麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）生产工艺的建立

1、    【摘要】  目的  研制麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）。方法  用麻疹病毒长-47株接种人二倍体细胞，经培养，收获病毒液并加适量稳定剂后冻干制成疫苗。疫苗按2005年版中国药典三部进行检定。结果  麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）各项技术指标均符合2005年版中国药典三部的要求。结论  人二倍体细胞为基质可以制备麻疹减毒活疫苗，疫苗质量稳定，收获率较高。    【关键词】  麻疹减毒活疫苗；人二倍体细胞；收获率

2、        麻疹是由麻疹病毒引起的主要罹及婴幼儿急性传染病。在我国麻疹减毒活疫苗应用已有近40年的历史，制备疫苗均以鸡胚细胞为基质，作为异源细胞，具有携带禽病毒的可能，而人二倍体细胞为人源细胞1，在国外早已用来生产麻疹减毒活疫苗。人二倍体细胞（2BS株）现已广泛应用于疫苗生产，如甲肝减毒活疫苗、水痘减毒活疫苗等，已证明其具有安全性。我们用人二倍体细胞为基质制备出符合2005年版中国药典三部要求的麻疹减毒活疫苗，本文就此做如下报告。1  材料1.1  细胞  生产用细胞为人二倍体细胞2BS株，

3、用于生产的细胞世代限定在43代以内。1.2  毒种  鸡胚细胞为培养基质制备的麻疹减毒活疫苗毒种长47株27代适应于人二倍体细胞，33和35培养，收获制成，经检定后用于生产，并已有多个代次毒种制备疫苗，证明此毒种具有良好的传代稳定性。1.3  培养液及维持液  MEM为基础液，加入适当比例的灭能小牛血清，碳酸氢钠调pH值。1.4  疫苗液  199液，pH值为7.47.5。2  方法2.1  单层法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）&#

4、160; 单层人二倍体细胞2BS株按1：21：4传代，接种2L克氏瓶，加入细胞培养液，180ml/瓶，置37培养。当人二倍体细胞长成单层时，换成细胞维持液，200ml/瓶，再加入毒种，毒种的感染剂量（MOI）为1：100。将感染病毒的细胞瓶置35培养，此方法称为单层法。当细胞病变达50%以上时，用400ml Earles液冲洗细胞面，去除小牛血清，加入疫苗液，200500ml/瓶，置35培养。当细胞病变达90%以上时，收到4冷库。在4冷库释放病毒1周，按0.3%加入人血白蛋白作保护剂，抽样检定。检定合格后，加入蔗糖明胶稳定剂及长8号微量保护剂，采用适宜的冻干曲线冻干。2.2 

5、; 同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）  单层人二倍体细胞2BS株按1：2传代，毒种的感染剂量（MOI）为1：1000。将细胞、病毒和培养液同时分装到10L瓶中（即同时法），2000ml/瓶，置35旋转培养，转瓶机转速为78r/h。当细胞病变达50%以上时，用3000ml Earles液冲洗细胞面，去除小牛血清，加入疫苗液，20005000ml/瓶，置35旋转培养。当细胞病变达90%以上时，收冷到4冷库转瓶机上。在4冷库释放病毒1周，按0.3%加入人血白蛋白作保护剂，抽样检定。检定合格后，加入蔗糖明胶稳定剂及长8号微量保护剂，采用适宜的冻干曲线冻干。2.3&

6、#160; 无菌试验、鉴别试验、异常毒性试验、水分、物理检查  按2005年版中国药典三部进行常规检定2。2.4  牛血清白蛋白残留量检测  采用放射免疫法。应不高于50ng/剂。2.5  病毒滴度及热稳定性试验（37 7d）  采用微量细胞病变法。成品病毒滴度及37放置7天前后均不低于3.3 LgCCID50/ml，37放置7天后病毒滴度下降不得超过1.0 Lg。 3  结果3.1  麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）成品检定3.1.1 

7、 不同培养方法制备的麻疹减毒活疫苗基础滴度及热稳定性的比较  单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及热稳定性均达到2005年版中国药典三部的要求，见表1。表1  单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及热稳定性（略）    经统计学处理，t值分别为1.51、1.49，P均0.05，差异无显著性，因此，单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及热稳定性无区别，两种方法均可以用于疫苗生产。3.1.2  不同代次毒种制备的麻疹减毒活疫苗(人二倍体细胞)

8、基础滴度及热稳定性  分别以不同代次的毒种制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞），其基础滴度及热稳定性均符合2005年版中国药典三部的要求，结果见表2。表2  不同代次毒种制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）基础滴度及热稳定性（略）     9代、10代、11代毒种制备出的疫苗基础滴度及37稳定性均达到2005年版中国药典三部的要求，因此不同代次的毒种均可以制备疫苗。3.1.3  不同培养方法制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）牛血清白蛋白残留量检测  单层法与同时法制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细