S 核糖体 RNA 3，末端碱基互补的序列，该序列最初由 Shine 、 Dalgarno 发现，故后来命名为 ShineDalgarno 序列，简称 S-D 序列。1、什么是包涵体重组蛋白在胞内表达时， 常常以不溶性蛋白聚集成勺晶状物形式存在， 这种 晶状体即包涵体。 包涵体勺形成是外源蛋白勺高效表达时勺普遍现象， 这是由于 肽链折叠过程中部分折叠勺中间态发生了错误聚合， 而不是形成成熟勺天然态或 完全解链勺蛋白。2、什么是a -互补筛选质粒载体具有B -半乳糖苷酶基因(lac Z),当外源DNAS入到它的lac Z, 可造成表达后

15、的B -半乳糖苷酶失活，利用这一点就可以通过大肠杆菌转化子菌 落在添加有 X-gal-IPTG 培养基中的颜色变化鉴别出重组子和非重组子。有些大 肠杆菌上带有 lac Z 基因的部分编码序列，质粒载体中含有别一部分编码序列， 当质粒转入载体后，可形成具有酶活性的蛋白质。这种 lac Z 基因上缺失了一部 分编码序列的突变体与带有这一部分编码序列的突变体之间实现互补的现象叫 a互补。3、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响酶的纯度。DNA羊品的纯度。(3)DNA勺甲基化程度。酶切反应的温度与时间。DNA分子的构型。限制性核酸内切酶的反应缓冲液。5、基因工程诞生的理论基础是什么是现代分子生物学领域

16、理论上的三大发现和技术上的三大发明。 理论上的三大发现： 证实了 DNA是遗传物质 揭示了 DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理 遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定技术上的三大发明： 限制核酸内切酶的发现与 DNA切割 DNA连接酶的发现与DNA片段的连接 基因工程载体的研究与应用四、问答题（每题 10 分，共 40 分）1 如何有效地提高外源基因的表达效率提高启动子强度 缩短启动子同克隆基因间距离 高效的翻译起 始序列 高效的转录终止区 提高质粒拷贝数及稳定性 用以下方法提 高翻译水平：调整SD序列与AUG间的距离用点突变的方法改变某些碱基 增加mRNA勺稳定性的减轻细胞的代谢负荷

17、：诱导表达表达载体的诱导复 制提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：克隆一段原核序列，表达融合蛋 白采用某种突变菌株表达分泌蛋白质2 试述载体构建一般方法A目的基因分析（1） ORF分析（2）酶切位点分析B 载体选择与分析（ 1）多克隆位点分析（ 2）抗性标记分析（ 3）启动子与其 他筛选标记分析C 连接体系与连接时间确定4 大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚， 对其基因表达调控的分子机理也比较了解， 而且历经二 十年的基因工程实践， 大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系， 有多 种适用的寄主菌株和

18、载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。缺点：在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核 基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰， 如正确的折叠和组装， 而细菌中 通常并没有这样的修饰机制， 从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无 法产生有活性的蛋白； 外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白 酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。二、选择题(每题 1 分，共 15分)1( d ) 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是A 修复自身的遗传缺陷B 促进自身的基因重组C 强化自身的核酸代谢D 提高自身的防御能力2( a ) 生物工程的下游技术是A 基因工

19、程及分离工程B 蛋白质工程及发酵工程C 基因工程及蛋白质工程D 分离工程 及蛋白质工程3 ( a ) 基因工程操作常用的酶是 :(I 内切酶 II 连接酶 III 末端转移酶IV 聚合酶A. I + II B. I + III + IV C. II + III + IV D. I +II + IV+ III4 ( d ) 限制性内切核酸酶的星活性是指：A在非常规条件下，识别和切割序列也不发生变化的活性。B活性大大提高C切割速度大大加快D识别序列与原来的完全不同5( d ) 下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是A. GAAACTGCTTTGACB. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAGD. GAAACTGCAGTTTC6 ( c ) 关于cDNA的不正确的提法是：A 同mRN互补的单链RNAB 同mRN互补的含有内含子的 DNAC 以mRN为模板合成的双链 RNAD 以上都不正确7 ( a ) 下列有关连接反应的叙述，错误的是A. 连接反应的最佳温度为37 CB. 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%C. 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mMD. 连接酶通常应过量 2-5 倍DNA 片段连接在一和 3' -P和 3' -P8 ( c