胸腺肽联合狂犬病疫苗接种对机体产生γ-干扰素、白细胞介素-2和中和抗体影响的研究.docx

1、-550-PADKINA.GOLDFRADC,BRADYAK,etal.Epidemiologyofseveresepsisoccurringinthefirst24hoursin1CUinEngland,WalesandNorthernIrelandJ.CritCareMed,2003,31(9)：2332-2338.6 STEPHANEH.SAXH,PHIUPPEEA,etal.NosocomialBloodstreaminfectionandclinicalsepsisJ.Emerginfectdis,2004,10(1)：76-81.8jNGUYENHB,C()RBE'ITSW

2、,STEELER,etal.ImplementationofabundleofqualityindicatorsfortheearlymanagementofseveresepsisandsepticshockisassociatedwithdecreasedmortalityJ.CritCareMed,2007,35(4)：】105-1112.9严静,刘大为.降低严重感染与感染性休克的病死率:机遇与挑战并口.中国危重病急救医学,2007,19(3):插页.10：CARTERC.ImplementingtheseveresepsiscarebundlesoutsidetheICUbyoutre

3、achJ.NursCritCare,2007,12(5):225-230.11 RIVERSE.NGUYENB.HAVSTADS.Earlygoal*directedtherapyinthetreatmentofseveresepsisandsepticshockJ.NEnglNMed,2001,345:1368-1377.12严静.严重脓漆症早期目标指导性治疗:亟待规范J.中国实用外科杂志,2009,29(12)：974-975.13纪国业，王斌，杜江，等.不同时间血液灌流对脓漆症兔血IL-6及TNE-a的影响J.现代医学,2011,39(2)：129-133.14李国民，吴晶，袁冬，等.去

4、甲肾上腺紊联合左西蒙旦或多巴酚胺对脓毒性休克猪的影响J.东南大学学报：医学版,2011,30(6):892-895.15戴林峰，王醒.脓毒症与凝血功能异常JL东南大学学报:医学版,2012,31(3):359-362.16陈齐红，郑瑞强，林华，等.感染性休克集束治疗对病死率影响的前船性研究J.中国危重病急救医学,2008,20(9):534-537.17郭琦，黎敏毅,农凌波，等.严重感染集束治疗的依从性研究J.中国危重病急救医学.2009,21(1):8-12.论著.胸腺肽联合狂犬病疫苗接种对机体产生y干扰素、白细胞介素2和中和抗体影响的研究顾小军，沈玲，黄英(东南大学附典第二医院内科，江苏南

5、京210003)摘要目的：观察胸腺肽联合狂犬病疫苗接种对机体”干扰素、白细胞介素-2和中和抗体产生的影响。方法：II级以下狂犬病暴露人群100例随机分为两组：疫苗组50例，单用狂犬疫苗2.5U,常规免疫程序接种；胸腺肽组50例，给予50mg单剂量肌肉注射+狂犬疫苗2.5U,常规免疫程序接种。在注射前(IX)、注射7d(D7)、注射6个月(M6)、注射12个月(M12)测定外周血淋巴细胞总数及干扰素、白细胞介素-2水平，注射7d、注射6个月、注射12个月测定中和抗体水平。结果：外周血淋巴细胞总数两组间无差异；胸腺肽组在注射后7d白细胞介素-2水平和广干扰素水平均高于疫苗组(P<0.05)；

6、胸腺肽组在注射后7d中和抗体产生量高于疫苗组(P<0.05)。结论:加用胸腺肽组注射后7d中和抗体水平高于单用疫苗组，但6个月和12个月的抗体含量没有差异；两组接种后体内白细胞介素-2和y-干扰素水平皆增高，白细胞介素-2增加的程度和抗体的产生量呈正相关。关键词中和抗体；y-干扰素；白细胞介索-2；胸腺肽；狂犬疫苗；快速荧光灶抑制试验中图分类号R512.99文献标识码A文章编号1671-6264(2012)05-0550-05I收稿日期.2012-03-23修回日期2012-06-07I基金项目南京市卫生局课题(ykkO8121)作者简介顾小军(I970-).刃，江苏泰兴人，副主任医师，

7、医学硕士。E-mail：999gu163.coni顾小军，等.胸腺肽联合狂犬病疫苗接种对机体产生y-干扰素、白细胞介素-2和中和抗体影响的研究-551doi：10.3969/j.issn.1671-6264.2012.05.004Studyofthymosincombinationwithrabiesvaccineinpostexposurepatientsinfluencedthelevelsofyinterferon,interleukin-2andneutralizingantibodyGUXiao-jun,SHENLing,HUANGYing(DepartmentofInternalM

8、edicine,theSecondHospitalAffiliatedtoSoutheastUniversity,Nanjing210003,China)Abstract,Objective:Toobservetheeffectofy-interferontinterleukin-2andneutralizingantibodylevelsinpatientswithrabiesvaccinationcombinationwiththymosin.Methods:100patientsweredividedintotwogroups.Thevaccinegroup,50casesofrabie

9、spostexposurepatientsweregivenvaccine2.5U,routineimmunizationprocedures；thethymosingroup,50casesweregivenasingledoseofthymosin50mgeachwithrabiesvaccine2.5Utogether.Bloodserumsweremaintainedbeforeinjection(DO),onthe7days(1)7),on6month(M6)and12month(M12).y-interferon,interleukin-2andneutralizingantibo

10、dyandlymphocytecountweredetectedtogether.Results:Nolymphocytecountsdifferenceswasfoundintwogroups.Leukocyteinterleukin-2andinterferon-ylevelsinthymosingroupat7daysafterinjectionwerehigherthanthoseinthevaccinegroup(P<0.05).Neutralizingantibodylevelwassignificantlyhigherinthymosingroupthaninvaccine

11、groupsonD7.Conclusion:ThelevelsandpositiverateofneutralizingantibodiesinthymosingrouparehigherthanthoseinvaccinegrouponD7,bulthereisnodifferenceonM6andM12.Interleukin-2andy-interferonlevelsareincreasedafterinoculationvaccine,thelevelofinterleukin-2increasedandtheamountofantibodyproductionispositivel

12、ycorrelated.LKeywordsneutralizingantibody；y-interferon；interleukin-2；thymosin；rabiesvaccine;rapidfluorescentfocusinhibitiontest种;胸腺肽组50例，在疫苗组基础上首针加用单剂量:胸腺肽50mg肌肉注射。1.2试剂胸腺肽50mg支"，长春普华制药生产；狂犬病疫苗2.5U支"，赛诺菲巴斯德公司生产。1.3实验方法狂犬病是由狂犬病病毒引起的人畜共患传染病,病死率100%，全世界每年有6万人死于该病，近几年每年约12001500万人接受狂犬病病毒暴露后接种目

13、前降低暴露后病人发病最关键和最有效的方法就是实施暴露后狂犬病疫苗免疫。在紧急暴露患者，特别是潜伏期较短的患者，如何使机体尽快产生抗狂犬病病毒的保护性中和抗体,或者在抗体产生前机体具有一定的抵抗力是宜接关系到免疫成败的关键o有研究"勺显示胸腺肽可加强狂犬病疫苗的接种效果，我们使用单剂地胸腺肽联合狂犬病疫苗进行接种，对其增强狂犬病疫苗的疗效进行观察和研究。1对象和方法1.1研究对象及分组狂犬病暴露后的人群中n级咬伤者loo例，年龄18-59岁，身体健康，无不良嗜好。分成疫苗组50例.单独给予狂犬病疫苗2.5U.按0、3、7、14、28接在注射前(D0)、注射后7d(D7)、注射6个月、注

14、射12个月测定外周血淋巴细胞总数、广干扰素(IFN-y)、白细胞介素-2(IL-2)水平，在注射后7d、注射6个月、注射12个月测定中和抗体水平。外周血淋巴细胞总数采用全血细胞计数仪计数，由本院检验中心完成。IL-2和IFN-y含量测定采用双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定，试剂购自上海森雄科技实业有限公司，严格按照试剂盒说明书操作。IL-2最低检测值为16pg*ml,IFN-y最低检测值为>8pg-mP'o中和抗体测定采用快速荧光灶抑制试验(RFFIT),按参考文献6使用的方法检测，具体操作由武汉生物制品研究所进行C1.4统计学处理数据以*表示，采用SPSS19.0软件

15、和EXCEL2007进行分析，计量:资料的比较采用£检验，阳性率的比较采用卡方检验,P<0.05为差异有统计学意义°2结果2.1实验前后两组外周血淋巴细胞总数比较两组组内及组间各时间点外周血淋巴细胞总数无差异（”>0.05）,见表1。表1各组外周血淋巴细胞测定结果（x±s）x109L*不同时间点淋巴细胞总数DOD7M6MI2疫苗组2.04±0.571.95±0.492.04土0.392.01±0.42胸腺肽组1.97±0.651.93±0.381.98±0.361.87±0.312.

16、2两组不同时间点血清IL-2水平的比较疫苗组在注射后6个月IL-2水平升高，与注射前、注射后7d相比差异有统计学意义（P<0.01）；注射后12个月IL-2水平恢复至注射前水平，与注射后6个月相比差异有统计学意义（P<0.0l）o胸腺肽组IL-2水平在注射后7d开始升高（P<0.01）,7d与6个月差异无统计学意义（只>0.05）；注射后12个月下降至注射前水平，与注射后7d、6个月比较，差异有统计学意义（P<0.01）o两组间IL-2的水平在注射前、注射后6个月、12个月差异无统计学意义（P>0.05）,注射后7d胸腺肽组1L-2水平与疫苗组比较差异有统计

17、学意义（P0.05）°见表2。2.3两组不同时间点IFNy水平的比较疫苗组IFN”水平在注射后7d明显升高，与注射前比较差异有统计学意义（P<0.01）,注射后6个月与注射后7d相比，IFN-y水平有所下降（<0.05）,注射后12个月降至注射前水平。胸腺肽组注射后7d及6个月，IFN->水平明显升高（P<0.01）,注射后12个月恢复至注射前水平。胸腺肽组IFN-y水平在注射后7d明显高于疫苗组（P<0.05）,其它时间点两组差异无统计学意义（/>>0.05）。见表3。表2两组不同时间点IL-2水平的比较（x±s,=50）与同组M

18、6比较,aP<0.01；与同组D7及M6比较,bP<0.01;与疫苗组同时点比较,cP<0.01组别不同时间点IL-2的水平D0D7M6M12疫苗祖62.00±13.07*59.83±8.35*70.76±12.4460.26±13.】0.胸腺肽组59.79±15.50b65.53±14.00*70.27±11.9058.70±17.03、表3两组不同时间点IFN-y的比较（X±s,=50）pgmL组别不同时间点IFN-水平IX)D7M6M12疫苗组胸腺肽组15.35±3.03

19、"17.92±2.66*16.67±3.50b14.72±2.9!"15.49±1.85d19.05±2.73*16.57±2.2414.90±1.98*与同组D7比救,aP<0.01,bP<0.05；与同组M6比较,cP<0.05;与同组1）7、M6比较,dP<0.01；与疫苗组同时点比较,e"<0.052.4两组不同时间点抗狂犬中和抗体水平的比较两组组内各时间点比较，中和抗体水平差异均有统计学意义（尸<0.01）;胸腺肽组在注射7d时中和抗体水平明显高于疫

20、苗组（P<0.01）,在注射后6个月和12个月与疫苗组比较差异无统计学意义（P>0.05）o见表4。在注射后7d疫苗组中和抗体水平>0.5IUml"病例数为3例，胸腺肽组为10例，胸腺肽组抗体产生率高于疫苗组（/=4.33,P<0.05）。在注射后6个月两组都能产生右效抗体，阳性率是异无统计学意义（P>0.05）,12个月时抗体都有下降，两组问差异无统计学意义（P>0.05）o表4两组不同时间点抗狂犬病中和抗体水平的比较（x±s,n=50）IUmL组别不同时间点中和抗体水平D7M6M12疫苗组0.46±0,11*4.07

21、7;1.13*0.68±0.38*阊腺肽组0.51±0.13少4.55±1.37,0.72±0.21*同组不同时点相比,aP<0.01；与疫苗组同时点相比,"<0.01顾小军，等.胸腺肽联合狂犬病疫苗接种时机体产生干扰素、白细胞介素-2和中和抗体影响的研究5532.5IL-2、yIFN和中和抗体的动态变化两蛆体内IL-2水平在注射后7d开始上升，到6个月时进一步上升，到12个月时基本恢复正常，见图1。DOD7M6MI2DOD7M6MI2050505877665一E芸霎3与疫苗组比较,aP<0.01图1两组血清IL-2水平的动态

22、变化两组体内IFN-y在注射后7d上升明显，到6个月时仍高于接种前，到12个月时恢复正常，见图2。4208642022211111_§差该«卜作-4208642022211111_§差该«卜作-与疫苗组比较,aP<0.05图2两组血清IFN-y水平的动态变化两组中和抗体在接种后7d即有上升,6个月时最高，12个月时下降明显,但高于7d时的水平，见图3。765432101，£fH/H-畏给蝠证子一765432101，£fH/H-畏给蝠证子一图3两组血清中抗狂犬中和抗体水平的动态变化2.6中和抗体和其他指标的相关性疫苗组中和抗体与【

23、L-2水平的Pearson值为0.395(P<0.01),与淋巴细胞总数的Pearson值为0.146(?>0.05),与IFN-y的Pearson值为0(P>0.05)o胸腺肽组中和抗体与IL-2水平的Pearson值为0.235(P<0.01),与淋巴细胞总数的Peareon值为0.022(P>0.05),与IFN-y的Pearson值为0.011(P>0.05)o2.7疫苗和胸腺肽的安全性评估所有病例皆无明显的不便反应，注射部位红肿23例(疫苗组1】例，胸腺肽组12例)，低热15例(疫苗组7例，胸腺肽组8例)，乏力12例(疫苗组7例，胸腺肽组5例)，无

24、其他严重不良反应，两组比较不艮反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。3讨论研究显示，狂犬病病毒暴露前免疫接种有利于狂犬病的预防。对于腥犬病紧急暴露后的处理措施,目前降低暴露后人群发病最关键和最有效的方法就是实施暴露后狂犬疫苗免疫。患者在紧急狂犬病暴露时，尤其是明确的狂犬咬伤，要严格遵照动物咬伤的处理顺序，局部伤口处理、疫苗接种和抗狂犬血清/免疫球蛋白缺一不可，II级伤口使用狂犬疫苗，III级伤口使用狂犬疫苗加抗狂犬免疫球蛋白。但尽管如此，在全国各地仍有严格按照预防接种程序处理后仍然发病的病例发生，其中免疫功能低下、有慢性消耗性疾病等都会影响抗体的产生"们。在紧急暴露人群，

25、特别是潜伏期较短者,如何使机体尽快产生抗狂犬病病毒的保护性中和抗体，或者在抗体产生前机体具有一定的抵抗力是直接关系到免疫成败的关键。胸腺肽是-种很好的免疫调节剂，主要增强机体的免疫功能，能连续诱导T淋巴细胞分化、成熟、发育，使CD4+T细胞数目增加；增强IL-2受体的表达,增强自然杀伤细胞的能力，调节内分泌。不同剂后的胸腺肽对机体免疫功能的调节也不同，较低剂靖产生免疫促进作用，较高剂晴产生免疫抑制作用)。Cardenas等研究发现在小鼠感染狂犬病模型中,胸腺是最易受伤的的淋巴器官,小鼠死亡前胸腺细胞呈现高水平的CD4或CD8表达,胸腺萎缩明显，淋巴细胞凋亡。免疫低下或胸腺萎缩的人群接种疫苗效果

26、较差*。史秀山等w厂使用小鼠研究发现加用单剂技胸腺肽(2mg只”)后抗体效价高且抗体产生时间早，抗体水平高，减少免疫次数；而使用转移因子则只能增强狂犬病疫苗免疫的效果，不能减少免疫次数。我们使用单剂量(1mg-kg'1)胸腺肽联合狂犬病疫苗X寸II级咬伤的狂犬病暴露后人群进行预防接种，动态观察IL-2JNE-y水平和中和抗体含检的变化，发现其能促进注射后7d中和抗体的产生，但不能延缓抗体的有效保护时间。IL-2可作用于T细胞、B细胞，调节B细胞的分化、增殖及功能,在疫苗接种产生相应抗体的过程中起着重要作用'W,如能够降低免疫缺陷患者接种疫苗的副反应，提高免疫的效果，使小鼠产生抗

27、体的时间提前，抗体效价高'“J;因此,接种狂犬疫苗后体内几-2的水平可以用于评价狂犬病疫苗的保护力*,犬接种狂犬病疫苗后体内IL-2JFN-y水平皆出现明显上升3时。在本次研究中，两组接种疫苗后机体IL-2和IFN-丁水平皆有明显上升，加用单剂量胸腺肽能增加接种7d后的抗体含量，加快抗体产生的速度，对于狂犬病暴露者胸腺肽是安全的,可作为一种免疫增强剂用于狂犬病疫苗接种。参考文献1BLANTONJD,HANLONCA,RUPPRECHTCE.BabiessurveillanceintheUnitedStatesduring2006J.JAmVetMedAssoc,2007,231(4)：

28、540-556.2张永振.中国狂犬病流行病学特征及防制建议(：.全国人畜共患病学术研讨会论文集,2006年5月，北京：64-68.3WILDEH.Failuresofpost-exposurerabiesprophylaxisJ.Vaccine,2007,25(44)：7605-7609.4 史秀山.胸腺肽增强狂犬病疫苗免疫效果的研究iJj.中国热带医学,2004,4(5):703-704.5 史秀山.转移因子增强狂犬病疫苗免疫效果的研究J.中国人件共患病杂志,2004,20(11)：986-988.6 程潢荣，徐葛林，吴杰，等.RFEIT和MNT检测抗狂犬病毒中和抗体的比较研究J.中国人冉共

29、患病学报,2009,25(1):30-33.VIENNC.FEROLD1E.LANGJ.Long-termanti-rabiesantibodypersistencefollowingintramuscularorlow-doseintradermalvaccinationofyoungVietnamesechildrenJ.TransRSocTropMedHyg,2008,102：294-296.8魏洪霞，姚文虎.徐永林，等.近16年南京市第二医院收治传染病病种的回顾性分析J.现代医学,2011,39(2)；191-193.9JRODRlGUEZ-ROMOR,MORALES-BUENROST

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