202X版高考生物总复习考点加强课7课件中图版

1、重点题型重点题型1目标微生物的筛选与鉴定目标微生物的筛选与鉴定1.分离微生物的原理与措施分离微生物的原理与措施(1)原理：自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物应首先采用原理：自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物应首先采用的方法是将单个的微生物与其他微生物分离，再给该微生物提供合适的营养和条件的方法是将单个的微生物与其他微生物分离，再给该微生物提供合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。，使其生长成为可见的群体。(2)常用措施常用措施接种过程中尽量使微生物分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。接种过程中尽量使微生物分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。运

2、用选择培养基的作用特点，在培养基中添加某种特定的物质，抑制不需要的微运用选择培养基的作用特点，在培养基中添加某种特定的物质，抑制不需要的微生物的生长，促进所需微生物的生长。生物的生长，促进所需微生物的生长。2.选择培养基四种常见制备方法或实例选择培养基四种常见制备方法或实例【例证】【例证】 (2017全国卷全国卷，37)某些土壤细菌可将尿素分解成某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和和NH3，供植物吸收，供植物吸收和利用。回答下列问题：和利用。回答下列问题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生。能 分 解 尿 素 的 细 菌

3、 不 能 以 尿 素 的 分 解 产 物能 分 解 尿 素 的 细 菌 不 能 以 尿 素 的 分 解 产 物 C O2作 为 碳 源 ， 原 因 是作 为 碳 源 ， 原 因 是_，但 可 用 葡 萄 糖 作 为 碳 源 ， 进 入 细 菌 体 内 的 葡 萄 糖 的 主 要 作 用 是但 可 用 葡 萄 糖 作 为 碳 源 ， 进 入 细 菌 体 内 的 葡 萄 糖 的 主 要 作 用 是_(答出两点即可答出两点即可)。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择(填填“尿素尿素”“”“NH4NO3”或或“尿素尿素NH4NO3”)作

4、为氮源，不选择其他两组的原因是作为氮源，不选择其他两组的原因是_。(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和和Na2HPO4，其作用有，其作用有_(答出两点即可答出两点即可)。 解析解析(1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。能分解尿素的只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。能分解尿素的细菌是一种分解者，属于异养型生物，不能以尿素的分解产物细菌是一种分解者，属于异养型生物，不能以尿素的分解产物CO2作为碳源。能分作为碳源。能分解尿素的细菌可以以葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是：一方解尿素的细菌可以以葡萄糖

5、作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是：一方面可氧化分解为细胞生命活动提供能量，另一方面其代谢中间产物可为多种有机物面可氧化分解为细胞生命活动提供能量，另一方面其代谢中间产物可为多种有机物的合成提供原料。的合成提供原料。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择以尿素作为唯一氮源的选为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择以尿素作为唯一氮源的选择培养基，而其他两组都含有含氮物质择培养基，而其他两组都含有含氮物质NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用的细菌都能利用NH4NO3不能起到筛选作用。不能起到筛选作用。 (3)用

6、来筛选分解尿素细菌的培养基含有用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和和Na2HPO4，其作用：，其作用：KH2PO4和和Na2HPO4构成缓冲液，可维持培养基的构成缓冲液，可维持培养基的pH相对稳定；相对稳定；KH2PO4和和Na2HPO4能为微生能为微生物生长提供无机盐离子。物生长提供无机盐离子。 答案答案(1)脲酶分解尿素的细菌是异养生物，不能利用脲酶分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物为细来合成有机物为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料(2)尿素其他两组都含有尿素其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细

7、菌和不能分解尿素的细菌都能利用，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起，不能起到筛选作用到筛选作用(3)为细菌生长提供无机盐离子，作为缓冲剂保持细胞生长过程中为细菌生长提供无机盐离子，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定稳定 (2019天津市调研天津市调研)下面是筛选抗链霉素大肠杆菌的实验步骤及相关图解。下面是筛选抗链霉素大肠杆菌的实验步骤及相关图解。实验步骤：实验步骤：把大量对链霉素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培养基把大量对链霉素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培养基1的表面，进行培养。的表面，进行培养。待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养基待

8、其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养基2上，随即再影印上，随即再影印到含有链霉素的培养基到含有链霉素的培养基3上，进行培养。上，进行培养。在培养基在培养基3上出现了个别抗链霉素的菌落，将其挑选出。上出现了个别抗链霉素的菌落，将其挑选出。请回答：请回答：(1)配制培养基时除了满足基本的营养条件外，还需满足微生物生长对特殊营养物质、配制培养基时除了满足基本的营养条件外，还需满足微生物生长对特殊营养物质、的要求。的要求。(2)从功能上看，含有链霉素的培养基属于从功能上看，含有链霉素的培养基属于培养基。若在培养基中加入伊红和美培养基。若在培养基中加入伊红和美蓝，则培养皿中长出的菌落颜色

9、为蓝，则培养皿中长出的菌落颜色为。由图可知，。由图可知，1号培养基接种的方法为号培养基接种的方法为_。 (3)对对2和和3进行比较，在进行比较，在2上找到与上找到与3上相应的菌落，挑取其中一个菌落接种到上相应的菌落，挑取其中一个菌落接种到 (填填“含链霉素含链霉素”或或“不含链霉素不含链霉素”)的培养基上，如果有较多的菌落出现，则说明该抗性的培养基上，如果有较多的菌落出现，则说明该抗性基因突变发生在该菌接触链霉素之基因突变发生在该菌接触链霉素之(填填“前前”或或“后后”)。(4)3中的菌落比中的菌落比1、2中的菌落少很多，这说明了基因突变具有中的菌落少很多，这说明了基因突变具有的特点。的特点。

10、 解析解析(1)配制培养基时在提供几种基本营养条件的基础上，还需满足微生物生长对配制培养基时在提供几种基本营养条件的基础上，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。、特殊营养物质以及氧气的要求。(2)链霉素是抗生素，对大肠杆菌具有选择作用链霉素是抗生素，对大肠杆菌具有选择作用。在伊红和美蓝培养基上。在伊红和美蓝培养基上.大肠杆菌菌落颜色为黑色。由题图可知，大肠杆菌菌落颜色为黑色。由题图可知，1号培养基接种号培养基接种的方法为稀释涂布平板法。的方法为稀释涂布平板法。(3)培养基培养基2和培养基和培养基3上相同的菌落，是具有相同性状的上相同的菌落，是具有相同性状的大肠杆菌形成的，将培

11、养基大肠杆菌形成的，将培养基2中一个相应菌落接种到含链霉素的培养基上，若出现较中一个相应菌落接种到含链霉素的培养基上，若出现较多的菌落，则说明该抗性基因突变发生在该菌接触链霉素之前。多的菌落，则说明该抗性基因突变发生在该菌接触链霉素之前。(4)抗链霉素性状是抗链霉素性状是大肠杆菌基因突变后获得的性状大肠杆菌基因突变后获得的性状.3号培养皿中的菌落比号培养皿中的菌落比1号、号、2号中的菌落少很多，号中的菌落少很多，这说明了基因突变频率很低。这说明了基因突变频率很低。 答案答案(1)pH氧气氧气 (2)选择黑色稀释涂布平板法选择黑色稀释涂布平板法(3)含链霉素前含链霉素前 (4)频率低频率低/低频

12、性低频性影印法接种的具体过程是：将待测的浓缩菌悬液涂在合适的平板上，等其长好影印法接种的具体过程是：将待测的浓缩菌悬液涂在合适的平板上，等其长好后作为母平板后作为母平板(每个平板上的菌落控制在每个平板上的菌落控制在30300个个)；用一小块灭菌的丝绒固定；用一小块灭菌的丝绒固定在直径较平板略小的圆柱形木块上，构成印章在直径较平板略小的圆柱形木块上，构成印章(即接种工具即接种工具)；然后把长有菌落的；然后把长有菌落的母平板倒置在丝绒的印章上，轻轻印一下；再把此印章在另一含有选择培养基母平板倒置在丝绒的印章上，轻轻印一下；再把此印章在另一含有选择培养基的平板上轻轻印一下，经培养后，选择培养基平板上

13、长出的菌落与母平板上的的平板上轻轻印一下，经培养后，选择培养基平板上长出的菌落与母平板上的菌落位置对应，比较影印平板与母平板上菌落生长情况，即可从相应位置的母菌落位置对应，比较影印平板与母平板上菌落生长情况，即可从相应位置的母平板上选出待测的突变型菌落。影印法最初是为证明微生物的抗药性突变是自平板上选出待测的突变型菌落。影印法最初是为证明微生物的抗药性突变是自发的、与相应的环境因素无关而设计的接种方法，目前已广泛应用于营养缺陷发的、与相应的环境因素无关而设计的接种方法，目前已广泛应用于营养缺陷型微生物的筛选以及抗药性菌株筛选等研究工作中。型微生物的筛选以及抗药性菌株筛选等研究工作中。 重点题型

14、重点题型2微生物的分离与计数微生物的分离与计数微生物计数的方法专项归纳微生物计数的方法专项归纳1.间接计数法间接计数法(也叫活菌计数法也叫活菌计数法)常用的是稀释涂布平板法。常用的是稀释涂布平板法。(1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。个活菌。(2)操作：操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列设置重复组，增强实验的说服力与

15、准确性。将待测样品经一系列10倍稀倍稀释，选择三个稀释度的菌液，分别取释，选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布于整个平板表面，放在适宜的温度下培养，计算菌落数。为使结涂布器将菌液涂布于整个平板表面，放在适宜的温度下培养，计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度的样液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培果接近真实值，可将同一稀释度的样液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。养，计算出菌落平均数。 为了保证结果准确，一般选择菌落数为为了保证结果准确，一般选择菌落数为30300个的平

16、板进行计数，若设置的重复个的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。计算公式：每克样品中的细菌数计算公式：每克样品中的细菌数(C/V)M，其中，其中C代表某一稀释度下平板上生代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。代表稀释倍数。 提醒提醒此种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在此种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌

17、落。一起时，平板上观察到的只是一个菌落。2.显微镜直接计数法显微镜直接计数法(1)原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特生物的数量，但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定面积定面积(1 mm2)和高和高(0.1 mm)的计数室，在的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成的面积里又被划分成25个个(或或16个个)中中格，每个中格进一步划分成格，每个中格进一步划分成16个个(或或25个个)小格，但计数室

18、都是由小格，但计数室都是由400个小格组成的。个小格组成的。(2)操作：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再将稀释的样品滴在计数板上，稍操作：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再将稀释的样品滴在计数板上，稍等片刻，待细菌全部沉降到计数室底部再在显微镜下统计等片刻，待细菌全部沉降到计数室底部再在显微镜下统计45个中格中的细菌数，个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。并求出每个小格所含细菌的平均数，再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。(3)计算公式：每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数计算公式：每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数40010 00

19、0稀释倍数稀释倍数。 3.滤膜法滤膜法以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例，将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例，将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色，可根据培养基美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。【例证】【例证】 (2018经典高考经典高考)酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培

20、养，这样既可减少污染又的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。如可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。如图所示为操作流程，请回答下列问题：图所示为操作流程，请回答下列问题：(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的养基的，及时对培养基进行分装，并进行，及时对培养基进行分装，并进行灭菌。灭菌。(2)取步骤取步骤中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤中不同

21、梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤中将温度中将温度约约(在在25 、50 或或80 中选择中选择)的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。培养。 (3)挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤所示进行划线。下列叙述合理的有所示进行划线。下列叙述合理的有。a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量挑取菌落时，应挑取

22、多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株(4)步骤步骤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和供供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1 000倍后，经等体积台盼蓝染液染色倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用，用2516型血细胞计数板计数型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上个中格中的细胞数，理论上色细胞的个数色细胞的个数应不少于应不少于，才能达到每毫升，才能达到每毫升3109

23、个活细胞的预期密度。个活细胞的预期密度。 解析解析(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称取各组分，之后溶解定容，再调节配制培养基时，按照培养基配方准确称取各组分，之后溶解定容，再调节培养基的培养基的pH，一般情况下，采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。，一般情况下，采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。(2)对培养基进对培养基进行高压蒸汽灭菌后，需将温度降至行高压蒸汽灭菌后，需将温度降至50 左右后倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。左右后倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。(3)在对酵母菌进行划线纯化时，为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭在对酵母菌进行划线纯化时，为保证无菌操作，接种针、接

24、种环使用前都必须灭菌；且在划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落；本实验是为了获菌；且在划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落；本实验是为了获得能以工业废甲醇作为碳源的酵母，故在实验过程中可以通过逐步提高培养基中甲得能以工业废甲醇作为碳源的酵母，故在实验过程中可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇耐受株。醇的浓度，获得甲醇耐受株。(4)酵母菌是兼性厌氧型真菌，有氧条件下大量繁殖。酵母菌是兼性厌氧型真菌，有氧条件下大量繁殖。酵母菌扩大培养时，需保证充足的营养和氧气供应。酵母菌扩大培养时，需保证充足的营养和氧气供应。“用等体积台盼蓝染液染色用等体积台盼蓝染液染色”，即计数

25、室中培养液体积实际只有，即计数室中培养液体积实际只有0.120.05 mm3，设，设5个中方格中无色个中方格中无色(活细胞不活细胞不被台盼蓝染色被台盼蓝染色)的细胞数目为的细胞数目为x个，则个，则3109x/5251 0001 0000.05，解得，解得x30。 答案答案(1)pH高压蒸汽高压蒸汽(湿热湿热)(2)50 (3)a、b、d(4)氧气无氧气无30 1.(2018山东烟台一模山东烟台一模)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离和培养等工作。回答下列问题：细菌含量，并进行了细菌分离和培养

26、等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。为了检测培养基平板灭菌是否该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种前，合格，可在涂布接种前，；然后，将；然后，将1 mL水样稀释水样稀释1 000倍，倍，在在3个平板上用涂布法分别接入个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分个平板上的菌落数分别为别为39、38和和37，据此可得出每升水样中的活菌数为，据此可得出每升水样中的活菌数为。 (2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过该小组采用平板划线法分

27、离水样中的细菌。操作时，接种环通过灭菌，灭菌，为了将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落，在第二次及以后的划线时，一定要为了将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落，在第二次及以后的划线时，一定要。示意图。示意图A和和B中，中，表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。通表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。通常，对获得的纯菌种可以依据常，对获得的纯菌种可以依据对细菌进行初步的鉴定和对细菌进行初步的鉴定和分类。分类。(3)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振

28、荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中其原因是：振荡培养能提高培养液中的含量，同时可使菌体与培养液充分的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高接触，提高的利用率。的利用率。解析解析(1)为了确定培养基的灭菌是否合格，可以随机取若干灭菌后的空白平板培养为了确定培养基的灭菌是否合格，可以随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成。由题意知一段时间，观察培养基上是否有菌落生成。由题意知1 mL水样中的菌落数是水样中的菌落数是(393837)30.11 0003.81

29、05，每升水样中的活菌数为，每升水样中的活菌数为3.81051033.8108。(2)接种环用灼烧法进行灭菌。在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端接种环用灼烧法进行灭菌。在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是：通过划线次数的增加，将聚集的菌体逐渐稀释分散，开始划线，这样做的目的是：通过划线次数的增加，将聚集的菌体逐渐稀释分散，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便获得由单个细胞繁殖而来的单个菌落。图使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便获得由单个细胞繁殖而来的单个菌落。图A是用平板划线法接种培养后得到的结果，图是用平板划线法接种培养后得到的结果，图B表示的是用稀释涂布平板法接种培表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。可以依据菌落的形状、大小等特征对细菌进行初步的鉴定和分类养后得到的结果。可以依据菌落的形状、大小等特征对细菌进行初步的鉴定和分类。(3)振荡培养可以增加液体培养基的氧气含量，促进好氧型微生物的生长；同时还振荡培养可以增加液体培养基的氧气含量，促进好氧型微生物的生长；同时还能使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。能使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。 答案答案(1)随机取