现代分离技术

1、1.结合自己的研究方向谈谈现代分离分析 的应用2.质谱的分类及各自的特点3.举例说明液质联用应用于复杂中药成分的定量分析  4.UPLC的特点5.离子色谱应用于单糖成分分析6.全二维气相色谱分析技术7.加压毛细管电色谱 特点8.中药质量控制的模式，及其缺陷，如何改进？9.中药指纹图谱的特点和分类2.质谱的分类及各自的特点质谱分析是一种测量离子荷质比（电荷-质量比）的分析方法。1）2）3）4）5）6）4. UPLC特点超高效液相色谱（UPLC）与常规的液相色谱（HPLC）相比, 原理上没有本质区别，但UPLC有两个技术特点：1、对于液相色谱而言，为了增加柱效，可以减小填料颗粒度，但是系

2、统压力会随之上升，UPLC技术解决了整个系统在运行压力上的问题，仪器的连接系统、阀、配用的柱子等都能耐得起高压；2、在流速较高的情况下，柱效损失小，比如：如果使用2.1mm管径的柱子，最佳流速一般为0.2ml/min，但在流速升至0.5ml/min的情况下，柱效也很好。所以UPLC具有以下优点一、 超高分离度UPLC发挥了1.7 m颗粒提供柱效增高的全部优越性。UPLC用1.7m颗粒提高了分离能力，可以分离出更多的色谱峰，从而对样品提供的信息达到了一个新的水平。而且又最大地缩短了开发方法所需的时间。在中药、食品等复杂样品的分离分析上具有明显的优势，并且，某些情况下能将HPLC不能分开的两个峰分

3、开。二、 超高速度由于UPLC系统用1.7m颗粒，柱长可以比用5m颗粒时缩短3倍而保持柱效不变，而且使分离在高3倍的流速下进行，结果使分离过程快了多倍而分离度保持不变。其快速分析亦节省了以往一向耗时的方法认证的时间，使方法认证变得简单快速。三、 超高灵敏度UPLC使用小颗粒技术可以得到更高的柱效（因而改善了分离度）、更窄的色谱峰宽，即更高的灵敏度。因为色谱峰变得更窄，峰高也就更高了；同样，当UPLC用于快速分析、用较短色谱柱而使柱效不变时，色谱峰高会相应增加。因此，使用UPLC技术，不仅可以在保持与HPLC相同分离度时提高峰高，而且在改善分离度的同时亦可提高峰高即灵敏度四: 成本节省因为以上三

4、点优势,可以更快,更高效分离样品,所以节省很多溶剂,而且进样量减少,可以节省样品。此外，UPLC与Q-TOF（四极杆飞行时间串联质谱仪）联用之后，能提高质谱分析的灵敏度，这也是UPLC具有的优势的体现。5.离子色谱应用于单糖成分分析1）分离原理2）检测原理极表面发生3）分离柱如6.全二维气相色谱分析技术全二维气相色谱(Comprehensive Two-dimensional Gas Chromatography, GC×GC)是把分离机理不同而又互相独立的两支色谱柱以串联方式结合成二维气相色谱，在这两支色谱柱之间装有一个调制器，起捕集再传送的作用，经第一支色谱柱分离后的每一个馏分，

5、都需先进入调制器，进行聚焦后再以脉冲方式送到第二支色谱柱进行进一步的分离，所有组分从第二支色谱柱进入检测器，信号经数据处理系统处理，得到以柱1保留时间为第一横坐标，柱2保留时间为第二横坐标，信号强度为纵坐标的三维色谱图，或二维轮廓图。流程如下，该仪器有如下特点：1. 峰容量大。具一次进样分出一万多个峰的能力。 2. 灵敏度高。比通常的一维色谱提高2050倍。 3. 分析时间短，定性可靠性强，一个GC×GC方法可覆盖几个ASTM方法。 4. 定性可靠性大大增强。三个因素对此起作用，第一，大多数目标化合物和化合物组可基线分离，减少了干扰。第二，峰被分离成容易识别的模式。第三，一个峰相对于

6、同族的其它成员来说，在每次运行中其位置是稳定的。5. 由于系统能提供的高峰容量和好的分辨率，一个方法可覆盖原来要几个ASTM方法才能做的任务。到目前为止，已有很多GC´GC应用的例子。其有用性正逐渐被人们所认识，可能的应用领域会比已开展的广泛的多。一般来说，当样品中物质的个数多于100时，使用GC´GC会比一维GC好得多。当柱系统选择得当时，此种技术更适于需族分离的复杂样品分析。即使样品中物质个数在30100间，GC´GC也会具显著优越性。尽管GC´GC最适合于分离复杂混合物，但它也适用于对相对简单的混合物进行快速扫描分析。7加压毛细管电色谱 特点毛细管

7、电色谱以内含色谱固定相的毛细管为分离柱，靠外加电场作用于毛细管内壁的双电层而产生的电渗流来驱动缓冲溶液，使带电物质因电泳淌度的差异而得到分离既可以分离带电物质也可以分离中性物质。与液相色谱相比，采用推动流动相，使流动相流形呈柱塞状，大大地减少了色谱过程中的峰展宽，同时因不受柱内反压的限制，可使用比液相色谱更小颗粒的填料，使柱效、分辨率、峰容量和分离速度都得到极大的提高。它结合了毛细管电泳和高效液相色谱两者的优点，兼具高柱效、高分辨率、高选择性和高峰容量的特点，同时具有色谱和电泳的双重分离机理。然而，“ 纯粹”的电色谱在实际应用中有着天然的弱点，即：在电流通过毛细管柱中的流动相时容易产生气泡（

8、焦耳热作用），从而使电流中断和电渗流停止，毛细管柱必须被重新用流动相润湿后方能再次使用。加压毛细管电色谱将液相色谱中的压力流引入系统中，不仅解决了气泡、干柱等问题，而且实现了定量阀进样和二元梯度洗脱。pCEC是电动分离与液相色谱技术的理想结合，具有高柱效、高选择性、高分辨率、快速分离的特点，在一台仪器上可同时实现PCEC, CEC和微径液相色谱三种功能；它的溶剂和样品的消耗量只有液相色谱的万分之一。8中药质量控制的模式及其缺陷，如何改进？目前的模式：目前中药质量控制与评价模式却仅停留在对药材或制剂本身的稳定性和一致性的检测上，即注重对中药成分的分析和检测，对其进行定性和定量的研究。随着行业的不

9、断发展，中药质量控制的基本模式又向着参照植物药的质量控制方式，结合化学药品的指标分析和检测进行中药的定性、定量的研究。缺陷：忽略了中药个体与整体的不一致性。它并不像西药通过简单的化学结构分析就能准确的定位出药品的性状和结构原理，而是根据不同的条件就会呈现出完全不同的用药结果。对于中医理论指导下的中药，尤其是复方制剂，却不能建立由检测部分活性成分体现整体疗效的方法。中药与化学药品有着本质的区别，即使在明确有效成分的中药中，也存在着量效关系不明确或本身没有量效关系等现象。如何改进：因此，以点盖面的研究方式不适应建立健康、安全的中药质量控制与评价模式，只有明确中药的质控方向，采用多元化的质控策略，通

10、过反复的研究与临床实践，才能在漫长的中药研究之路中找到捷径，实现真正的突破。建立基于道地药材和生物效价检测的中药质量管理模式：生物效价检测方法以其稳定的适应性、灵活性和检测结果的准确性而不仅在生物制剂中得到广泛的应用，更渗透到了中药质量管理中。从常规、化学和生物三重角度出发，借鉴生物制品生产质量管理模式，层层把关的建立基于道地药材和生物效价检测的中药质量控制与评价模式，对于补充和完善现行中药质量控制、改善评价标准有着积极有效的促进作用。道地药材参照物的采集与标定应在遵循中国药典的基础上采取整体抽样与典型抽样相结合的方式，发表论文.进行化学分析及生物效价的原始标定，从而确定道地药材参照物的属性。

11、方法和标准的筛选应本着快速、有效、客观、适应性高、可量化，重现性好等原则，根据所选中药的药理作用，开展常规药效药理学试验，以验证生物效价检测方法所得结论的客观性和可靠性，筛选便捷、稳定、高效、经济、适用性强、通用性好的生物效价检测方法，从而得出准确的检测结果。在药典常规检测和化学组份检测的基础上，选取与中药主治功能相似、与中药毒副作用相关、与中药有效性、安全性相连的生物效价检测指标和方法，建立基于道地药材和生物效价检测的中药有效性评价方法和标准，从而构建安全、稳定、有效、统一的中药质量管理模式。另外，仿生物制剂生产质量管理模式的中药生产质量全程控制管理体系的构建也是影响中药质量控制模式的因素之

12、一。在药典常规检测基础上，分别从原料药、半成品、成品的质量控制管理三方面入手，增加化学检测及生物学检测，实现化学和生物学双管齐下的管理方式。9 中药指纹图谱的分类及特点中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。用规范化的程序获得中药特征性总成分提取物，并用1HNMR、HPLC、UV、IR

13、等多种手段表征其组成和结构。目前，中药指纹图谱技术已涉及众多方法，包括：（1） 色谱法：薄层扫描（TLCS）、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）和高效毛细管电泳法（HPCE）等；（2） 光谱法：紫外光谱法（UV）、红外光谱法（IR）；（3） 质谱法（MS）（4） 核磁共振法（NMR）（5） X射线衍射法（6） DNA指纹图谱法TLCS特点：具有快速、经济、可靠、操作简单、适用范围广、重现 性好等优点；HPLC特点：具有分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、分析速度快、应用范围广等特点。中药成分绝大多数可在高效液相色谱仪上进行分析检测，且积累较丰富的应用经验。因此高效液相色谱法已成为中

14、药指纹图谱技术的首选方法。GC特点：具有高效、高选择性、高灵敏度、用量少和分析速度 快等优点；HPCE特点：分析速度快、分辨力强、 重现性好等特点，为动物类药材的鉴定提供了新的分析手段。UV特点：由于不同中药所含成分的不饱和程度有差异，因而导致其 紫外吸收曲线的形态、峰位、峰强度亦有差异以此达到鉴别的目的。导数光谱可消除样品中 一些无关吸收，排除原图谱中的某些干扰，从而达到较好的鉴别效果；IR特点：对整个化合物分子的鉴别，比单纯的官能团的化学 定性鉴别专一性更强；MS特点：将中药提取液置质谱仪中进行电子轰击电离，可获得提取液中 化学成分的 EI-MS 图，不同中药提取液所含成分不同，所得质谱图显示的分子离子峰及进 一步的裂解碎片峰亦不一致，可资鉴别；质谱法对提取液中主要成分的含量要求较高，实验 费用亦较大，能否作为常用的检测方法尚待继续探索；X-衍射法特点：X 射线衍射法是研究物质的物相和晶体结构的主要